实验动物基本操作

实验动物基本操作第一节实验动物的抓取与固定•抓取与固定是动物实验的一项基本技术，其目的是使动物保持在安静的状态下，顺利地进行各项实验。•不同种类的动物的抓取与固定方法不尽一致。•同种动物不同实验目的、实验内容，抓取与固定方法也可以不同。•不同实验者的操作习惯上也存在差异。一、小鼠（一）、抓取用右手拇指和食指的指腹抓住尾部中央提起。（二）、固定1、徒手固定（1）将小鼠提起放在饲养盒盖子上，轻轻向后拉住。（2）用左手拇指和食指抓住颈、背部中央皮肤。（3）翻转抓住颈背部的左手，右手拉住鼠尾再用左手的小指压住尾根部，使整个小鼠呈一条直线。2、固定板（器）固定（1）将小鼠麻醉后，用细绳捆住小鼠四肢。（2）准备一个15-20cm，边缘钉有5个钉子的方木板。（3）将四肢用细绳固定在木版两侧的钉子上，在上颚切齿处用细绳固定在木版前方的钉子上。固定板固定适用于大多数动物手术。小鼠固定器适用于尾静脉注射。二、大鼠和地鼠（一）抓取1、周龄较小的大鼠和地鼠，可以像小鼠一样抓住尾部提起。2、周龄较大的大鼠可张开左手虎口，迅速将拇、食指插入大鼠的腋下，虎口向前，其余三指及掌心握住大鼠身体中段，并将其保持仰卧位，然后调整左手拇指的位置，紧抵在下颌骨上即可进行实验操作。12注意：操作者第一次抓取大鼠时，最好戴防护手套；不能捉提尾尖，也不能长时间将大鼠悬在空中。（二）固定1、徒手固定：对体重较小的大鼠可用拇指、食指捏住大鼠耳部及颈部皮肤，余下三指紧捏住背部皮肤，置于掌心，调整好大鼠在手中的姿势即可进行实验操作。如：灌胃、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射等实验。2、固定板固定：方法与小鼠固定板固定相同，只是需选择更大一些的固定板。3、固定器（盒）固定：方法与小鼠固定器（盒）固定相同，只是固定器较小鼠的大。同样适用于大鼠尾静脉注射。三、豚鼠（一）抓取抓取幼龄豚鼠时，用两手捧起；成熟豚鼠可以用左手大把抓起。16注意：豚鼠性情温和，一般不伤人，但胆小易惊，易造成自伤。抓取时，不能太粗野，更不能抓腰腹部，在操作过程中，如果豚鼠挣扎，手不要越握越紧，否则会造成豚鼠呼吸困难，甚至死亡。（二）固定1、徒手固定：先用左手轻轻扣、按住豚鼠背部。顺势抓紧其肩胛上方皮肤，拇指和食指环箍其颈部。用右手轻轻托住其臀部，即可将豚鼠抓取保定。2、固定板（器）固定：与大、小鼠，豚鼠固定板固定基本一致。四、实验兔（一）抓取抓住颈背部皮肤及两耳提起，并用左手托住兔腹部或臀部，使其重量主要落在左手上。注意：家兔温顺，一般不会咬人，但脚爪较锐利，要防止被抓伤。另外抓取时不能只提兔耳或四肢，也不能用单手只抓颈背部皮肤。（二）固定1、徒手固定：用一只手抓住兔的颈背部皮肤，另一只手抓住兔的两后肢，固定在实验台上。也可以坐在椅子上用一手抓住兔颈背皮肤和两耳，大腿挟住兔的后半身，用另一只手抓住两前肢将兔固定。此固定方法适用于腹腔、肌肉注射，及经口给药。2、固定盒固定：此固定方法适用于头、耳部位实验。3、固定板（台）固定：此固定方法可使兔俯卧、仰卧或侧卧固定，适宜于兔头、颈、躯干手术及其它实验操作。兔子固定板固定五、实验犬（一）抓取对未经驯服和调教的外购犬抓取时，可用特制的长柄铁钳夹住犬的颈部，由另一人用布带或粗绳缚其嘴，并将布带、绳固定在狗耳后颈部，防止脱落。（二）固定实验台固定：用特制的长柄铁钳夹住犬的颈部后，麻醉动物。将麻醉的犬放在实验台上，再用粗棉带（绳）固定四肢于实验台上。并将犬舌拉出。此固定方法仰卧位适用于口腔、颈、胸、腹、四肢等部位的实验，俯卧位适用于脑、背部位的实验。注意：狗性情凶恶、咬人，特别是对陌生人有攻击性。对刚购入的狗要特别小心，避免被其咬伤。在缚嘴时，动作要迅速，捆绑松紧要适中。六、实验猴31不管采用哪种抓取与固定方法，都应遵守的基本原则是：1.保证实验人员的安全。2.防止动物意外损伤，禁止采取粗暴的动作。因此在抓取与固定动物时，应了解动物的生活习性，生理解剖结构，体重、体型，实验内容确定动物的抓取与固定方法。