梅毒的实验室诊断

梅毒的实验室诊断梅毒是一种几乎可以侵犯全身所有器官，而产生多种症状和体征的慢性传染性疾病。十六世纪初由欧洲传入亚洲，后蔓延我国。梅毒又称为杨梅疮、广东疮、疳疮、下疳、霉疮等。《本草纲目》：“杨梅疮，古方不载，亦有无病者；近时起于岭南，传及四方。”第一部论述梅毒最完善的专著：《霉疮秘录》明代陈同成我国解放后，基本上消灭了此病，但近年来又有新的病例发现2009年广东省报告梅毒39112例，报告数占全国报告总数的11.95%，位居全国第二位，较2008年增长10.44%。病原体为梅毒螺旋体，属于密螺旋体属，苍白密螺旋体苍白亚种(Treponemapallidumsubspeciespallidum)苍白亚种梅毒苍白螺旋体地方亚种地方性梅毒极细亚种雅司病密螺旋体属品他螺旋体品他病梅毒螺旋体的生物学特性1、直径0.10~0.15μm，有8~14个致密而规则的小螺旋，两端尖直。2、原生质圆柱体上紧绕着3~4根周浆鞭毛，故运动活跃，运动方式多样。3、G-，但不易着色。Fontana镀银染色呈棕褐色。4、在无活细胞的人工培养基中难培养，生长慢。5、抵抗力极弱，对温度和干燥特别敏感；对青霉素、四环素、红霉素等抗生素敏感。梅毒螺旋体梅毒的传播途径1、直接性接触2、血液传播：输血3、垂直传播：胎盘传播。4、间接传播：日常用品、接吻、哺乳、医疗器械等途径。梅毒的分期梅毒螺旋体皮肤或粘膜局部繁殖淋巴管附近淋巴结局部无任何症状14～40天(潜伏期平均3周)入侵部位炎症反应初疮（硬下疳）一期梅毒不治疗4～8周自然消失一期潜伏梅毒Ⅰ期（初期）梅毒：Ⅰ期（初期）梅毒：Ⅰ期梅毒（包皮硬下疳）Ⅰ期梅毒（巨大下疳）部位：绝大部份在外生殖器。形态：园形或椭园形，直径约1～2cm，边界清楚，周围稍隆起，内含大量梅毒螺旋体，传染性极强。特点:常单个；触诊有软骨样感；无痛可自愈。梅毒螺旋体血液人体免疫作用大部分螺旋体被杀死其余的螺旋体繁殖低热、浅表淋巴结肿大皮肤粘膜疹骨骼、眼晴、神经系统等的炎症症状不治疗症状可自然消失，呈现潜伏状态二期潜伏梅毒二期梅毒Ⅱ期（中期）梅毒Ⅱ期（中期）梅毒发生于硬下疳出现后2~8周。皮疹泛发对称，一般无自觉症状梅毒疹和淋巴结中，存在大量梅毒螺旋体。Ⅱ期梅毒（玫瑰疹）Ⅱ期梅毒（梅毒疹）二期复发梅毒可反复出现2年后晚期梅毒侵犯皮肤粘膜骨骼心血管系统神经系统Ⅲ期（晚期）梅毒：Ⅲ期（晚期）梅毒：基本损害为慢性肉芽肿病损内螺旋体少但破坏性大Ⅲ期梅毒（树胶肿）Ⅲ期梅毒（溃疡坏死）梅毒的实验室检测方法显微镜检测法：（1）暗视野显微镜检查（2）镀银染色检查血清学检测法：非梅毒螺旋体抗原血清试验（1）VDRL(性病研究实验室试验)：需灭活（2）USR（不加热血清反应素试验）（3）RPR(加速血浆反应素环状卡片试验)（4）TRUST(甲苯胺红不加热血清试验)梅毒螺旋体抗原血清试验（1）FTA-ABS（2）TPPA/TPHA（3）TP-ELISA（4）发光法（5）胶体金法暗视野显微镜检查标本类型：梅毒硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损的渗出液、淋巴结穿刺液方法：暗视野显微镜下查找梅毒螺旋体。结果：典型的梅毒螺旋体呈白色发光,其螺旋较密而均匀。运动方式：①伸缩其螺旋间距离而移动（主要方式）②蛇行式③旋转式评价：①.简单、可靠。②.早期：硬下疳（梅毒血清学试验仍阴性）。③.阴性不能排出患梅毒的可能性暗视野显微镜下的梅毒螺旋体螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最好方法，WHO指定其为性病实验室必备项目之一镀银染色检查基本原理：梅毒螺旋体具有亲银性，可被银溶液染色，从而可以在镜下观察到梅毒螺旋体结果：棕褐色的梅毒螺旋体血清学检测法梅毒螺旋体侵入人体后产生：抗心磷脂抗体：即非特异性抗体、反应素。两种抗体抗梅毒螺旋体抗体：非梅毒螺旋体抗原血清试验TRUST（甲苯胺红不加热血清试验）基本原理：在心磷脂、卵磷脂和胆固醇等组成的抗原中加入甲苯胺红，与待检血清中的反应素结合，形成肉眼可见的红色絮状物。