周旋-毕业论文

江苏农牧科技职业学院2013届专科毕业论文鸡大肠杆菌的诊治姓名：周旋所在系(部)：动物医学院所学专业：兽医检验技术指导教师：曹斌论文完成时间：2013年6月江苏农牧科技职业学院论文（设计）I鸡大肠杆菌病的诊治周旋摘要：方法：对临床部分病死鸡病例进行病理剖检、病原学分离、细菌染色镜检、生化试验鉴定病原的种类，并进行药敏试验得出其敏感药物。结果：从病死鸡病例分离到1株大肠杆菌，结合病理剖检结果诊断为大肠杆菌感染，药敏试验结果表明所分离的大肠杆菌对壮观霉素、丁胺卡那霉素等较敏感，对复方新诺明、奥复星等具有耐药性关键词：鸡；大肠杆菌；诊治DiagnosisandTreatmentofCanineParvovirusAbstract:Methods:Identifythetypeofvirulencefactorsof1sickanddeadchickenbyisolationidentification,bacteriadyeing,microscopicexamination,andidentificationofbiochemicalproperties.Thentesttheirsensitivedrugsbysusceptibilitytest.Results:somestrainsofEscherichiacoliwereseparatedfrom1sickanddeadchickens,andcombinedwiththeresultsofpathologyexamination,itwasdiagnosedascolibacilosis.DrugssusceptibilitytestshowsthatEscherichiaColiseparatedaresusceptibletoAmikacin,Spectinomycine,etc,andresistancetoSinominCompositeaNalidixicacid,etc.Keywords:chicken;E.coli;diagnosisandtreatment江苏农牧科技职业学院论文（设计）II目录1发病情况…………………………………………………………………………………12临床症状…………………………………………………………………………………13剖检病变…………………………………………………………………………………24实验室诊断………………………………………………………………………………34.1材料……………………………………………………………………………………34.2细菌的分离培养………………………………………………………………………34.3染色镜检…………………………………………………………………………34.4生化试验………………………………………………………………………………34.5药敏试验………………………………………………………………………………35结果……………………………………………………………………………………46治疗……………………………………………………………………………………57小结与讨论……………………………………………………………………………5参考文献…………………………………………………………………………………6致谢…………………………………………………………………………………7江苏农牧科技职业学院论文（设计）1鸡大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的条件性传染病。该病因鸡的品种、年龄、抵抗力以及大肠杆菌的致病力、感染途径的不同，可以发生许多不同的症状和病理变化。包括大肠杆菌性败血症、大肠杆菌性肉牙肿、气囊炎、肿头综合症、腹膜炎、输卵管炎、滑膜炎、全眼球炎及脐炎、卵黄囊炎等，最常见的是急性败血症和卵黄性腹膜炎[1]。近年来，随着养鸡业的发展，以及生产上盲目滥用药物，造成大肠杆菌耐药菌株不断产生，使鸡大肠杆菌病成为危害养鸡业的主要传染病之一。