定心丸质量标准研究

作者简介：马丹，女，硕士研究生　　Ｔｅｌ：[phone]　　通信作者：赵陆华，女，副研究员，研究生导师　　Ｔｅｌ：[phone]　　Ｅｍａｉｌ：[e-mail]定心丸质量标准研究马丹１，２，赵陆华１，２，陈晶１，２，贡保东珠１，２（１．中国药科大学分析测试中心，南京２１０００９；２．药物质量与安全预警教育部重点实验室，南京２１０００９）摘要：目的　建立定心丸质量标准。方法　采用薄层色谱法对定心丸中的甘草，当归，远志进行定性鉴别，并用高效液相色谱法对定心丸中黄芩苷的含量进行测定，色谱柱为Ｃ１８柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ），流速为１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１，流动相为乙腈０．２％磷酸（２８∶７２），检测波长为２８０ｎｍ。结果　甘草，当归，远志薄层色谱分离良好，斑点清晰可见；黄芩苷含量在０．１９３４～１．１６０６μｇ内线性关系良好，平均加样回收率为１０１．４５％（ＲＳＤ＝１．２％，ｎ＝６），精密度ＲＳＤ＝１．４％。结论　该方法结果准确、重复性好，可作为该制剂的质量控制方法。关键词：甘草；当归；远志；黄芩苷；薄层色谱法；高效液相色谱法中图分类号：Ｒ９４３．３　　　文献标识码：Ｂ　　　文章编号：１００７７６９３（２００９）０３０２３７０４ＳｔｕｄｉｅｓｏｎＱｕａｌｉｔｙＳｔａｎｄａｒｄｏｆＤｉｎｇｘｉｎＰｉｌｌｓＭＡＤａｎ１，２，ＺＨＡＯＬｕｈｕａ１，２，ＣｈｅｎＪｉｎｇ１，２，ＧＯＮＧｂａｏｄｏｎｇｚｈｕ１，２（１．ＣｅｎｔｅｒｏｆＩｎｔｒｕｍｅｎｔａｌＡｎａｌｙｓｉｓ，ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９，Ｃｈｉｎａ；ＤｒｕｇＱｕａｌｉｔｙＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｈａｒｍａｃｏｖｉｌａｎｃｅ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９，Ｃｈｉｎａ）ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｓｔａｎｄａｒｄｆｏｒＤｉｎｇｘｉｎｐｉｌｌｓ．ＭＥＴＨＯＤＳ　ＴＬＣｗａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙＲａｄｉｘＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ，ＲａｄｉｘＡｎｇｅｌｉｃａＳｉｎｅｎｓｉｓａｎｄＲａｄｉｘＰｏｌｙｇａｌａｅＷｉｌｌｄｉｎｔｈｉｓｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ，ａｎｄｂａｉｃａｌｉｎｃｏｎｔｅｎｔｉｎＲａｄｉｘＳｃｕｔｅｌｌａｒｉａｅｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＨＰＬＣ．ＡＣ１８ｃｏｌｕｍｎ（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）ｗａｓｕｓｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｏｆａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ０．２％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄ（２２∶７８）ａｔｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｏｆ２８０ｎｍ．ＲＥＳＵＬＴＳ　ＲａｄｉｘＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ，ＲａｄｉｘＡｎｇｅｌｉｃａＳｉｎｅｎｓｉｓａｎｄＲａｄｉｘＰｏｌｙｇａｌａｅｃｏｕｌｄｂｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙＴＬＣ．Ｔｈｅｂａｉｃａｌｉｎｌｉｎｅａｒｒａｎｇｏｆ０．１９３４－１．１６０６μｇ，ａｎｄｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ１０１．４５％（ＲＳＤ＝１．２％，ｎ＝６）．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ｔｈｅｅｖａｌｕａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓａｒｅｓｉｍｐｌｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ，ａｎｄｃａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆｔｈｉｓｍｅｄｉｃｉｎｅ．