DNA的粗提取和鉴定-市级公开课

§5.1DNA的粗提取与鉴定一、基础知识（一）提取DNA的方法1.提取DNA的基本思路利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA，去除其他成分（1）DNA的溶解性思考1：图中DNA溶解度最小的浓度是多少？2.DNA的理化性质（2）DNA不溶于酒精溶液DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。将DNA与蛋白质进一步分离。思考2：如何控制浓度达到让DNA析出的目的？0.14mol/L向NaCl溶液中加入蒸馏水，使其溶液浓度从2mol/L下降到0.14mol/L（3）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性①蛋白酶——水解蛋白质，对DNA没有影响②高温——大多数蛋白质不能忍受60～80℃而DNA在80℃以上才会变性③洗涤剂——溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质但对DNA没有影响（4）特定的颜色反应——鉴定DNA沸水浴条件下，DNA与二苯胺反应呈现蓝色。二、实验设计——问题导学问题讨论1：什么样的材料更适合提取DNA？对植物和动物细胞处理的方法是否相同？问题讨论2：去除滤液中的杂质即初步纯化粗提取DNA有哪几种方案，有什么不同？问题讨论3：DNA在酒精中析出时注意哪些问题才能确保得到白色丝状物？问题讨论4：鉴定DNA的具体方法是什么？在必修1教材实验中还用到哪种试剂来观察DNA在细胞中的分布二、问题导学问题讨论1：什么样的材料更适合提取DNA？对植物和动物细胞处理的方法是否相同？选用DNA含量相对较高的组织，易得易破裂如鸡血(加柠檬酸钠防止凝固)；或植物细胞如菜花需要加洗涤剂和食盐并充分搅拌和研磨。对应训练1：你认为下列提供的材料中哪些不适合提取DNA？洋葱、猕猴桃、大肠杆菌、猪血、鸡血。答案：大肠杆菌、猪血。大肠杆菌1条DNA，哺乳动物血红细胞不含细胞核和从多细胞器，没有DNA问题讨论2：去除滤液中的杂质即初步纯化粗提取DNA有哪几种方案，有什么不同？方案一：向滤液中加入2mol/l的NaCl,充分溶解DNA，过滤去除杂质，加入蒸馏水，使DNA析出直至析出物不再增加，过滤得到DNA析出物，去除溶液中的杂质。可反复多次溶解DNA去除杂质。再将析出物溶解到2mol/l的NaCl，用纱布过滤去杂质后，再向滤液中加入等体积的冷酒精进一步提纯方案二：直接向滤液中加入嫩肉粉，即木瓜蛋白酶，将滤液中的蛋白质分解。方案三：将滤液放在60－75度的恒温水浴箱中保温10－15min,严格控制温度。问题讨论3：DNA在酒精中析出时注意哪些问题才能确保得到白色丝状物？问题讨论4：鉴定DNA的具体方法是什么？在必修1教材实验中还用到什么别的试剂用来鉴定DNA呢？加入与滤液等体积、冷却的酒精，体积分数为95%，用玻璃棒轻缓地沿一个方向搅拌，卷起白色丝状物。先将丝状物溶解于2mol/l的NaCl溶液中溶解，再加入4ml二苯胺试剂，沸水浴中加热，与空白对照组对照比较颜色变化。三、书写DNA粗提取和鉴定的主要步骤要求：先写一句概括性话语，具体细节只写相关试剂和关键操作方法，要求写出此步骤中DNA在哪里？1、材料的选择2、破碎细胞释放DNA3、去除滤液中的杂质4、DNA的析出与鉴定DNA含量丰富的细胞含核物质DNA的滤液DNA再溶解在2mol/lNaCl中向2mol/lNaCl中加入冷酒精，让DNA析出物在沸水浴下与二苯胺反应显蓝色1．填写本实验完成下列实验操作时所用试剂。⑴提取鸡血细胞中核物质：⑵溶解核内DNA：⑶析出2mol/LNaCl溶液中的DNA：⑷DNA白色丝状物的析出：⑸DNA的鉴定：四、典型例题蒸馏水2mol/LNaCl加入蒸馏水95%冷酒精沸水浴中与二苯胺反应2、某同学在做DNA的粗提取与鉴定实验中，加入二苯胺鉴定的结果是有DNA的试管中溶液颜色很淡，其原因不可能是（）A．经蒸馏水处理的红细胞，在用玻璃棒搅拌时，时间偏少，使红细胞破裂数量少B．未进行沸水浴或沸水浴时间短，导致DNA含量少，染色时间不够C．选择鸡血液时，选用鸡血细胞液，D．用NaCl溶液进行盐析时，所配制的NaCl溶液浓度达不到0.14moL/L，使析出的DNA少C3、本实验中有三次过滤：⑴过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液⑵过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液⑶过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液以上三次过滤分别为了获得（）A、含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液B、含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、含DNA的滤液C、含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、纱布上的DNAD、含较纯的DNA滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液A