第二节年龄的大致判断（一）大、小鼠1、根据形态鉴定日龄（大、小鼠情况基本一样）日龄/d外观形态特征1仔鼠裸体鲜红3耳壳露出表皮4脐带瘢痕脱落5能翻身8能爬行日龄/d外观形态特征10能听到声音9～11全身被白毛，门齿长出13～15眼皮张开，能跳跃，能抓取东西18以后能自行采食，独立生活2.根据体重鉴定日龄⑴小鼠日龄与体重的对应日龄/d初生51015202530体重/g1.84.06.011.015.021.024.0⑵大鼠日龄与体重的对应日龄/d初生10203040体重/g6～717～2535～5055～90100～150日龄/d50607080体重/g150～210170～240210～270240～320（二）豚鼠一般老年豚鼠牙齿和趾爪长，被毛稀疏无光泽，眼神呆滞，行动迟缓。而年轻豚鼠牙齿短白，爪短软，眼睛圆亮，行动敏捷，被毛有光泽，且紧贴身体。也可根据体重来推断大致年龄。同日龄豚鼠，雌性体重略高于雄性。与大鼠一样，其体重受多种因素的制约。实验对年龄要求比较严格时，必须由卡片记录提供准确年龄。日龄/d初生7203060体重/g60～80100～120150～200170～220240～300日龄/d90120180体重/g330～400400～470520～600家兔的门齿和爪随年龄增长而增长，是年龄鉴别的重要标志。青年兔门齿洁白，短小，排列整齐；老年兔门齿暗黄，厚而长，排列不整齐，有时破损。白色家兔趾小基本呈红色，尖端呈白色。1岁家兔红色与白色长度相等；1岁以下，红多于白；1岁以上，白多于红。还可根据趾爪的长度与弯曲度来区别。青年兔趾爪较短，直平，隐在脚毛中，随年龄的增长，趾爪露出于脚毛之外，而且爪尖钩曲。另外，家兔皮薄而紧，眼神明亮，行动活泼的为青年兔；皮厚而松，眼神颓废，行动迟缓的为老年兔。（三）家兔犬的年龄主要以牙齿的生长情况、磨损程度、外形颜色等情况综合判定。仔犬在出生后十几天即开始生出乳齿，2个月以后开始由门齿→犬齿→臼齿顺序逐渐更换为恒齿，8～l0个月齿换齐。但犬齿需要1岁半以后才能长坚实。饲养场饲养的品种犬，可以根据记录，明确了解年龄，而收购的杂种犬就无法知道确切年龄。实际中，可根据犬齿更换和磨损情况，估计犬的年龄。（四）犬年龄犬齿更换和磨损情况2个月以下仅有乳齿(白、细、尖)2～4个月更换门齿4～6个月更换犬齿(白，牙尖圆钝)6～10个月更换臼齿1岁牙长齐，洁白光亮。门齿有尖突2岁下门齿尖突部分磨乎3岁上、下门齿尖突大部分磨平4～5岁上、下门齿开始磨损呈微斜面，并发黄6～8岁门齿磨成齿根，犬齿发黄、磨损9～10岁唇部、胡须发白10岁以上门齿磨损，犬齿不齐全，牙根黄，唇边胡须全白第三节性别鉴定小鼠性别鉴定小鼠性别鉴定小鼠性别鉴定兔的性别鉴定初生兔仔如阴部孔洞扁圆而略大于肛门，且与肛门相向、距离较近的是母兔；孔洞呈圆形而略小于肛门，孔洞向前而距肛门较远的是公兔。三月龄以上的兔子，只要看有无阴囊即可区别公母。兔子的性别鉴定（雌）兔子的性别鉴定（雄）第三节动物编号•动物实验时，当使用的动物数或实验分组数大于1时，需要对动物个体间或组间区别开来，就需进行编号与标记。因此编号与标记的目的就是动物个体与组别的识别。•标记的方法很多，良好的标记方法应满足：号码清楚、持久、简便易认和适用，不影响实验结果，对动物的刺激小，标记物对动物无毒性。编号方法无定法，原则是使实验者能够识别动物个体和组别。实验动物编号标记标准操作规程1．目的：为了规范实验动物编号标记方法，对分组后的实验动物进行标记编号，制定本程序。2．范围：适用于实验动物编号标记的活动。3．职责：所有实验人员应遵守本规程，动物实验室负责人负责监督和管理。4．工作程序：4.1良好的标记方法应满足标号清晰、耐久，简便、适用、无明显损伤、无毒和易辨认等要求。常用的标记方法有染色法、耳缘剪孔法、烙印法、挂号牌法、挂环法等。4.2染色法：染色法是用化学剂在动物身体明显部位如被毛、四肢等处进行涂染，或用不同颜色等代表一定的编号，来区别各组动物，是实验室最常用、最容易掌握的方法。