聚乙二醇化重组人干扰素a2b的质量检测

聚乙二醇化重组人干扰素α2b的质量检测作者：张雪梅，郭桥，吴福泉，陈云声，齐影，朱丽娜，周丽红，盛军，刘晶作者单位：长春生物制品研究所,长春,130062刊名：中国生物制品学杂志英文刊名：CHINESEJOURNALOFBIOLOGICALS年，卷(期)：2005，18(1)被引用次数：2次参考文献(4条)1.JenogST.ByunSMDecreasedagglutinabilityofmethoxy-polyethyleneglycolattachedredbloodcells:significanceasabloodsubstitute19962.中国生物制品规程20003.张龙翔生化实验方法和技术19974.McgoffP.BaziotisAC.MaskiewiczRAnalysisofpolyethyleneglycolmodifiedsuperoxidedismutasebychromatographic,lightscattering,chemicalandenzymaticmithods1988(08)相似文献(10条)1.期刊论文邬婧.戎隆富.程婷.许培.宋礼华聚乙二醇化重组人干扰素α-2b体外抗乙肝病毒作用的研究-生物学杂志2010,27(2)研究聚乙二醇化重组人干扰素α-2b(PEG-IFN)和重组人干扰素α-2b(IFN)的体外抗乙型肝炎病毒作用.以HepG2.2.15为细胞模型,采用MTT法考察两种药物对细胞的毒性作用;分别以高、中、低剂量的PEG-IFN和IFN每隔一日反复作用细胞,连续8d,采用ELISA法测定细胞上清液中的HBsAg来考察两种药物对病毒的抑制作用;将相同剂量的PEG-IFN和IFN模拟临床给药频率作用细胞一周,即PEG-IFN给药1次,IFN给药3次,观察细胞HBsAg的分泌情况,评价药效.PEG-IFN和IFN的TC_(50)均20000IU/mL,IC_(50)分别为559.88、478.71IU/mL;反复给药时,高、中、低3个剂量组的PEG-IFN对病毒的抑制作用略低于同剂量的IFN;模拟临床给药一周后发现,PEG-IFN与IFN对病毒的抑制作用无明显差异.PEG-IFN和IFN在体外均可抑制HepG2.2.15细胞乙肝病毒的表达.2.期刊论文姚文兵.杨晓兵.吴梧桐聚乙二醇修饰重组人干扰素α-2b修饰产物的初步分析研究-中国生化药物杂志2003,24(6)目的对聚乙二醇(PEG)修饰重组人干扰素α-2b(rhIFNα-2b)的修饰产物进行了初步分析研究.方法以单甲氧基聚乙二醇甲酸琥珀酰亚胺酯对rhIFNα-2b进行修饰,修饰产物以Superdex75Highload制备型凝胶色谱柱进行分离、纯化,SDS-PAGE鉴定各组分,采用Mariner电喷雾飞行时间质谱对单修饰IFNα-2b(mono-PEG-IFNα-2b)进行分析.结果分别获得了纯化的mono-PEG-IFNα-2b和多修饰IFNα-2b(poly-PEG-IFNα-2b).ESI-TOF质谱也证明mono-PEG-IFNα-2b分子量比rhIFNα-2b多5000左右;紫外光谱分析表明,PEG修饰产物的结构没有发生改变.结论获得了纯化的PEG修饰产物.3.学位论文杨晓兵聚乙二醇修饰重组人干扰素α2b的分离纯化、鉴定及抗肿瘤作用研究2002该文报道了聚乙二醇修饰重组人干扰素α2b的工作,主要包括以下几方面的内容：第一部分：两种修饰剂修饰干扰素作用的比较.