动物细胞融合与单克隆抗体课件(用)

生物种间杂交想像图已成功的动物细胞融合实例有很多，如人—小鼠、人—兔、人—鸡、鼠—兔、鸡—鼠等上百种融合细胞。甚至已成功完成了酵母菌—鸡、人—胡萝卜等细胞的融合。想了解更多信息，可通过网络、电视、杂志等途径关注细胞融合和单克隆抗体的最新信息。有梦想，才会有创造！一、动物细胞融合请同学们阅读课本P52动物融合1.概念：动物细胞融合（cellfusion）也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为杂交细胞。2、原理：细胞膜的流动性一、动物细胞融合3、动物细胞融合过程为什么灭活的病毒能作诱导剂？灭活丧失感染性保留融合活性二.动物细胞融合诱导融合的方法物理法：化学法：生物法：电激、离心、振动聚乙二醇（PEG)灭活的病毒4.意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。5.应用：最重要的用途是制备单克隆抗体总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理融合前处理诱导方法用途细胞膜的流动性、植物细胞的全能性细胞膜的流动性用纤维素酶、果胶酶去壁用胰蛋白酶使细胞分散物理、化学方法物理、化学、生物方法获得部分或完整植株主要用于制备单克隆抗体二、单克隆抗体什么是单克隆抗体单：克隆：抗体：单个细胞？无性繁殖抗原————抗体特异性结合1.抗体是由何种细胞产生的？2.抗体是如何产生的？？单克隆抗体抗原动物体内刺激浆细胞抗体抗体不纯筛选单一浆细胞不能增殖产生大量抗体产量少、纯度低、特异性差单克隆抗体4、传统制备抗体的缺点是？3、传统制备抗体的方法是？如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？单克隆抗体问题讨论提示：1.什么样的细胞可以产生抗体？2.什么样的细胞可以无限增殖？设计方案：一个B淋巴细胞:只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞:能无限增殖杂交瘤细胞单克隆抗体既能无限增值又能产生特异性抗体特点杂交细胞灭活的病毒等手段小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞经免疫的小鼠提取杂交瘤细胞第一次筛选用特定的选择性培养基第二次筛选能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞体外培养注射到小鼠腹腔提取单克隆抗体BBBB瘤瘤瘤瘤细胞融合后培养液中有几种细胞？筛选杂种细胞已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加PEG促融，获得杂种细胞。单克隆抗体思考：单克隆抗体思考：1.小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？2.制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活细胞融合技术、细胞培养技术单克隆抗体①在基础理论研究中具有重要意义②在疾病诊断、治疗和预防方面，具有特异性强、灵敏度高等优越性。③生物导弹（作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤）单克隆抗体的应用1.动物特异性免疫2.分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn）3.细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG）4.第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。）5.第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。6.选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。7.提取单克隆抗体。单抗的制备过程要点：下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案3、图中B为________过程，常用_________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。1、该实验方案的目的是__________2、A是从小鼠的脾脏中取得_______,该细胞能够产生______4、C过程指细胞培养，该过程包括_____培养和_____培养两个阶段。制备单克隆抗体B细胞抗体细胞融合灭活病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC