检验医学SOP文件3--临检室作业指导书

ISO15189质量管理体系范本文件（第三册）临检室作业指导书文件编号：ABCD-3-LJ-01~50第A版编制：审核：批准：生效日期：2015年4月8日ABCD人民医院检验科ABCD人民医院检验科临检室作业指导书文件编号：版本/修订号：A/0主题内容目录生效日期：20150408第2页共143页目录序号主题内容代号页号1血红蛋白电泳检查（电泳法）ABCD-3-LJ-0152精液常规检查ABCD-3-LJ-0293粪便常规检查（直接涂片法）ABCD-3-LJ-03124粪便潜血试验定性（纸片法）ABCD-3-LJ-04145尿沉渣检查(UD-S仪器法)ABCD-3-LJ-05166血疟原虫(MP)厚血片检查法ABCD-3-LJ-06217血疟原虫(MP)薄血片检查法ABCD-3-LJ-07238尿人绒毛膜促性腺激素定性ABCD-3-LJ-08259阴道分泌物常规检查ABCD-3-LJ-092710一小时尿沉渣计数ABCD-3-LJ-102911Xt2000i红细胞计数ABCD-3-LJ-113112Xt2000i白细胞检验ABCD-3-LJ-123313Xt2000i白细胞分类计数ABCD-3-LJ-133614Xt2000i血红蛋白检测ABCD-3-LJ-143915全血血细胞沉降率测定ABCD-3-LJ-154116Xt2000i红细胞比积的测定ABCD-3-LJ-164317Xt2000i平均红细胞体积检测ABCD-3-LJ-174618Xt2000i血小板(PLT)测定ABCD-3-LJ-184819红细胞平均血红蛋白含量测定ABCD-3-LJ-195120红细胞平均血红蛋白浓度测定ABCD-3-LJ-205321尿液酸碱度测定（干法学法）ABCD-3-LJ-215522尿葡萄糖定性实验（干化学法）ABCD-3-LJ-225823尿蛋白定性测定（干法学法）ABCD-3-LJ-236124尿血红蛋白测定（干化学法）ABCD-3-LJ-2464ABCD人民医院检验科临检室作业指导书文件编号：版本/修订号：A/0主题内容目录生效日期：20150408第3页共143页25尿胆原定性测定（干法学法）ABCD-3-LJ-256726脑脊液蛋白定性试验（潘氏法）ABCD-3-LJ-267027脑脊液外观检查（目测法）ABCD-3-LJ-277328脑脊液有形成分检查（显微镜法）ABCD-3-LJ-287529尿亚硝酸盐定性测定（干法学法ABCD-3-LJ-297930凝血酶原时间（PT）测定ABCD-3-LJ-308131活化部分凝血活酶时间测定ABCD-3-LJ-318532凝血酶时间（TT）测定ABCD-3-LJ-328933血浆纤维蛋白原（Fbg）测定ABCD-3-LJ-339334骨髓巨核细胞计数ABCD-3-LJ-349735过氧化物酶染色（Washburn法）ABCD-3-LJ-359936糖原染色（Schiff法）ABCD-3-LJ-3610137中性粒细胞碱性磷酸酶染色ABCD-3-LJ-3710338尿微量白蛋白定量ABCD-3-LJ-3810539全血C-反应蛋白定量ABCD-3-LJ-3911040尿乳糜定性检查ABCD-3-LJ-4011441前列腺液常规检查（玻片法）ABCD-3-LJ-4111642血浆硫酸鱼精蛋白副凝固时间ABCD-3-LJ-4211743异常白细胞检查（显微镜法）ABCD-3-LJ-4311944异常红细胞检查（显微镜法）ABCD-3-LJ-4412345浆膜腔积液粘蛋白定性检查ABCD-3-LJ-4512846浆膜腔积液化学检查ABCD-3-LJ-4613147浆膜腔积液外观检查（目测法）ABCD-3-LJ-4713448浆膜腔积液有形成分检查ABCD-3-LJ-4813649血球分析仪操作维护规程ABCD-3-LJ-4913950血球分析仪操作手册ABCD-3-LJ-50143ABCD人民医院检验科临检室作业指导书文件编号：ABCD-3-LJ-01版本/修订号：A/0主题内容血红蛋白电泳检查生效日期：20150408第4页共143页修订页序号文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期123456789101112131415161718192021ABCD人民医院检验科临检室作业指导书文件编号：ABCD-3-LJ-01版本/修订号：A/0主题内容血红蛋白电泳检查生效日期：20150408第5页共143页血红蛋白电泳检查（电泳法）1.