该病发病范围广，死亡率较高，有的高达30%以上，多与病毒性疾病与其他细菌性疾病并发，且在世界各地均有发生，给畜牧业造成了严重的经济损失[2]。1发病情况2010年4月，某鸡场购进1500只某品种肉鸡苗饲养。购入时鸡苗精神状况良好，按常规进行了鸡新城疫的免疫，饲养至30日龄时开始发病，第2天死亡10只，以后陆续死亡，第六天死亡达到高峰，共死亡105只，其发病率为45%，死亡率为7%。2临床症状病鸡精神沉郁，不喜活动、羽毛松乱、两翅下垂、闭目呆立呼吸困难少吃或不吃（见图1），开始体温升高，鸡冠萎缩，颜色发白，腹泻，排出灰白水样粪便（见图2），肛门周围粪便污染，有的泄殖腔红肿外翻，腹部膨胀、眼球凹陷，眼角可见干酪样渗出物。鸡群常见一侧眼失明。病初眼睑肿胀、流泪，后期瞳孔及角膜浑浊，视网膜脱落，眼球萎缩失明[3]。（见图3），部分病鸡衰竭死亡。局部感染的呈局部临床症状，如关节炎、眼炎或伴有呼吸道症状，有的鸡甚至出现了瘫痪和一些较轻微的神经症状，最后虚弱死亡。蛋鸡产蛋减少甚至停止，外观腹围增大，俗称“垂腹症”。有的发生脐带炎，雏鸡腹部膨胀。患鸡关节肿胀，呈竹节状肥大（见图4），病鸡步态不稳或跛行。图1左边为正常，右边为患病鸡图2病鸡腹泻排灰白样粪便江苏农牧科技职业学院论文（设计）2图3眼角可见干酪样渗出物图4患鸡关节肿大3剖检变化剖检病死鸡，打开胸腹腔可见气囊壁混浊、增厚，有黄白色干酪样渗出物附着；心包膜增厚，附有大量渗出物，心包膜和胸腔黏连；肝肿大，表面有淡黄色纤维蛋白膜附着（见图5）；腹腔内有许多纤维素性渗出物（见图6），少数可见肠道之间相互黏连，肠道黏膜充血、出血，肠内壁有出血性炎症，腹腔有积液和血凝块[4]；鸡的肝、脾、肾等器官都有不同程度的淤血，有的患轻度肺炎，有的患气囊炎，剖检可见气囊膜浑浊增厚（见图7）。主要在小肠及盲肠浆膜、肠系膜、肝脏、心肌等部位形成灰白色或黄白色的、大小不一的肉芽瘤（见图8）。患鸡心包膜浑浊增厚，心包积液，呈淡黄色略黏稠，肝脏有玉米粉状物质沉淀。偶见眼炎和输卵管炎[5]。患鸡关节囊内关节液脓样浑浊或呈干酪样，并有腱鞘炎[6]。图5气囊炎和肝周炎图6腹腔内许多纤维性渗出物图7气囊膜浑浊增厚图8肉芽瘤江苏农牧科技职业学院论文（设计）34实验室诊断4.1材料培养基：血液琼脂，麦康凯琼脂，接种环、酒精灯。药敏试纸：环丙沙星（5μg/片），四环素（30μg/片），庆大霉素（10μg/片），磺胺甲基异恶唑（300μg/片），淋必治（100μg/片），奥复星（5μg/片），氟哌酸(诺氟沙星)（10μg/片），复方新诺明（23.75/1.25μg/片），丁胺卡那霉素（30μg/片）。4.2细菌的分离培养将上述病料在麦康凯培养基、血培琼脂养基上进行三区划线，划线完毕将琼脂平板倒置，放入37℃恒温箱培养24h后，血液琼脂平板生长出圆形、隆起、光滑、湿润、灰白色菌落，直径约2.5～3.0mm；麦康凯平板上生长出粉红色、中等大小、圆形的菌落。挑取可疑菌落，于普通琼脂板上三区划线进行纯培养。倒置放于37℃恒温箱内，24h后将平板放置于4中保存待用。4.3染色镜检取半玻耳的蒸馏水于一玻片上，无菌挑取纯培养LB琼脂平板上的可疑菌落于蒸馏水中涂布均匀（大概直径0.5cm），自然干燥，将干燥好的抹片，涂抹面向上，以其背面在酒精灯外焰上如钟摆样来回拖过数次，略作加热进行固定。做革兰氏染色，先用结晶紫染色1～3min，水洗，用碘液媒染1～3min，水洗，用酒精脱碘30s～1min，水洗，用复红复染10～30s，水洗，用压片纸压干，油镜镜检。镜检可见革兰氏阴性、两端钝圆、无芽孢、单个散在的短杆菌。4.4生化试验取待检菌纯培养物分别接种在蛋白胨水、缓冲蛋白胨水、枸橼酸盐、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、尿素琼脂、三糖铁琼脂、半固体琼脂培养基上，置37恒温箱中，培养18～24h。