生物安全实验室操作技术规范(打印版)

生物安全实验室操作生物安全实验室操作技术规范技术规范黎黎薇薇广东省疾病预防控制中心广东省疾病预防控制中心微生物检验所微生物检验所内容提要••概述概述••病原微生物实验室的生物危险病原微生物实验室的生物危险••生物安全实验室的生物安全实验室的操作和管理操作和管理规范规范••生物安全柜的使用生物安全柜的使用规范规范••实验室仪器设备的使用规范实验室仪器设备的使用规范••感染性材料的操作与防护规范感染性材料的操作与防护规范概概述述实验室生物安全实验室生物安全操作者社区环境操作对象(病原体)实验室生物安全培训的目的树立生物安全和生物保安意识•保护自己•保护同事•保护社区•保护环境病原微生物实验室相关感染的途径实验室的生物安全规范实验室的生物安全规范••实验室的运行管理规范实验室的运行管理规范••仪器设备的使用规范仪器设备的使用规范••针对感染性材料的操作规范针对感染性材料的操作规范••个人防护用品的使用规范个人防护用品的使用规范••实验室生物安全手册实验室生物安全手册…………•LaboratoryBiosafetyManual,3rdedition-labcommissioningandcertification-labbiosecurityconceptsBiosafety:Topromotetheuseofsafepracticesinthehandlingofpathogenicmicroorganisms•inthelaboratory•duringtransportation•infieldinvestigations•inmanufacturingfacilities•inhealth-carefacilitiesLaboratoryBiosafetyManual1stedition1983199320032004WHOLaboratoryBiosafetyManual-translatedintoF,S,P,Ch,Ru-availableonweb,CD-Rom,hardcopies病原微生物实验室病原微生物实验室的生物危险的生物危险实验室主要生物危实验室主要生物危险险••微生物气溶胶吸入微生物气溶胶吸入••刺伤、割伤刺伤、割伤••皮肤、黏膜污染皮肤、黏膜污染••食入食入••感染的实验动物咬伤感染的实验动物咬伤…………还有许多不明原因的实验室相关感染还有许多不明原因的实验室相关感染实验室微生物气溶胶的定义实验室微生物气溶胶的定义气溶胶是指悬浮于气体介质中粒径一般为0.001-100μm的固态或液态微小粒子形成的相对稳定的分散体系。BSLBSL--11和和BSLBSL--22实验室实验室生物安全生物安全管理和操作管理和操作规范规范一级生物安全防护水平（BSL－1）0适合于已知其特征的、在健康成人中不引起疾病的、对实验室工作人员和环境危害性最小的生物因子的工作。0许多通常与人类疾病不相关的病原微生物是条件致病性的。0对于在体内已经繁殖多代的疫苗株不要简单地认为是无毒的。BSL－1实验室★不需要特殊的一级和二级屏障、除需要洗手池外，依靠标准的微生物操作即可获得基本的防护平。二级生物安全防护水平（BSL－2）★适用于操作我国的第三类（少量二类）危害的致病微生物。★适合于从未知病原的人身上取血、体液和组织。★对工作人员的主要危害是破损的皮肤或粘膜偶然与感染性材料接触、或吞食感染性食物。必须强调对污染的针头或利器的使用要非常谨慎。BSL－2实验室★微生物操作必需在一级生物安全防护水平的基础上，增加生物安全柜、高压灭菌器、安全离心机罩帽、防溅罩或面罩等。（一）实验室的进入（一）实验室的进入（二）防护要求（二）防护要求••穿着合适的工作服或防护服穿着合适的工作服或防护服••戴上合适的手套戴上合适的手套••在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开实验室工作区域前，在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开实验室工作区域前，都必须洗手。都必须洗手。