TRAP染色-protocol

TRAP染色（sigma-aldrich.NO387）Testprocedure：1.37℃预热足够的去离子水。2.Fixationsolution（固定液）室温放置，细胞爬片浸没30秒，用去离子水彻底清洗，不要让爬片太干燥。3.准备两个1.5mlEP管，各加0.5mLFastgarnetGBCBasesolution（快速石榴石型碱溶液）和0.5mLSodiumNitriteSolution（亚硝酸盐溶液）,轻轻混匀30秒，室温静置2分钟。两者混合后为步骤三混匀的溶液4.另标签一个50ml离心管为A（B），并按以下要求配置混合液：(个人意见：说明书的B不用做只是对照)？？？5.把步骤4中的配置的染色液倒入合适的染色缸中，水浴加热到37℃，再加玻片前一定要保证温度达到37℃。Note：个人意见：直接在35mm皿上放置可拆卸96微孔板染，然后避光水浴（锡箔纸包裹后放置于一次性手套）。6.把爬片放入染色缸中，37℃避光孵育1小时。7.孵育1小时后，用去离子水彻底清洗爬片可选步骤：（个人意见：要是苏木精染得技术不好还是别染了，最后步骤可省了）8.在HematoxylinGillNO.3(苏木精溶液)复染2分钟。9.碱性自来水冲洗几分钟，直到出现蓝色的核。10.自然晾干，甘油明胶封片，显微镜观察。Anotherone染色步骤：1.取6孔板，弃液，加PBS1ml/well清洗，弃PBS2.4%多聚甲醛（37°左右）1ml/well加入6孔板，置于孵箱25min取出，加1ml/wellPBS清洗3.1个1.5mlEP管，+fastgarnetGBCbasesolution（氨偶氮卞）0.5ml+sodiumNitritesolution(亚硝酸盐)0.5ml二者轻轻混匀30秒，室温静置2min4.37°超纯水45ml步骤3的液体1mlNaphtholAS-BIphosphatesolution（萘酚）0.5mlAcetatesolution（醋酸）2mlTartratesolution（酒石酸盐，避光加入）1ml依次加入25平方厘米培养瓶，混匀，至于孵箱5min左右，使混合液温度尽量达到37°5.取出配置好的染液，2ml/well加入6孔板6.6孔板置于37度孵箱中1h（避光）7.取出6孔板，超纯水冲洗3次，自然风干后镜下观察