病原微生物标本采集、运送

病原微生物检验标本采集、运送操作规程正确的标本采集，运送，保存和处理对于微生物检验工作质量至关重要，为了准确检出病原菌，避免漏检与误诊，临床医护人员和实验室工作人员应掌握微生物标本的选择，采集，运送，保存及处理的一般原则。一、标本采集的一般原则1.早期采集采集时间最好在病程早期，急性期，且必须在使用抗菌药物之前采集，确保病原菌的检出。2.无菌操作采集标本时应尽量减少或避免感染部位附近或皮肤黏膜正常菌群的污染，使病原菌与正常菌群混淆，造成临床误诊。采集的标本应存放在无菌容器内，容器不能使用消毒剂处理，标本中也不能添加防腐剂，以免降低病原菌的检出。3.适量的标本标本量过少可能导致假阴性结果。4.适当的采集方法对于厌氧菌，需氧菌或兼性厌氧菌的采集方法是不同的，用于厌氧菌培养的标本应尽量用注射器采集抽取物，室温保存，不能冷藏和冷冻。5.盛放标本的容器采集标本应存放在无菌，防漏，应带有螺旋盖的容器内。二、标本的运送1.标本采集后立即送检，若有延迟也应在2小时内送到实验室，否则会影响病原菌的检出，一般性的细菌培养标本若需延迟送检时，应置于4度冰箱保存，且不能超过24小时。2.临床标本最佳运送时间取决于标本的量，少量液体（小于1ml）或组织（小于1cm3）应在15~30分钟内送到实验室，较多量的标本置于运送培养基中可放12~24小时，厌氧培养标本原则上是床边接种，如延迟送检，需保存在厌氧运送培养基中，室温保存，不得超过24小时。三、不同标本的采集，运送（一）血液标本采集，运送1.血培养指针征当患者出现：发热（大于38度）或低温（小于36度），寒战，白细胞增多,皮肤黏膜出血，休克，多器官衰竭，血压降低，c反应蛋白升高及呼吸加快，血液病患者出现粒细胞减少，血小板减少等，具备上述一种或几种体征时，临床怀疑菌血症应采集血液标本进行血培养，对入院危重感染患者应在未使用抗菌药物治疗前，及时做血培养。2.对怀疑菌血症、真菌血症的患者，在考虑使用抗菌药物之前，应立即采集血培养标本。必须同时或间隔短时间内采集２套以上血培养标本。成年患者：推荐同时采集２－３套（不同部位）血培养标本（即双瓶双臂同时采集血培养标本），采血量每瓶不少于5ml;婴幼儿患者：推荐同时采集２次（不同部位）血培养标本,采血量每瓶不少于2ml。（少于病人总血容量的1%）.在采取血培养后的2—5天内，无需重复采取血培养。两个例外：细菌性心内膜炎和金黄色葡萄球菌菌血症。3.血标本采集的量是影响检出率的最重要的因素。检出率与采血量成比例增长，每增加1ml的血液，病原菌的检出率就会相应增加。儿童患者血液中病原菌浓度较高，血培养量无需等同于成人。采用一对（需氧瓶+厌氧瓶）组合，比采用二个需氧瓶的组合可检出更多的葡萄球菌、肠杆菌科细菌和厌氧菌。采血量不能满足推荐的量时，应首先满足需氧瓶的需要。推荐从外周静脉采集血液标本,不推荐静脉留置导管，因其常伴有高污染率。如果必须从留置导管内采血，也应同时从外周静脉采集另外一个血培养标本以帮助阳性结果的判读。4.血标本采集的注意事项在采血之前，血培养瓶的橡皮塞需使用75%酒精消毒并干燥。然后再进行穿刺部位的皮肤消毒。严格按照“酒精、含碘消毒剂、酒精”的消毒步骤操作，并等待足够的消毒时间。严格无菌操作，不允许在皮肤消毒后用手接触静脉，除非带有无菌手套.不推荐采血和接种血培养瓶更换注射器针头;采集后的血培养瓶应在1小时之内送往实验室,血培养瓶在接种前和接种后均不得冷藏或冷冻。(二)痰培养标本采集，运送1.痰培养指征上呼吸道感染包括咽炎，喉炎，会咽炎等都可采集鼻，鼻咽，口咽拭子标本培养。下呼吸道感染：凡是咳嗽，咳痰，痰呈脓性，粘稠或血性等都可采集痰标本。2.标本的采集采集前嘱咐病人先用清水漱口，摘去牙托，因唾液中口咽部定植菌的浓度可达108-109/ml，去除表面的菌群。教育病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液。在抗生素应用前采集痰标本;标本采集后1～2h内送往实验室进行处理，采集标本过程中要有专业的医务人员指导;无痰可用3％～5％NaCl5ml雾吸约5min导痰；也可用物理疗法、体位引流、鼻导管抽吸等方法取痰。3.正常的痰标本低倍视野下鳞状上皮细胞小于25个，白细胞大于10个。如果低倍视野下鳞状上皮细胞大于25个，白细胞小于10个应不做或仅在特殊要求时做培养，如做培养，报告中注明“镜检结果表明标本口咽分泌物污染明显”。4痰培养方法的局限性多数引起肺炎的病原菌不能培养出，如病毒，军团菌，衣原体等。影响因素很多：如黏液包裹、定植菌污染。建议痰培养同时做血培养和痰涂片镜检。5.