4.2.1常用染色剂：黄色：3％～5％苦味酸溶液红色：0.5％中性红或碱性品红溶液咖啡色：2％硝酸银溶液（涂后需光照10分钟）黑色：煤焦油的酒精溶液紫色：龙胆紫溶液4.2.2编号的原则：如动物数在10只以下，在左前腿上为1，左腰部为2，左后腿为3，头部为4，背部为5，尾基部为6，右前腿为7，右腰部为8，右后腿为9。如果动物编号超过10，需要编10～100号码时，可采用在上述动物的不同部位，再涂染另一种涂染剂(如0.5％中性红或品红溶液)斑点，即表示相应的十位数，即左前腿上为10，左腰部为20。如在左前腿上标记红色和黄色斑点，表示为11，如果红色标记在左前腿上，而黄色标记在左腰部，是12，以此类推。如图。本设施大小鼠采用染色法编号标记。4.3烙印法：用刺数钳在动物耳上刺上号码，然后用棉签蘸着溶在酒精中的墨黑在刺号上加以涂抹，烙印前最好对烙印部位预先用酒精消毒。4.4号牌法：用金属制号牌固定于实验动物的耳上或系颈上。耳标签、项圈、腿圈，中、大型动物。4.5鼠尾标记编号用苦味酸溶液涂擦在鼠尾部(图)。4.6孔法或剪口法：耳孔法是用打孔机直接在实验动物的耳朵上打孔编号，根据打在动物耳朵上的部位和孔的多少，来区分实验动物的方法。用打孔机在耳朵打孔后，必须用消毒过的滑石粉抹在打孔局部，以免伤口愈合过程中将耳孔闭合。耳孔法可标记三位数之内的号码。另一种耳孔法是用剪刀在实验动物的耳边上剪缺口的方法，作为区分实验动物的标记。打耳孔法：小型动物4.7剪趾法：小型动物第四节分组随机化分组•避免人为影响•例：将14只小鼠随机分成两组。•①先将小鼠编为1～14号，•②在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄14个随机数字。编排如下：•动物编号1234567891011121314•随机数字1622779439495443548217379323•归组BBABAABABBAAAA•③奇数代表A织，偶数代表B组•④A组：356811121314•B组：1247910•⑤调整分组：接刚才随机数字23继续抄表得随机数字78，用78除以8（因为需要把A组的8个数字调整掉一个），得余数6，所以把A组的第6个动物，即12号动物调整到B组•⑥最终分组•A组：3568111314•B组：124791012例：12只大鼠随机分为3组①大鼠编号1~12②在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄12个随机数字③每个数分别用3除，记录余数④根据余数分组大鼠编号：1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12随机数字：08，27，01，50，15，29，39，39，43，79，69，10余数：2，0，1，2，0，2，0，0，1，1，0，1组别：B，C，A，B，C，B，C，C，A，A，C，A⑤A：3，9，10，12B；1，4，6C：2，5，7，8，11⑥调整分组：接刚才随机数字10继续抄表得随机数字61，用61除以5（因为需要把C组的5个数字调整掉一个），得余数1，所以把C组的第1个动物，即2号动物调整到B组。⑦最终分组A：3，9，10，12B；1，2，4，6C：5，7，8，11第五节去毛1、剪毛：弯头剪毛剪。2、拔毛：大小鼠尾静脉、家兔耳缘静脉注射。3、剃毛：将剃毛部位先用剪刀粗剪一遍，蘸温肥皂水润湿，用剃刀顺着被毛方向剃毛，用电动剃毛推剪，则逆被毛向剃毛。4、化学脱毛：常用脱毛剂①8%硫化钠水溶液②硫化钠3份，洗衣粉1份、淀粉7份，加水调成糊状③硫化钡50克，氧化锌25克，淀粉25克，加水100毫升调成糊状④硫化钠10克，生石灰15克，加水到100毫升，适合犬和其他大动物。第六节实验动物的给药途径与方法注射法胃肠给药法用于皮肤的涂布给药法用于呼吸道的吸入给药法在实验过程中，应根据实验目的、动物种类、药物类型选择给药途径和方法，若是临床前药物的动物实验，给药方法应与人的给药途径一致。实验动物的给药方法一、注射•皮内注射•皮下注射•肌肉注射•腹腔注射•静脉注射•脑膜下注射•脑内注射•胸腔内注射•腰椎