抗原抗体反应及其应用

抗原抗体反应及应用傅慧2018年2月2一、抗原抗体反应的基本原理二、抗原抗体反应的类型三、免疫标记技术的应用内容3一、抗原抗体反应的基本原理4抗原与相应抗体的特异性结合反应称为抗原抗体反应。抗原抗体反应AgAb（）（）如同钥匙和锁的关系666抗原抗体反应的原理1、抗原抗体结合力（4种）2、抗原抗体亲和力和亲合力3、亲水胶体转化疏水胶体抗原抗体反应的原理电荷引力（静电引力）范德华引力氢键结合力疏水作用力71、抗原抗体结合力--静电引力（electrostaticforces）静电引力或库仑引力（Cou-lombicforces）是因抗原、抗体带有相反电荷的氨基（—NH3+）与羧基基团（—COO-）间相互吸引的能力，之间的引力，距离越近引力越大。81、抗原抗体结合力--范德华引力（VanderWaalsforces）分子间（或原子间)相互接近，分子极化产生引力，其作用取决于分子空间构型，如：凹槽与凸起互补，抗原与抗体，酶与底物。能量小于静电引力。91、抗原抗体结合力--氢键结合力（hydrogenbond）是供氢体上的氢原子与受氢体上氢原子间的引力。其结合力较强于范德华引力，能量大于范德华引力。101、抗原抗体结合力--疏水作用力（hydrophobicinteractions）水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。作用力最强，占总结合力的50％。11静电引力：异性相吸（electrostaticforces），离子键（Ionicbond）范德华引力:作用最小（vanderWaalsinteractions）氢键:最具特异性（hydrogenbond）疏水作用力:作用最大（hydrophobicinteractions）疏水作用力氢键结合力静电引力范德华引力1、抗原抗体结合力122、抗原抗体亲和力和亲合力是指抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原决定簇之间相适应而存在着的引力，是抗原抗体间固有的结合力。亲和力（affinity)13亲和力是指反应系统中复杂抗原与相应抗体之间的结合能力。与抗体结合价、抗体的亲和性、抗原有效表位数目等相关。亲合力(avidity)2、抗原抗体亲和力和亲合力抗体和大多数抗原同属蛋白质。在通常的血清学反应条件下均带有负电荷，使极化的水分子在其周围形成水化层，成为亲水胶体，因此蛋白质不会自行凝集出现沉淀。当抗原与抗体结合后，表面电荷减少，水化层变薄;而且由于抗原抗体复合物形成后，与水接触的表面积减少，由亲水胶体转化为疏水胶体。此时在电解质(如NaCl，的作用下，使各疏水胶体之间进一步靠拢、沉淀，形成可见的抗原抗体复合物。14可见反应(沉淀)抗原抗体复合物(疏水胶体)电解质抗原(亲水胶体)抗体(亲水胶体)+15二、抗原抗体反应的类型16抗原抗体反应的类型反应类型抗原抗体补体沉淀反应可溶无标记无凝集反应颗粒无标记无补体参与反应细胞无标记有中和反应毒素等无标记无免疫标记标记标记无或17反应类型实验技术结果判断沉淀反应液相沉淀试验观察沉淀，检测浊度免疫电泳技术观察扫描沉淀峰、沉淀弧凝集反应直接凝集试验观察凝集现象间接凝集试验观察凝集现象抗球蛋白试验观察凝集现象补体参与反应补体溶血试验观察测定溶血现象补体结合试验观察测定溶血现象抗原抗体反应的类型18反应类型实验技术结果判断中和反应病毒中和试验检测病毒感染性毒素中和试验检测外毒素毒性免疫标记荧光免疫技术检测荧光现象放射免疫技术检测放射性强度酶免疫技术检测酶底物显色发光免疫技术检测发光强度金免疫技术检测金颗粒沉淀抗原抗体反应的类型19三、免疫标记技术的应用20免疫标记技术的应用免疫标记技术是用荧光素、放射性同位素、酶等标记抗体或抗原等所进行的抗原抗体反应。特点：敏感度高特异性强快速容易观察能进行定性、定量、定位检测等211、荧光免疫技术将结合有荧光素的荧光抗体进行抗原抗体反应的技术。常用的荧光素有异硫氰酸荧光素（FITC)和罗丹明（RB200)等。它们可与抗体球蛋白中赖氨酸的氨基结合，在蓝紫光激发下，可分别出现鲜明的黄绿色及玫瑰红色。固相吸附抗原或抗体Ab光或Ag光Ab－Ag光或Ag－Ab光光激发发光22①自身抗体检测抗核抗体(均质型)抗核抗体(核膜型)抗核抗体(斑点型)欧蒙荧光免疫技术的应用23荧光免疫技术的应用②病原体检测呼吸道合胞病毒流感病毒A/B型副流感病毒③免疫病理检测④细胞表面抗原和受体检测⑤特殊应用：流式细胞分析242、放射免疫技术及其应用用放射性同位素标记技术来检测抗原抗体反应的高灵敏度方法。反应特点：灵敏，精确；不稳定；安全性差标记Ag或Ab标记物纯化抗原抗体反应抗原抗体复合物沉淀测定其放射活性现临床实验室应用较少广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域中各种微量蛋白质、激素、小分子药物和肿瘤标志物的定量分析等253、酶免疫技术将待测抗原或抗体吸附于固相表面（聚苯乙烯微量反应板），与酶标记的抗体或抗原反应后，加入底物反应（显色或发光）的分析方法。酶标板吸附抗原或抗体洗涤加入酶标抗体或抗原Ag-Ab酶或Ab-Ag酶加入酶作用底物显色反应26方法（1）直接法（可检测抗原或抗体）：酶标板吸附抗原或抗体洗涤Ag－Ab酶或Ab－Ag酶显色反应Ab酶或Ag酶底物27（2）间接法（有两种抗体参与，一抗做反应桥梁）1Ab2Ab酶酶标板吸附抗原Ag－1Ab洗涤Ag－1Ab－2Ab酶底物显色反应一抗二抗28酶标板吸附抗体AgAb-Ag洗涤Ab酶Ab-Ag-Ab酶底物显色反应（3）夹心法（不同抗体将抗原夹在中间反应）①直接夹心法②间接夹心法酶标板吸附抗体AgAb－Ag1AbAb－Ag－1Ab洗涤2Ab酶Ab－Ag－1Ab－2Ab酶底物显色反应29酶联免疫吸附实验——夹心法30ELISA应用的范围很广，而且正在不断地扩大。临床实验室主要应用于：1、传染病的诊断，病毒如病毒性肝炎（甲肝抗体、乙肝三对、丙肝抗体、丁肝抗体、戊肝抗体）、风疹病毒、疱疹病毒、轮状病毒等；2、细菌如结核杆菌、幽门螺杆菌等；3、也用于一些蛋白质的检测，如各种免疫球蛋白、补体、肿瘤标志物（甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺特异性抗原等）3、酶免疫技术的应用Thanks谢谢聆听