分离菌株生化实验结果显示，能发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇。对蔗糖、多数不能发酵，少数发酵产酸。尿素酶试验阴性，不产生硫化氢，有鞭毛，能运动。4.5药敏试验4.5.1培养基划线在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至江苏农牧科技职业学院论文（设计）4平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。要求涂布均匀致密）。4.5.2贴药敏片将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上；一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片（外周一般可贴七片），每种药敏片的名称要记住。（见图9）图9药敏实验抑菌圈4.5.3结果观察过夜培养后形成一个抑菌圈，抑菌圈越大，说明该菌对此药敏感性越大，反之越小，若无抑菌圈，则说明该菌对此药具有耐药性。其直径大小与药物浓度、划线细菌浓度有直接关系5结果5.1涂片镜检结果镜检结果与大肠杆菌镜检形状相类似。5.2生化试验结果生化试验结果与大肠杆菌的相类似。综合临床症状、病理变化、涂片镜检和生化试验可初步诊断病鸡为大肠杆菌感染。5.3药敏试验结果根据生产商提供的药物敏感性判定标准区分来区分药物的敏感性：耐药(R)、中敏(I)、敏感(S)三种药物感受状态。分离株对壮观霉素、丁胺卡那霉素高度敏感；对江苏农牧科技职业学院论文（设计）5环丙沙星、复方新诺明、磺胺甲基异恶唑、奥复星、诺氟沙星高度耐药；对庆大霉素、四环素等中度敏感。由药敏试验结果可以看出，大肠杆菌对大部分药物的敏感性较低，表现为多重耐药(见表1)。表1药敏试验结果抗生素名称分离株抑菌圈大小（单位：mm）结果判定结果判定标准（单位：mm）耐药中度敏感敏感环丙沙星9耐药≤1516-20≥21四环素14中度敏感≤1112-14≥15庆大霉素13中度敏感≤1213-14≥15磺胺甲基异恶唑0耐药≤1213-16≥17淋必治(壮观霉素)28敏感≤1415-17≥18奥复星0耐药≤1213-15≥16诺氟沙星0耐药≤1213-16≥17复方新诺明0耐药≤1011-15≥16丁胺卡那霉素22敏感≤1415-16≥17注：①高敏：抑菌环直径d＞15；②中敏：抑菌环直径10≤d≤15；③低度敏感：抑菌环直径d＜10。④不敏感：无抑菌环6治疗根据诊断结果，采用敏感药物对发病鸡进行治疗；用丁胺卡那霉素每千克体重5～7.5mg肌肉注射；壮观霉素混饮，每1L水1～2g，连用3～5d。注意通风换气，淘汰一些症状严重的病鸡。7小结与体会7.1综合该病例发病特点、生化试验结果等，可以判定本次鸡场发病是由大肠杆菌所引起的，分离株对壮观霉素、丁胺卡那霉素高度敏感；对环丙沙星、复方新诺明、磺胺甲基异恶唑、奥复星、诺氟沙星高度耐药；对庆大霉素、四环素等中度敏感。由药敏试验结果可以看出，大肠杆菌对大部分药物的敏感性较低，表现为多重耐药。7.2禽大肠杆菌病是由大肠杆菌所引起的局部或全身性感染的疾病，其病原抗原性复杂，血清型多样，临床症状和病理变化多变，且多与病毒性疾病和其他细菌性疾病并发，给养禽业生产带来重大损失。由于该病在一些鸡场中严重发生，兽医临床上抗菌药物不得不大量地被应用，导致大肠杆菌耐药菌株不断出现，耐药谱不断扩大，形成恶性循环；同时也加剧了抗菌药物在畜禽体内的残留，给养禽业的持续发展和人类的身体健康带来潜在的危害。7.3国内外的研究表明禽源性大肠杆菌的耐药性复杂[7]，各地报道的敏感药物和耐药性都有所不同；各地不同时间分离的菌株的耐药性也有较大差异，耐药性变化快。江苏农牧科技职业学院论文（设计）6当前鸡大肠杆菌病的治疗要点，尽管大肠杆菌病在一些鸡场严重发生，但由于大肠杆菌血清型复杂，给免疫防治带来一定的困难，药物防治仍是控制鸡大肠杆菌病的主要手段[8]在防治本病时，应遵循以下几个