原理血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ。血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同。本实验在碱性（PH=8.60）条件下，以琼脂糖凝胶电泳的方法进行，对红细胞洗涤后造成溶血，电泳分离血红蛋白后以氨基黑染色。多余的染色液用酸性液体洗去。待琼脂糖凝胶板干燥后，肉眼可直接判别有无电泳条带异常。运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。2.标本采集2.1标本采集前病人准备：受检者应空腹。2.2标本种类：抗凝血2.3标本要求：抗凝剂选用EDTA，柠檬酸或肝素均可，避免碘乙酸。常规静脉采血1.8ml，加入含有109mmol/L枸橼酸钠溶液0.2ml的干燥。清洁试管中，充分混匀。4.标本储存：储存于2-8℃冰箱中，5天。5.标本运输：储存于2-8℃状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。6.标本拒收标准：细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。7.试剂7.1试剂名称：血红蛋白电泳检查试剂7.2试剂生产厂家：法国Sebia公司7.3包装规格：150tests7.4试剂盒组成琼脂糖凝胶10块溶血素1瓶缓冲液条带10包×2条薄滤纸1×10张氨基黑（浓缩液）1瓶×100ml点样模具滤纸10条×1盒7.5试剂储存条件及有效期：贮存于室温（15～30℃）或冰箱（2～8℃），不能冷冻。有效期两年。ABCD人民医院检验科临检室作业指导书文件编号：ABCD-3-LJ-01版本/修订号：A/0主题内容血红蛋白电泳检查生效日期：20150408第6页共143页8.仪器设备8.1仪器名称：SEBIA电泳仪8.2仪器厂家：法国Sebia公司8.3仪器型号：HYDRASYS9.操作步骤9.1血红蛋白液制作：抗凝血离心，5000rpm，5分钟，去掉血浆，用10倍体积的生理盐水洗涤红细胞3次，若红细胞体积小于10ul，需特别小心。取10ul红细胞加入130ul溶血液造成溶血。震荡混匀10秒钟，室温下培育5分钟待测。9.2启动电泳仪9.3将加样器放在一平板上，有数字的一端向上。各加样孔加入10ul溶血的样品，2分钟内加样完毕。将加样器放入保湿盒内，齿端向上（转运时用塑料齿保护架）。等待5分钟，使样品扩散至齿端。打开电泳仪盖，抬起电极和加样器支架。9.4使用HYDRAGEL15HEMOGLOBINCE时选择仪器的“HBTOTAL”程序（位于链盘左侧）。9.5从包装袋内取出缓冲条，拿出末端的塑料片，将缓冲条两端塑料片固定在电极支架背侧的钉上，塑料片应紧贴支架。9.6取出凝胶板。将薄的滤纸轻轻吸去凝胶板表面的多余液体，然后立即丢弃滤纸。在电泳仪温度控制板表面的边线内加200ul蒸馏水或去离子水。凝胶面朝上，放置凝胶板，边缘对齐边线。略略将凝胶弯曲，然后放平，使水均匀分布在凝胶板下面而不含气泡。9.7降低支架，使缓冲条不接触到凝胶板。9.8从保温盒里取出加样器。取时拿保护框。折断加样器齿端保护框。将加样器放在4号位置。9.9关上电泳仪盖子，按下键盘左侧的绿色箭头“START”键，电泳开始。