合成了聚乙二醇的两种衍生物碳酸单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯（SC-mPEG）和单甲氧基聚乙二醇琥珀酸琥珀酰亚胺酯（SS-mPEG）,并对两种修饰剂对干扰素的修饰作用进行了比较,考察了不同时间、不同pH条件下修饰率的变化,并以抗病毒活性为指标对干扰素α2b、SC-mPEG以及SS-mPEG修饰干扰素α2b的热稳定性、抗胰蛋白酶水解能力和耐酸碱能力进行了测定.第二部分：单修饰聚乙二醇干扰素α2b的制备、分离纯化及鉴定.第三部分：比较重组人干扰素α2b和单修饰聚乙二醇干扰素α2b的抗肿瘤作用.4.期刊论文张雪梅.石晓丽.姚为民.陈云声.赵大鹏.关晓峰.赵虹.盛军.孙金海聚乙二醇-重组人干扰素α2b结合物冻干保护剂的筛选-中国生物制品学杂志2008,21(10)目的筛选聚乙二醇-重组人干扰素α2b(PEG-rhIFNα2b)结合物的冻干保护剂.方法采用两步筛选法,以氨基酸、甘露醇和糖类作为冻干保护剂,与PEG-rhIFNα2b在适宜条件下制备成冻干制剂,分别于40、25和4℃放置不同时间取样,检测其理化性质和生物学稳定性,筛选最佳保护剂配比.结果通过6～12个月的试验,证实该冻干制剂外观、pH无明显改变,但再溶解速度略慢于以人血白蛋白作保护剂的冻干制剂;采用15mmol/L精氨酸+10mmol/L谷氨酸+4%甘露醇+1%蔗糖/海藻糖的冻于保护剂配方,在4℃和25℃放置12个月后,抗病毒活性仍较好,相当于人血白蛋白的冻干保护效果.结论已筛选出不含人血白蛋白的PEG-rhIFNα2b结合物的冻干保护剂.5.期刊论文刘丽军.赵丽纯.朱迅.石晓丽.刘丹.张岩.张雪梅.盛军聚乙二醇活性酯对干扰素α2b化学修饰的初步研究-中国生物制品学杂志2001,14(4)目的探讨聚乙二醇活性酯(mPEG-ssMW5000和MW20000)修饰重组人干扰素α2b(rhIFNα2b)的最佳反应条件.方法在不同反应条件下,用聚乙二醇活性酯修饰rhIFNα2b,采用VSV-Wish细胞病变抑制法测定修饰后rhIFNα2b的生物学活性.结果随着PEG对rhIFNα2b摩尔比的增加或修饰反应时间的延长,rhIFNα2b的修饰产物相对分子质量和不均一性增加,且随着rhIFNα2b,修饰度的提高,其生物学活性逐渐降低.结论初步确立了PEG修饰rhIFNα2b的反应条件,反应摩尔比与聚乙二醇活性酯的相对分子质量是影响反应的关键因素.6.学位论文姚文兵PEG修饰重组人干扰素α2b创新药物研究2003该文建立了一套对自行构建的工程菌表达的rhuIFNα2b非亲和层析的纯化方法,应用该方法,从发酵所得的菌体中纯化得到电泳纯和高效液相纯的rhuIFNα2b,纯化倍数达1210倍,回收率为30﹪,比活力为1.66×10'8IU/mg.选择含有酰基的PEG衍生物,合成了两种不同活性基团的PEG衍生物作为修饰剂,一为单甲氧基聚乙二醇琥珀酸琥珀酸亚胺酯(SS-mPEG),另一种为碳酸单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯(SC-mPEG),并对两种修饰剂的修饰结果进行了比较,发现SC-mPEG比SS-mPEG对α2b干扰素修饰具有更高的选择性,此外,SC-mPEG具有作用平稳,易于通过控制反应条件来控制修饰率,修饰后的干扰素保持较高的活性等特点,最终选择SC-mPEG作为修饰剂.