定性试验(1)加样：吸取50微升血清（浆）放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈中。(2)加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原。(3)反应：将卡片置水平旋转仪旋转8分钟[(100±5)转/分钟]，立即在亮光下观察结果定量试验（1）稀释液准备：在圈内加入50微升生理盐水（根据需要确定稀释度），勿将盐水涂开。（2）加样：吸取50微升血清与各圈中生理盐水做系列稀释，并涂布整个圈内。（3）同定性试验中的(2)、(3)。凝集反应强度分级：3+～4+：圆圈内出现中到大的红色絮状物，液体清亮。2+：圆圈内出现小到大的红色絮状物，液体较清亮。1+：圆圈内出现小的红色絮状物，液体浑浊。—：圆圈内仅见红色集中于中央一点或均匀分散。孔号12345678稀释倍数原倍1:21:41:81:161:32阳性K阴性K生理盐水(ul)-50.050.050.050.050.0--样品(ul)50.050.050.050.050.050.0弃50.0--阳性血清(ul)------50.0-阴性血清(ul)-------50.0抗原悬液(ul)16.716.716.716.716.716.716.716.7操作步骤VDRLUSRRPRTRUST抗原成分心磷脂、卵磷脂、胆固醇同前+EDTA+氯化胆碱同前+EDTA+氯化胆碱+活性炭同前+EDTA+氯化胆碱+甲苯胺红抗原稳定性不稳定,1天稳定4℃～8℃保存12个月稳定4℃～8℃保存12个月稳定4℃～8℃保存12个月血清试验前处理需灭活不需灭活不需灭活不需灭活反应板及结果判断玻片，肉眼或显微镜玻片，肉眼或显微镜纸卡片，肉眼纸卡片，肉眼注释唯一用于检查脑脊液的试验，诊断神经梅毒结果容易判断结果容易判断一期敏感性（未经治疗）74%-87%77%-88%77%-99%77%-99%二期敏感性（未经治疗）100%100%100%100%晚期敏感性（未经治疗）98%99%98%99%四种非特异性试验方法比较TPPA基本原理：用超声裂解梅毒螺旋体制备抗原，致敏明胶颗粒，其致敏粒子与待检血清中的抗梅毒螺旋体特异性抗体结合，产生肉眼可见的凝集。操作步骤1.试剂准备：试验前将试剂和待检标本恢复到室温。2.加稀释液：每份样本做4孔，加标本稀释液加至微量反应板孔内，第1孔100微升，第2～4孔各25微升。3.样本稀释：取血清25微升加至第1孔，混匀后取25微升至第2孔，混匀后取25微升至第3孔，混匀后取25微升至第4孔，混匀后弃去25微升。4.加对照液：第3孔加未致敏颗粒25微升，第4孔加致敏颗粒25微升。5.混合：将反应板置振荡器振荡30秒。6.反应：置有盖湿盒，孵育2h，或放4℃冰箱过夜观察结果。结果判断1.观察加未致敏颗粒的第3孔，不出现凝集为有效试验。2.观察凝集反应强度：分级如下。4+：颗粒光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠。3+：颗粒光滑覆盖大部分孔底。2+：颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一颗粒环。1+：颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一明显颗粒环。±：颗粒沉集孔底，中央形成一小点。一：颗粒紧密沉积孔底中央。梅毒血清试验假阳性因素：技术性：标本的污染溶血操作失误生物学假阳性：某些疾病：结核、疟疾、肝病、红斑狼疮、流感、肺炎、类风湿性关节炎、风湿性心脏病、风疹、系统性硬化症等，疾病发展过程中释放心磷脂到血液中假阳性。生理机能发生变化：少数孕妇也可发生生物学假阳性。TRUSTTPPA临床意义——初期梅毒早期或排出++现症梅毒+—生物学假阳性—+梅毒经治疗后梅毒实验室检测的特点临床表现取材部位检查方法一期梅毒溃疡淋巴结病原学检查血液血清学检查二期梅毒皮损淋巴结病原学检查血液血清学检查潜伏梅毒血液血清学检查三期梅毒血液血清学检查神经梅毒血液血清学检查脑脊液细胞、蛋白量检查VDRL等