IQC经验介绍

PCR实验室质控经验介绍安徽省临床检验中心凡任芝一、回顾二、内部质量保证，IQC数据实验室间比对三、性能验证四、外部质量保证ClinicalmicrobiologyViralload(e.g.HIV,HCV,HBV)Bacterialload(e.g.EHEC,Salmonella,Mycobacterium)VeterinarymicrobiologyViralload(e.g.FIV,CSFV,FCV)ZoonoticagentsClinicaloncologyMinimalresidualdiseaseChromosomaltranslocations一、回顾)Fungalload(e.g.Candida,Cryptococcus,Aspergillus)FoodmicrobiologyBacterialload(e.g.Listeria,Salmonella,Campylobacter)ChromosomaltranslocationsSinglenucleotidepolymorphisms(SNPs)GenetherapyGenetransferestimationBiodistributionofvectorsGeneexpressionCytokines,receptors,etc.Box2.Applicationsofreal-timePCRinmoleculardiagnosticsaANotethatthislistisnotexhaustive.一、回顾一、回顾(2006)95–125SchemeofRNAandDNAanalysisfrombiologicalsamplesSourcesofvariationareindicated.一、回顾–partI.JPharmBiomedAnal.2004;36:579–586withpermissionfromElsevier.一、回顾所有基因诊断检测及绝大多数其他分子检测都被归于高度复杂项目.(美国FDA)”目前及今后相当长一段时间内，我国的临床分子诊断操作仍将以手工操作为主.”(李金明.我国临床分子诊断试剂发展：问题及思考.)”问题及思考.)”众多问题发展速度快，且复杂性提高；分子检测的准确度；成本、检测时长；标准品、方法学及室间性能标准化；。。。繁琐操作步骤，易受内外因素影响的较多环节，需要建立严格全面的质量保证程序，常规条件下需建立每半年一次的性能验证并结合日常内部、系统比对等活动共同保证检测结果的准确性。二、内部质量保证，IQC数据实验室间比对IQC是由实验室的工作人员采用一系列统计学的方法，连续地评价本实验室测定工作的可靠程度，判断检验报告是否可发出的过程。室内质程度，判断检验报告是否可发出的过程。室内质控的目的是检测、控制本实验室测定工作的精密度，并检测其准确度的改变，提高常规测定工作的批间、批内标本检测结果的可靠性。样本阶段：样本类型、收集方式、处理过程、储藏。2.核酸提取阶段：提取功效、DNA完整度、纯度、储藏二、内部质量保证，IQC数据实验室间比对条件、DNA稳定性、内切酶效率。3.扩增阶段：探针类型、扩增仪器平台、光源、检测灵敏度。4.结果分析阶段：标准曲线样本、操作标准化程度、反应效率等。结合中心PCR实验室IQC开展情况，分以下内容交流探讨。一）、即刻法质控图表的应用一）、即刻法质控图表的应用二）、常规质控三）、IQC数据实验室间比对检测周期长的特点，特别某些实验室不是每天都做检测，在启用或更换仪器、质控物等检测条件变换的时需要重新做质控图，考虑成本-效益等原因，无法及时获取本实验室20次常规条件变异（RCV）一）、即刻法质控的应用及时获取本实验室20次常规条件变异（RCV）的数据去构建常规的质控图。采用即刻法（Crubbs氏法）做质控只需连续测定3次，即可对第3次检验结果进行检验和控制。法是一种离群值检验的统计方法。一组测定值中明显偏离测定值群体的过大值或过小值称为离群值，它既可能是一）、即刻法质控的应用过大值或过小值称为离群值，它既可能是测定结果随机波动的极值，也可能是与群体测定值非属同质总体的异常值。计算出测定结果（至少3次）的平均值（x）和标准差（s）。一）、即刻法质控的应用2.计算SI上限值和SI下限值：SI上限=（x最大值–x均值）/sSI下限=(x均值–x最小值)/s3.将每批计算出的SI上限值和SI下限值同SI界值表比对，得出结果。界值表（单侧检验）Nn3sn2snn3sn2s31.151.15122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.662.37一）、即刻法质控的应用51.751.67142.662.3761.941.82152.72.4172.11.