鼠疫病原学检验的实验室质量控制

2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心鼠疫病原学检验的实验室质量控制宁夏疾病预防控制中心人畜共患病实验室2014年4月1日NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班鼠疫病原学检验的实验室质量控制质量控制的定义鼠疫病原学检验的质量控制方法鼠疫病原学检验方法动物间鼠疫疫情的实验室复判2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心实验室质量控制的定义NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班实验室质量控制的定义质量控制(QualityContro,lQ.C)是监视全过程,排除误差,防止变化,维持标准化现状的一个管理过程。鉴于鼠疫细菌学检验的重要性,有必要对其进行规范化管理。鼠疫细菌学检验质控(QualityControloftestYersiniaPestis)是鼠疫微生物学实验室为了保证检验结果实事求是地反映客观存在而建立的操作程序体系。2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心鼠疫病原学检验的质量控制方法NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班室内质控(InternalQualityControlIQC)是指一个实验室内部对所有影响质量的各个环节进行系统控制，是由实验室内部制定并实施的，是质量保证的核心和基础。目的是控制本实验室常规工作的精密度，提高常规工作前后的一致性。室间质控(ExternalQualityAssessment简称EQA)简称室间质评。室间质控由上级业务单位采用一系列的办法连续地、客观地评价各实验室的试验结果，并发现室内质控不易发现的不准确性，了解各实验室之间结果的差异，并帮助校正，使具有可比性，这种评价是一种回顾性评价。室内质控主要监测试验结果的精密度，而室间质控主要控制实验结果的准确度，不互相替代，参与室间质控的试验室应先做好室内质控。鼠疫病原学检验的质量控制方法NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班鼠疫病原学检验的质量控制方法人员与组织管理仪器设备的质控疑似鼠疫材料的采取、保存和运输培养基、染色液、试剂盒等的质量控制鼠疫细菌检验程序及结果判定报告卡的书写、疫情上报及交换室内质控NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班室内质控扎实的基础教育和专业知识职业道德和高度的责任心质量管理体系各实验室制定SOP专业化的技能培训继续教育人员与组织管理NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班室内质控性能试验正确贮存无菌试验诊断试剂盒(噬菌体等)培养基量pH值试剂的质量控制NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班室内质控生物安全柜显微镜高压锅离心机培养箱冰箱仪器设备NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班鼠疫病原学检验的质量控制方法设立参比实验室发质控物进行检查评价定期举办各级培训班派观察员到实验室进行检查指导室间质控方法NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班室间质控的一般检查项目实验室的布局SOP制订及执行情况实验室安全防护和污染物处理室内质控执行情况及各种纪录发放模拟标本(菌种)，规定时间内反馈至上级业务单位以pH值、软硬度、鼠疫菌生长数量(活菌数)等为综合指标对培养基进行质控和用已知菌对噬菌体进行质控盲点试验，模拟标本混入监测标本常规测定对结果进行评价，分析错误原因2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心鼠疫病原学检验方法NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班鼠疫病原学检验方法染色镜检培养特性噬菌体裂解动物实验基因检测NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班鼠疫病原学检验方法鼠疫病原体发现：1894年，在香港，日本学者北里柴三郎和法国学者亚力山大耶尔森二氏。分类位置：肠杆菌科耶尔森菌属。生物学特性分子生物学特性：6MD、45MD、65MD三种质粒；目前已知IS100、IS285、IS1541、IS1661四种插入序列，分布于鼠疫菌质粒的染色体基因组中。毒力决定因子:F1抗原，VWa抗原，Pstl，Pgm分型:古典、中世纪、东方、田鼠变种四个生物变种；5个群（A、B、C、D、E群），21个生态型。NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班染色镜检革兰氏染色美兰染色典型的鼠疫菌是短而粗、两端钝圆、两极浓染的椭圆形小杆菌，革兰氏染色阴性。NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班细菌培养NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班病原学在普通培养基上28－30℃经24h，肉眼可见形成薄薄一层淡灰色小菌落,圆形，有光泽，中心稍突起。透过光线呈灰白色或淡青色，菌落较干燥，镜下：中央隆起中心发暗，有粗糙颗粒（黄褐色）周围有薄而透明的花边，呈锯齿状。培养特性NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班Y.PEVY.E耶尔森菌属三个致病菌形态比较NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班噬菌体裂解实验28－30℃24h噬菌带明显NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班观察1-9天，可以从感染动物体内检出鼠疫菌为阳性。动物实验NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班鼠疫菌的基因检测病原学的检测NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班DNA提取水煮法提取可疑鼠疫菌DNA对于脏器标本，在强毒实验室以无菌手续取动物的各种脏器(心、肝、脾、肺)约1g，加入到等量生理盐水中，研碎，100℃水浴中煮沸10min，离心，取上清直接用作PCR模板对于培养可疑鼠疫菌，在平板上刮取可疑鼠疫菌于装有500ul蒸馏水（生理盐水）的1.5ml离心管中，于沸水浴中煮10min，离心上清液中含有可疑鼠疫菌DNA作为PCR模板。细菌基因组DNA提取试剂盒提取鼠疫菌基因组DNA操作方法可根据试剂盒说明书进行操作。鼠疫菌的基因检测NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班体系配制PCR-bufferdNTP引物（2对各1ul）TaqDNA聚合酶模板纯水总体积25ul2.5ul2ul4ul1ul（2.5U)1ul14.5ul鼠疫菌的基因检测NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班PCR扩增93℃5min90℃1min60℃1min72℃1min30cycle72℃10min4℃保存鼠疫菌的基因检测NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班琼脂糖凝胶鼠疫菌的基因检测NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班拍照鼠疫菌的基因检测NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班脏器悬液基因检测：FI特异性片249bp，Pla特异性片456bpNingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班菌悬液基因检测：FI特异性片249bp，Pla特异性片456bpNingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班PCR操作鼠疫菌株的复苏、培养、传代、核酸提取均在BSL-2实验室操作其余PCR过程在普通实验室操作2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心动物间鼠疫疫情的实验室复判NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班动物间鼠疫疫情的实验室复判复判流程日常监测胶体金抗体阳性间接血凝（抑制）阳性自毙鼠培养鉴定为阳性胶体金抗原阳性反向血凝（抑制）阳性培养鉴定为阳性报自治区疾控中心复判NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班NingCenterforDiseaseControlandPrevention宁夏疾病预防控制中心2014年全区鼠防工作会议暨鼠疫监测技术培训班谢谢大家！电子邮箱：[e-mail]电话：[phone]