9.10凝胶染色扫描9.10.1打开盖子9.10.2取出并丢弃加样器9.10.3升高两个支架，握住塑料端取出并丢弃缓冲条。9.10.4打开凝胶托架，平放，将干燥的凝胶片放入两层间，然后关上托架。9.10.5将凝胶支架放入染色池9.10.6取出凝胶支架，打开盖子，取出干燥的凝胶片。9.10.7在光密度仪的570nm处或以黄色滤光片扫描测定。使用HYDRYS，DVSE或ABCD人民医院检验科临检室作业指导书文件编号：ABCD-3-LJ-01版本/修订号：A/0主题内容血红蛋白电泳检查生效日期：20150408第7页共143页PREFERENCE光密度仪时，使A2片段的标记置于扫描板5mm的标志处。10.结果判断与参考范围扫描得到的只是每种血红蛋白条带的相对浓度值。取出胶片后，首先清洁胶片的背面。判断溶血液的浓度是否合适，主要看基质带的浓度，如基质带浓度过淡，说明溶血液的浓度太淡。正常时A2浓度大约为基质带浓度的1-2倍。半岁-成人:HbA≧94.5﹪,HbF﹤2.0％,HbA2﹤3.5％1个月：HbA12-40﹪,HbF60-93％,HbA20.1-1.0％6个月：HbA86-98﹪,HbF0.84-10.7％,HbA20.87-2.9％脐带血：HbA4-40﹪,HbF30-96％,HbA2﹤1.0％11.质量控制建议测定每一批样本时都附有一控制品或含有血红蛋白A,F,C和S的血样本。12.临床意义12.1检测β-地中海贫血12.1.1轻型：HbA2轻度升高，大多在4％-8％12.1.2中间型：HbA1A2缺如，HbF可达10％12.1.3重型：HbF：30％-90％，HbA多低于40％或甚至0％12.2检测α-地中海贫血12.2.1标准型α-地中海贫血：新生儿期HbBart′s可达5％-15％，几个月后消失。经煌焦油蓝温育后，少数红细胞内有H包涵体。血红蛋白电泳无异常发现。12.2.2血红蛋白H病：HbH在PH8.6或8.8电泳时，向阳极方向移动，泳速快于HbA;在PH6.5电泳时，仍向阳极方向移动。12.2.3血红蛋白Bart胎儿水肿综合症：HbBart′s占80％-100％，可有少量HbH。HbA、A2及F均缺如。12.3检测血红蛋白病：引起临床注意的异常血红蛋白有四种：S，C，E和D。12.3.1血红蛋白S：在碱性缓冲条件下血红蛋白S的条带位于A和A2片段之间12.3.2血红蛋白C：在碱性缓冲条件下血红蛋白C，E和A2的条带重叠在一起。若这一片段﹥15％，应怀疑有血红蛋白C或E的异常。12.3.3血红蛋白E：与血红蛋白C不同的是，E在酸性凝胶电泳中不与A2分离。12.3.4血红蛋白D：在碱性缓冲条件下，血红蛋白D和S的条带重叠在一起，但D在酸性凝胶电泳中不与A2分离。13.操作性能：灵敏度高、特异性强、操作简便，重复性好。14.注意事项：ABCD人民医院检验科临检室作业指导书文件编号：ABCD-3-LJ-01版本/修订号：A/0主题内容血红蛋白电泳检查生效日期：20150408第8页共143页14.1试剂贮存于室温（15～30℃）或冰箱（2～8℃）内，不能冷冻。14.2不要应用溶血标本14.3若检测到异常血红蛋白，而又与常见的异常血红蛋白S,C,D或E不同，可使用其他方法（如球蛋白链电泳）检测，或求助于有关专门实验室。14.4HbF小于全部血红蛋白的2％-3％时，扫描检测HbF（或其它一些较少见的血红蛋白）只是半定量的，结果不十分准确。14.5对于中度或重度贫血的病例，点样量应增大为15ul或20ul，其结果不受影响。14.6电泳过程中不能打开盖子。在染色脱色以及干燥过程中，仪器的一些程序处于锁定状态。14.7最后染色后立即扫描测定。若欲保存，可用一保护物覆盖后置于干燥、暗处，避免受热，可保存约3个月。ABCD人民医院检验科临检室作业指导书文件编号：ABCD-3-LJ-02版本/修订号：A/0主题内容精液常规检查生效日期：20150408第9页共143页精液常规检查1.实验原理纪录精液量、颜色、透明度、粘稠度和是否液化。显微镜检查包括精子