注意事项常规的痰培养需在2小时内送检，若怀疑嗜血杆菌，肺炎链球菌感染时必需随留随送;标本中不能混入唾液与鼻咽分泌物等。（三）尿培养标本采集，运送1.尿培养指征尿路感染，肾结核，泌尿系结石，膀胱排空功能受损或前列腺增生等患者，出现尿频，尿急，尿痛等膀胱刺激症状，肉眼脓尿或血尿，尿常规检查有白细胞或亚硝酸盐阳性，，不明原因的发热，尿道口有脓性分泌物等症状，需采集尿培养标本送检。2.标本的采集清洁中段尿液，嘱咐患者用肥皂水清洗，弃去开始流出的尿液，以冲刷尿道口的细菌，取能代表膀胱部位病原菌的中段尿；导尿管尿液，留置导管尿液标本常通过专门的采样端口采集，不能把导尿管与尿袋拔开后收集尿液，采样端口用酒精消毒；必要时，可先夹住导尿管但不能超过30分钟；将注射器针头插入采样端口，抽吸出尿液；注入无菌杯或试管中。膀胱穿刺尿，无菌操作，用无菌注射器刺入膀胱抽取5—10ml尿液送检，主要用于厌氧菌的培养或留取标本困难的婴幼儿标本的采集，此法可避免尿液标本的污染。3.标本的采集量一般成人采集10-15ml,婴幼儿不得少于1ml。诊断症状明显的病人（如尿急、尿频、尿痛），一份标本就已足够，治疗48-72小时后再采集第二份标本。对于症状不明显的病人，需采集2-3份标本。怀疑肾结核时，应连续3天采集晨尿。4.室温都有利于病原菌和污染菌生长繁殖，标本采集后立即送检和接种，室温下存放不能超过2小时，（夏季保存时间应适当缩短或冷藏），4-8度冷藏保存时间也不能超过24小时，冷藏的尿液不能用于淋球菌的培养。5．注意事项必须无菌操作，采用带盖防渗漏的无菌杯收集，多次收集或24小时尿不能用作培养。集尿袋内的尿液不能用作培养。导尿管末端的尿液也不能用于培养，很难避免没有尿道菌群污染。在使用抗菌药物前留取标本，尿液中不能加任何防腐剂或消毒剂，抑制细菌的生长。（四）粪便标本采集，运送1.送检指征当患者出现腹泻，大便每天大于或等于3次，粪便的性状异常，可为稀便，水样便，粘液便，脓血便或血便，伴有恶心，呕吐，食欲不振，发热，腹痛及全身不适等，大便镜检白细胞大于等于5个每高倍视野，抗菌药物治疗后的腹泻等。2.标本的采集方法，时间与量尽可能在发病早期（急性期）或应用抗菌药物治疗之前，采集新鲜的粪便，怀疑沙门菌感染时，应在发病2周以后采集。自然排便法，排便后，挑取有脓血或粘液部位的大便，液状粪便取絮状物盛于无菌的容器内；直肠拭子采集法，用于排便困难的患者或婴幼儿。一般用拭子采集大于2g的标本送检，若标本为水样，采集大于2ml的标本于无菌容器中送检。3．标本的运送与保存标本采集后应尽快送检，室温条件下不能超过2小时，如不能及时送检可加入ph7.0磷酸盐甘油缓冲保存液中或专门的大便运送培养基中置4度冰箱保存，但不能超过24小时。高度怀疑霍乱弧菌感染的标本必须符合特殊标本的安全要求。4.注意事项最好在用药前，采集新鲜的标本盛装在无菌容器内，立即送检，提高阳性检测结果。厌氧菌的培养尽量避免与空气接触和正常的菌群污染。(五)脓液及创伤感染分泌物标本的采集及运送1.送检指征凡是当患者有外伤感染，术后切口感染，导管感染，脐带残端感染，有脓液和分泌物时，应采集标本培养。2.标本的采集时间和方法在使用抗生素前或停用药1—2天以后，或使用下一次抗生素前采集，对脓肿性分泌物应先用生理盐水或75%的酒精冲洗溃疡表面渗出物，尽可能抽取脓液于无菌杯内送检。对于封闭性脓肿时，应无菌操作抽取脓液3—10ml于无菌试管内或血培养瓶内送检，怀疑厌氧菌感染时，应做床旁接种或注入厌氧瓶内（3—10ml）送检，最佳方法是采集组织送检。3.标本的运送标本采集后应于2小时内送微生物实验室进行处理，若不能及时送检，需氧培养的标本除对环境敏感的淋病奈瑟菌，脑膜炎奈瑟菌和流感嗜血杆菌外，可保存在4度冰箱中，但保存时间不能超过24小时;厌氧培养时，需用厌氧瓶或厌氧袋在室温下保存，但不能超过24小时。4.注意事项尽可能在用抗生素前采集，若患者也用药，应在检验单上注明抗菌药名，并在下次用药前采集；对于开放性的伤口，采集前应先除去表面污染菌，以防带入与感染无关的皮肤定值菌。干燥结痂的标本一般不做培养，除非有渗出物。采集标本时应无菌操作。（六）穿刺液标本的采集与运送穿刺液主要包括脑脊液，胸腹水，心包液，胆汁，关节液及鞘膜液，在正常标本中，上述液体是无菌的，在排除污染的情况下，一旦检出细菌均视为病原菌。在相关的部位有相应的临床症状时，应无菌操作采集相应的标本于无菌容器内送检，标本采集后应立即送往实验室处理。脑脊液采集后应在15分钟内送到实验室，若不能，应室温保存，不得超过2小时，不能冷冻或冷藏注意事项：标本的采集严格执行无菌操作，最好在用抗菌药物前采集。防止标本凝固，可事先在容器内加入抗凝剂，（脑脊液标本时不需加抗凝剂），也可直接加入血培养瓶内。