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.5102.412.18192.852.53112.482.23202.882.56判断标准：1.如果SI上限和SI下限均位于相应的n2s的SI界值之内，则此事件发生的概率为95％，属正常状态，数据处于受控状态。2.如果SI上限和SI下限有一个超过相应n2s的SI界值并小一）、即刻法质控的应用于相应的n3s的SI界值，则此事件发生的概率为4.7％，属边缘状态，数据处于告警状态。3.如果SI上限和SI下限有一个超过相应的n3s，则此事件发生的概率为0.3％，小概率事件发生，属于不正常状态，处于失控状态。当数据处于失控和告警状态时，相应的基础数据（最大值或最小值）应当舍去，直到处于受控状态，进入下一步骤。氏法只是检验异常值且灵敏度低，易出现出现假受控和假失控现象等。这些都是常规Crubbs氏法的局限性，需要一）、即刻法质控的应用这些都是常规Crubbs氏法的局限性，需要进一步的改进。：离群值检验只是从数据组中检出异常值，并不考虑数据数列中n个数据的排列、趋势、链一）、即刻法质控的应用虑数据数列中n个数据的排列、趋势、链等现象、也不考虑数据获取“过程”是否合乎过程控制。：前三次测定对后续质控结果的影响1.前三次结果稳定，精密度较好，s、cv较小时，对后续结果要求亦高，易出现假失控。因为s较小一）、即刻法质控的应用的SI值较大易超过SI界值。这种错误称为α错误，也叫弃真错误。2.如前三次结果精密度差，s、cv较大时，对后续结果影响更大，因为s增大使SI值相对变小而出现假受控。这种错误也称为β错误，也叫存伪错误。：回顾性失控检出一个明显偏大或偏小的值经计算后被判为受控，在逐渐增加数据后才被“暴露”一）、即刻法质控的应用判为受控，在逐渐增加数据后才被“暴露”出来，这种当时不显示为失控而在后来才显示出来失控的现象被称为“回顾性失控检出”，也称为“迟滞判断”。这种现象为Crubbs氏法的一大不足之处。文献报道的解决办法：1.对前4次数据进行修匀处理（取均数），合理采集两次有效数据，减少了方差过大、过小出现的现象，从第5次开始进行质控。2.除运用Grubbs法则进行判断外，还增加即时累积到的±2s、±3s作为判断标准，将超过±2s的数据视为警一）、即刻法质控的应用±2s、±3s作为判断标准，将超过±2s的数据视为警告，超过±3s的视为失控删去。3.使用Grubbs法进行室内质控的项目多无法直接得到RCV，但可获得OCV20次数值的均值、s、cv，根据相关文献RCV/COV≤2的规则，用OCV的代替RCV的，OCV的2s或1.5s代替RCV的s，得到“假设”的RCV用于室内质控，特别是用于对前三次的质控数据予以监控，发现超过RCV±2s、±3s的，视为警告或失控。控制用质控图二）、常规质控3.质控图4.质控数据回顾性分析、分析用质控图在这期间，由于质控图框架（主要为均值、s等）其“合理性”有待商榷，随着二）、常规质控质控数据的累积，逐步分析修正到合理的状态。有报道生化检测中，分析质控图使用时间段为自开始即刻法质控开始后的5个月收集的有效质控数据。、控制用质控图随着质控数据的积累，其均值及S均达到较为稳定的状态，后续的质控图在检测二）、常规质控到较为稳定的状态，后续的质控图在检测条件无重大变化的情况下，可沿用这些值去构建质控图。均值二）、常规质控3.63.653.7一月二月三月四月五月六月七月L值累积均值变化趋势5.85.855.9一月二月三月四月五月六月七月M值累积均值变化趋势7.77.757.87.857.97.9588.058.1一月二月三月四月五月六月七月H值累积均值变化趋势均值、质控图1）Levey-Jennings质控图2）Z-分数质控图二）、常规质控3）其他，Youden图等建议：开展至少两个水平质控，用EXCEL等工具自己绘制质控图。）Levey-Jennings质控图二）、常规质控框架，概率。范围、偏移、趋势2）Z-分数质控图使用Z-分数质控图法可及时指示存在的误差的大小和性质，提高了检出误差的二）、常规质控的误差的大小和性质，提高了检出误差的能力，降低假失控的概率，并能将高、中、低不同浓度的质控血清测定值在同1张质控图上表示出来，直观性强。分数（Z-score）或标准差指数（standarddeviationindex,SDI）指的是测定结果偏离均值多数少倍的标准差。计算公式:二）、常规质控Z-分数表示为结果在不依赖浓度分布中所处的位置。△X/SDL中心PCR室数据Z-分数图-4-3-2-1001040507081112141518192125262829DATE△X/SDLMH二）、常规质控中心线均值0警告线±2s2失控线±3s3数据描点Xn（Xn-X均值）/s两类判异准则：（1）点出界就判异；二）、常规质控（2）界内点排列不随机判异。------王治国老师《临床检验质量控制》