激光共聚焦显微镜操作手册

1LSM510andLSM510META激光扫描共聚焦显微镜简明操作手册Release3.5January20052启动系统共聚焦系统的开关将REMOTECONTROL上的System/PC开关和Components开关置于ON的位置(图1)。打开汞灯电源开关图1REMOTECONTROL开关3启动共聚焦软件LSM510双击计算机桌面上的LSM510图标启动共聚焦软件。出现以下窗口(图3)。图3LSM510启动菜单点击ScanNewImages按钮。点击StartExpertMode按钮。出现以下窗口(图4)。主菜单主菜单工具栏二级工具栏图4主菜单4为采集的图像建立数据库点击主菜单工具栏上的File按钮。在下一行出现File的二级工具栏(图5)。图5File的二级工具栏点击New按钮。出现CreateNewDatabase窗口。选择驱动器D:。选择文件夹，输入数据库名，并点击Creat按钮。如果需要，建立新文件夹。图6CreateNewDatabase窗口图7CreateNewDatabase窗口5启动激光点击主菜单工具栏上的Acquire按钮打开Acquire下的二级工具栏(图8)。图8Acquire二级工具栏点击Laser按钮打开LaserControl窗口(图9)。通过点击激光单元的名字选择需要的激光。点击Standby按钮。当状态显示为Ready，点击On按钮。如果没有Standby按钮，则直接点击On按钮。图9LaserControl窗口6设置显微镜在直接观察和激光扫描之间切换通过VIS，TV和LSM按钮在直接观察和激光扫描之间切换光路设置：点击VIS按钮将光路设置为通过目镜直接观察，此时激光切断。点击LSM按钮将光路设置为激光扫描，在显示器屏幕显示图像。设置显微镜点击VIS按钮切换到直接观察。点击Micro按钮打开MicroscopeControl窗口(图10).7选择物镜点击Objective按钮(图10)。点击需要使用的物镜，所选择的物镜会自动转入光路。以荧光观察方式聚焦样品把样品放置在载物台上，盖波片要朝向物镜。点击ReflectedLight按钮，打开汞灯光闸。点击Reflector按钮，根据样品所标记的荧光染料选择滤光片。对样品聚焦。选择需要观察的视野。图10MicroscopeControl窗口，如：Axiovert200M图11MicroscopeControl窗口8配置光路和激光点击LSM按钮切换到激光扫描。图12ConfigurationControl窗口点击Config按钮打开ConfigurationControl窗口(图12)。在通道模式下配置singletrack光路点击ChannelMode按钮(图12)。点击SingleTrack按钮(图12)。9点击Config按钮，打开TrackConfigurations窗口(图14)。在下拉列表中选择与样品所标记的荧光染料相匹配的光路配置，并点击Apply按钮。图14TrackConfigurations窗口10扫描图像点击Scan按钮，打开ScanControl窗口(图16)。设置初始扫描参数并扫描点击Mode按钮点击Frame按钮设置图像类型点击512按钮设置扫描分辨率点击Reset按钮重置变倍和视野中心点击Max按钮设置扫描速度点击12Bit按钮及按钮选择Number为1点击Channels按钮点击1按钮图16ScanControl窗口点击Find按钮11优化扫描点击图像右侧的Palette按钮，选择RangeIndicator。点击Cont按钮进行连续扫描。调节DetectorGain，使图像中仅留少量红色像素。调节AmplifierOffset，使图像背景为蓝色。点击Stop按钮停止扫描。点击图像右侧的Palette按钮，选择NoPalette。点击Mode按钮点击1024或2048按钮设置较高的扫描分辨率选择Number为2或4点击Single按钮，完成较高质量的图像扫描12保存图像点击图像窗口右侧的Save或SaveAs按钮，打开SaveImageandParameterAs窗口输入文件名点击OK按钮关闭系统点击Laser按钮，选择所使用的激光，点击Off按钮。点击File按钮，再点击Exit按钮(图5)。关闭计算机。等候5分钟左右，至Ar离子激光器的风扇停止运转。将REMOTCONTROL上的Components开关和System/PC开关置于OFF(图1)。关闭汞灯电源13