ＫＥＹＷＯＲＤＳ：ＲａｄｉｘＥｔＲｈｉｃｏｍａＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ；ＲａｄｉｘＡｎｇｅｌｉｃａＳｉｎｅｎｓｉｓ；ＲａｄｉｘＰｏｌｙｇａｌａｅ；ｂａｉｃａｌｉｎ；ＴＬＣ；ＨＰＬＣ　　定心丸收载于中药部颁标准第六册，由甘草（蜜炙）、远志、黄芩、当归等十五味药组成，具有益气养血，宁心安神的功效，用于心血不足，烦躁失眠，健忘怔忡，惊悸多梦等症［１］。但长期以来标准中对于本制剂仅有显微鉴别和性状鉴别，质量标准不够完善，故内在质量一直难以有效控制。本研究在参考有关文献的基础上，通过大量的实验研究，建立了定心丸的定性、定量方法，为该制剂质量标准的建立提供了可行的方法及依据。１　仪器与试药１．１　仪器高效液相色谱仪（日本岛津，ＬＣ１０ＡＤＶＰ二元泵；ＳＰＤ１０ＡＶＰ紫外可见检测器）；硅胶Ｇ板（青岛海洋化工厂）。１．２　试药定心丸（批号：０６１１００１、０６１１００２、０６１１００３）由李时珍医药集团有限公司提供；对照药材　甘草（批号：１２０９０４２００５１１），远志（批号：１２０９８９２００３０４），当归（批号：９２７２００１１０），黄芩苷对照品（批号：１１０７１５２００４１３，供含量测定用）由中国药品生物制品检定所提供。　　乙腈（色谱纯），其他试剂均为分析纯。２　定性鉴别２．１　甘草薄层鉴别取本品６ｇ，研细，加乙醚４０ｍＬ，加热回流１ｈ，滤过，药渣加甲醇３０ｍＬ，加热回流１ｈ，滤过，滤液蒸干，残渣加水４０ｍＬ使溶解，用正丁醇提取３次，蒸干，残渣加甲醇１ｍＬ使溶解，作为供试品溶液。再取甘草对照药材０．２ｇ，同法制成对照药材溶液。另取不含甘草的本方制剂，同法制得缺甘草的阴性样品溶液。照薄层色谱法［２］试验，吸取上述３种溶液各２～３μＬ，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷甲醇水（３０∶１０∶１）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以１０％硫酸乙醇溶液，在１０５℃加热至斑点·７３２·中国现代应用药学杂志２００９年３月第２６卷第３期　　　　　　　　　　　　　　　ＣｈｉｎＪＭＡＰ，２００９Ｍａｒｃｈ，Ｖｏｌ．２６Ｎｏ．３显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照品则无此斑点。见图１。图１　甘草薄层鉴别１０６１１００１批供试品；２０６１１００２批供试品；３０６１１００３批供试品；４甘草对照药材；５阴性Ｆｉｇ１　ＴＬＣｏｆＲａｄｉｘＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ１ｓａｍｐｌｅｏｆ０６１１００１；２ｓａｍｐｌｅｏｆ０６１１００２；３ｓａｍｐｌｅｏｆ０６１１００３；４ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｃｒｕｄｅｄｒｕｇｏｆＲａｄｉｘＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ；５ｓａｍｐｌｅｗｉｔｈｏｕｔＲａｄｉｘＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ２．２　当归薄层鉴别取本品３ｇ，研细，加乙醚２０ｍＬ，超声处理１０ｍｉｎ，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇１ｍＬ使溶解，作为供试品溶液。再取当归对照药材０．２ｇ，同法制成对照药材溶液。另取不含当归的本方制剂，同法制得缺当归的阴性样品溶液。照薄层色谱法［２］试验，吸取上述３种溶液各２～３μＬ，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以正己烷乙酸乙酯（９∶１）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（３６５ｎｍ）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品则无此斑点。见图２。图２　当归薄层鉴别１０６１１００１批供试品；２０６１１００２批供试品；３０６１１００３批供试品；４当归对照药材；５阴性Ｆｉｇ２　ＴＬＣｏｆＲａｄｉｘＡｎｇｅｌｉｃａ１ｓａｍｐｌｅｏｆ０６１１００１；２ｓａｍｐｌｅｏｆ０６１１００２；３ｓａｍｐｌｅｏｆ０６１１００３；４ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｃｒｕｄｅｄｒｕｇｏｆＲａｄｉｘＡｎｇｅｌｉｃａ；５ｓａｍｐｌｅｗｉｔｈｏｕｔＲａｄｉｘＡｎｇｅｌｉｃａ２．３　远志薄层鉴别取本品３ｇ，研细，加盐酸无水乙醇溶液（１０→１００）２０ｍＬ，加热回流３０ｍｉｎ，放冷，滤过，滤液加水３０ｍＬ，用三氯甲烷提取２次，每次２０ｍＬ，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加乙酸乙酯１ｍＬ使溶解，离心，取上清液作为供试品溶液。另取远志对照药材０．２ｇ，同法制成对照药材溶液。再取不含远志的本方制剂，同法制得缺远志的阴性样品溶液。照薄层色谱法［２］试验，吸取上述三种溶液各２～３μＬ，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以甲苯乙酸乙酯甲酸（１４∶４∶０．５）为展开剂，展开，取出晾干，喷以１０％硫酸乙醇溶液，在１０５℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，阴性对照品则无此斑点。见图３。图３　远志薄层鉴别１０６１１００１批供试品；２０６１１００２批供试品；３０６１１００３批供试品；４远志对照药材；５阴性Ｆｉｇ３　ＴＬＣｏｆＰｏｌｙｇａｌａｔｅｎｕｉｆｏｌｉａＷｉｌｌｄ１ｓａｍｐｌｅｏｆ０６１１００１；２ｓａｍｐｌｅｏｆ０６１１００２；３ｓａｍｐｌｅｏｆ０６１１００３；４ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｃｒｕｄｅｄｒｕｇｏｆＰｏｌｙｇａｌａｔｅｎｕｉｆｏｌｉａＷｉｌｌｄ；５ｓａｍｐｌｅｗｉｔｈｏｕｔＰｏｌｙｇａｌａｔｅｎｕｉｆｏｌｉａＷｉｌｌｄ３　定心丸中黄芩苷的含量测定［３］３．１　色谱条件色谱柱：ＨｙｐｅｒｓｉｌＯＤＳ（２５０ｍｍ×４．６ｎｍ，５μｍ）；流动相：乙腈０．２％磷酸（２８∶７２），流速：１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长：２８０ｎｍ，柱温：室温，进样量：２０μＬ。３．２　方法与结果３．２．１　供试品溶液的制备　取本品０．６ｇ，精密称定，加７０％乙醇８０ｍＬ，加热回流１ｈ，放冷，滤过，滤液置１００ｍＬ量瓶，用少量７０％乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加７０％乙醇至刻度，摇匀，即作为供试品溶液。３．２．２　对照品溶液的制备　取黄芩苷对照品适量，精密称定，加７０％乙醇制成每１ｍＬ含４０μｇ的溶液，即得。３．２．３　空白对照液的制备　按处方组成和工艺要·８３２·ＣｈｉｎＪＭＡＰ，２００９Ｍａｒｃｈ，Ｖｏｌ．２６Ｎｏ．３　　　　　　　　　　　　　　　中国现代应用药学杂志２００９年３月第２６卷第３期求制成缺黄芩的样品，按“３．２．１”项下制备成空白对照液。３．２．４　系统适应性　在本实验条件下，取黄芩苷对照品溶液、空白对照液、供试品溶液分别进样２０μＬ。见图４。黄芩苷峰与其他峰分离度大于１．５，理论板数按黄芩苷峰计算不低于２０００。图４　黄芩苷对照品（Ａ）、空白对照液（Ｂ）和定心丸样品（Ｃ）的ＨＰＬＣ图Ｆｉｇ４　ＨＰＬＣｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓｏｆｂａｉｃａｌｉｎｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓｕｂｓｔａｎｃｅ（Ａ），ｓａｍｐｌｅｗｉｔｈｏｕｔｂａｉｃａｌｉｎ（Ｂ）ａｎｄｓａｍｐｌｅ（Ｃ）３．２．５　线性关系考察　精密量取黄芩苷对照品储备液（９６．７μｇ·ｍＬ－１）１，２，４，６，８ｍＬ，分别置１０ｍＬ量瓶中，加７０％乙醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取２０μＬ注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以对照品峰面积为纵坐标（Ｙ），对照品溶液进样量为横坐标（Ｘ），绘制标准工作曲线，得回归方程为：Ｙ＝１６０４４Ｘ＋７９１９．６，ｒ＝０．９９９７。黄芩苷在０．１９３４～１．１６０６μｇ内线性良好。３．２．６　重复性试验　精密称取同一批（批号：０６１１００３）供试品６份，按“３．２．１”项下方法处理，进样测定，含量平均值为４０．９５μｇ·ｍＬ－１，ＲＳＤ为１．４％，说明方法的重复性较好。３．２．７　回收率试验　精密称取已知含量的样品（批号：０６１１００３）６份，每份０．３ｇ，分别加入黄芩苷对照品储备液适量，按“３．２．１”项下制备，依法测定。结果见表１。表１　加样回收试验结果Ｔａｂ１　Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｒｅｃｏｖｅｒｙｔｅｓｔ已知量／μｇ加入量／μｇ测得总量／μｇ回收率／％平均回收率／％ＲＳＤ／％２０４７２０１５４０６４１００．００２０５１２０１５４１１５１０２．５８２０５２２０１５４１１７１０２．６８１０１．４５１．２２０４７２０１５４１０８１０２．２３２０５３２０１５４０８６１０１．１４２０５３２０１５４０６４１００．０５３．２．８　样品含量的测定　分别取３批定心丸样品（每批２份）约０．６ｇ，精密称定，按“３．２．１”项下处理，进样测定，外标法计算黄芩苷的含量，结果见表２。表２　样品含量测定结果Ｔａｂ２　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆｓａｍｐｌｅｓ批号测得含量／ｍｇ０６１１００１４．１２８０６１１００２４．１２６０６１１００３４．１２８４　讨论４．１　薄层色谱条件的考察在ＴＬＣ鉴