••为了防止眼睛或面部受到喷溅物的污染、碰撞或人工紫外线辐射的伤为了防止眼睛或面部受到喷溅物的污染、碰撞或人工紫外线辐射的伤害，必须戴合适的安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。害，必须戴合适的安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。••严禁穿着实验室防护服离开实验室工作区域。严禁穿着实验室防护服离开实验室工作区域。••不得在实验室内穿露脚趾的鞋。不得在实验室内穿露脚趾的鞋。••禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。••禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。••在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。（三）有关操作的指导原则（三）有关操作的指导原则•严禁用口吸移液管,严禁将实验材料置于口内。严禁舔标签。•所有的实验操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。•应限制使用注射针头和注射器。•实验室应制订并执行处理溢出物的标准操作程序。•污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染（采用化学或物理学方法）。•污染的文件不能带出实验室（四）实验室工作区的管理原则（四）实验室工作区的管理原则实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和实验无关的物品。•每天工作结束后应清除工作台面的污染。若发生具有潜在危害性的材料溢出应立即清除污染。•所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前，必须先清除污染。•感染性材料的包装和运输应遵循国家和∕或国际的相关规定。•如果窗户可以打开，则应安装防止节肢动物进入的纱窗。（五）生物安全管理的指导原则••实验室负责人负责制订和采用生物安全管理计划以及实验实验室负责人负责制订和采用生物安全管理计划以及实验室安全或室安全或//和操作手册。和操作手册。••实验室应能提供常规的实验室安全培训实验室应能提供常规的实验室安全培训,,并建立制度。并建立制度。••实验室负责人（或生物安全负责人）要将生物安全实验室实验室负责人（或生物安全负责人）要将生物安全实验室的特殊危害告知实验室人员，同时要求他们阅读生物安全的特殊危害告知实验室人员，同时要求他们阅读生物安全或或//和操作手册，并遵循标准的操作程序。实验室内应备和操作手册，并遵循标准的操作程序。实验室内应备有可供取阅的安全或有可供取阅的安全或//或操作手册。所有实验室人员必须或操作手册。所有实验室人员必须经过培训，了解所从事工作的危险、掌握有关的管理规定经过培训，了解所从事工作的危险、掌握有关的管理规定和操作程序，通过考核后方可从事相关实验室工作。和操作程序，通过考核后方可从事相关实验室工作。••应当制订节肢动物和啮齿动物的控制方案。应当制订节肢动物和啮齿动物的控制方案。••如有必要，应为所有实验室人员提供适宜的医学评估、监如有必要，应为所有实验室人员提供适宜的医学评估、监测和治疗，并建立健康档案。实验室人员应接受与所操作测和治疗，并建立健康档案。实验室人员应接受与所操作生物因子或实验室内潜在的因子相关的免疫接种或检测。生物因子或实验室内潜在的因子相关的免疫接种或检测。生物安全柜的使用生物安全柜的使用规范规范生物安全柜内感染性材料溢洒的处理生物安全柜内感染性材料溢洒的处理••当发生少量溢洒时，应用吸收纸巾立即处理，并立即用浸满消毒液的当发生少量溢洒时，应用吸收纸巾立即处理，并立即用浸满消毒液的毛巾或纱布对生物安全柜及其内部的所以物品进行擦洗。工作面消毒毛巾或纱布对生物安全柜及其内部的所以物品进行擦洗。工作面消毒后应更换手套，不论是摘下手套还是更换手套都要洗手。后应更换手套，不论是摘下手套还是更换手套都要洗手。••若发生大量溢洒，液体会通过生物安全柜前面或后面的格栅流到下面若发生大量溢洒，液体会通过生物安全柜前面或后面的格栅流到下面去，生物安全柜内所有的物品都应该进行表面消毒并拿出生物安全去，生物安全柜内所有的物品都应该进行表面消毒并拿出生物安全柜，在确保生物安全柜的排水阀被关闭后，可将消毒液倒在工作台面柜，在确保生物安全柜的排水阀被关闭后，可将消毒液倒在工作台面上，使液体通过格栅流到排水盘上。所有接触溢出物品的材料都要进上，使液体通过格栅流到排水盘上。所有接触溢出物品的材料都要进行消毒和行消毒和//或高压灭菌处理。或高压灭菌处理。实验室仪器设备的使用实验室仪器设备的使用仪器相关危险仪器相关危险干燥器爆裂、瓶子碎片和感染性物质飞出培养物搅拌器，混合器，搅拌器产生气溶胶、喷溅和溢出皮下注射针头意外接种产生气溶胶或感染性物质溢出离心机产生气溶胶、溅出和管子破裂超速离心机管子破裂高速搅拌器，组织匀浆器飞沫、渗漏和容器破裂超声波破碎机、超声波清洁器产生气溶胶、听力受损、皮炎冻干机（冷冻干燥机）产生气溶胶、直接接触污染水浴微生物生长，叠氮化钠和一些金属形成爆炸复合物（一）吸管和移液器的使用（一）吸管和移液器的使用•为防止感染，严禁用嘴吸液。应使用机械移液装置。•所有的吸管都应该有棉塞以减少对移液器或吸球的污染。建议使用带有滤芯的吸头。•对于感染性材料不能用吸管吹打来达到混匀的目的，操作时吸管应放入操作液面下的三分之二处，以防止产生气泡和气溶胶。从吸管吹出液体时也不要太用力，吸管内的液体应自动流出，不要强制性排出预留液。•污染的吸管应立即浸没在含有适宜的消毒剂的防破碎的容器里。在处理之前，应浸泡足够长的时间。盛装废弃吸管的容器应放在生物安全柜里，而非外面。•严禁用带有注射针头的注射器吸液。•为防止从吸管滴落的感染性物质发生扩散，工作台表面应放一块具有吸收性能的材料，使用后应按感染性废弃物予以处理。（二）离心机的使用（二）离心机的使用离心分类转头转速（rpm）微速离心～15,000低/高速离心2,000～20,000超速离心～120,000离心可能造成的伤害途径离心可能造成的伤害途径-离心机机械故障-实验器材故障，如离心管等-产生气溶胶；-操作者失误。•所有的离心机应处于正常的工作状态并具有合格的机械性能，要根据厂家的说明书进行操作。•离心机应放到适宜的位置和高度，以使工作人员能看见离心桶并便于进行各项操作。•用于离心的离心管和标本容器应该根据厂家要求选用，昀好使用塑料制品，而且在使用前应检查有无破损。•使用转头时应注意转头盖与转头型号是否匹配。操作病原微生物时，离心桶的装载、平衡、密封和打开必须在生物安全柜内进行。空离心桶配平时应该用蒸馏水或70％乙醇、异丙醇，不应使用盐水和次氯酸盐溶液。离心管内液面水平距管口应留出一定空隙，以确保离心过程中液体不会溢出，尤其是使用角转头时更要注意。•应该每天检查在特定的转速下，离心杯的内表面有无污物。离心转头和离心桶应每天检查有无腐蚀点以及极细的裂缝，以确保安全。离心桶、转头和离心机腔每次用后都应该消毒。每次用后，应该把离心桶倒放，以排净离心配平的液体。•对于高致病性病原微生物，必须要高度警惕离心过程中产生的气溶胶风险。－大型离心机上应加装负压罩，以及时吸出离心机排出的气体，并排至实验室的过滤通风系统，在BSL-3及以上级别实验室尤其要注意。－微型离心机则可放在安全柜内离心，但要注意其对安全柜气流的影响。－如果不能在安全柜内离心也无负压罩，则必须将密封的转头在安全柜内打开。－所有的离心管必须带盖密封，其开启应在安全柜内进行。（三）冰箱和冰柜的使用和保养（三）冰箱和冰柜的使用和保养••冰箱、低温冰箱和干冰柜应当定期除霜和清洁，应清理出冰箱、低温冰箱和干冰柜应当定期除霜和清洁，应清理出所有在储存过程中破碎的安瓿和试管等物品。清理时应戴所有在储存过程中破碎的安瓿和试管等物品。清理时应戴厚橡胶手套并进行面部防护，清理后要对内表面进行消毒。厚橡胶手套并进行面部防护，清理后要对内表面进行消毒。••储存在冰箱内的所有容器应当清楚地标明内装物品的科学储存在冰箱内的所有容器应当清楚地标明内装物品的科学名称、储存日期和储存者的姓名。未标明的或废旧物品应名称、储存日期和储存者的姓名。未标明的或废旧物品应当高压灭菌并丢弃。当高压灭菌并丢弃。••应当