研究了SC-mPEG对rhuIFNα2b的修饰条件,考察了反应时间,pH值对修饰率的影响并确定了最佳反应条件(pH8.5,4℃,反应1小时),测定了修饰干扰素的活性变化.利用制备型高效液相色谱技术对SC-mPEG修饰干扰素α2b反应液进行分离、纯化,获得SC-mPEG修饰的干扰素.由于SC-mPEG对干扰素α2b进行修饰时,最终反应淮中应包括未修饰的干扰素α2b,单修饰干扰素α2b,多修饰干扰素α2b和未与干扰素α2b反应的SC-mPEG等,根据它们之间分子量的差别,利用制备型高效液相色谱技术对上述反应液中的多种成分进行了分离、纯化,获得了纯度较高的mono-mPEG-IFNα2b及poly-mPEG-IFNα2b,并对上述产物采用SDS-PAGE及marinerTOFMS对其进行鉴定,初步证实了其分子量,并对PEG的修饰位点进行了初步研究.选择'125I标记示踪的SDS-PAGE相结合的方法,研究聚乙二醇修饰干扰素α2b的血液动力学,组织分布和排泄.以大氧为研究对象,分别按1,3,5μg/kg的剂量股静脉注射给药,颈动脉采血,利用SDS-PAGE测定血液中原形药物放射量与总放射量的百分比,以校正全血血药浓度,对小鼠测定'125I-干扰素α2b和'125I-单修饰干扰素α2b的组织分布和尿粪排泄.采用MTT法将不同浓度的聚乙二醇修饰干扰素分别对几种肿瘤细胞株进行生长抑制试验,并研究了其对小鼠移植肉瘤S,180的影响.7.期刊论文吴影新.翟艳琴.雷建都.马光辉.苏志国.YingxinWu.YanqinZhai.JianduLei.GuanghuiMa.ZhiguoSu干扰素α-2b的聚乙二醇修饰-生物工程学报2008,24(9)采用分子量为20kD的单甲氧基聚乙二醇丙醛(mPEG-ALD)修饰重组人干扰素α-2b(IFNα-2b),建立了修饰反应及分离纯化工艺.考察了修饰反应各因素对单修饰转化率以及单修饰产物体外活性的影响,获得了优化的修饰反应条件,即在pH6.5,20mmol/L的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液中,干扰素α-2b的浓度为4mg/mE,PEG与IFNα-2b的摩尔比为8:1,4℃时反应20h;在优化的反应条件下,单修饰PEG-IFNα-2b的转化率达到55%.并且,采用离子交换层析对修饰产物进行分离纯化,单修饰产品纯度达到97%,体外活性保留达到未修饰干扰素α-2b的13.4%,其在SD大鼠体内的循环半袁期得到了较大的延长,且具有较好的水溶液稳定性.8.学位论文江荣高重组人干扰素α-2b干粉吸入剂的设计与评价2005重组人干扰素α-2b(IFNα-2b)作为一种内源性细胞因子，具有抗病毒、抑制增殖和免疫调节等多种作用。本文对IFNα-2b粉雾剂做了比较全面和深入的研究，以寻求一种发挥全身疗效的非注射给药途径。研究重点主要集中于该蛋白质的稳定性、粉雾剂的分散性和IFNα-2b在人体内的药物动力学及药效学，具体内容可分为以下5个部分：1、家兔气管内滴入考察干扰素在肺部吸收情况：干扰素经静脉注射、皮下注射以及气管内滴入三种途径给药，并且考察了气管内滴入时牛胆酸钠和柠檬酸等吸收促进剂对肺部吸收的影响。结果表明，在没有吸收促进剂的情况下干扰素从肺部吸收很少，与皮下注射相比其相对生物利用度远低于1％。柠檬酸和牛胆酸钠作为吸收促进剂将血清内干扰素浓度提高了30～50倍。尽管干扰素经肺部吸收的生物利用度很低，但是试验结果表明，干扰素经非注射给药途径吸收入血是可行的。2、考察了干扰素在旋转蒸发干燥和喷雾干燥过程中的稳定性：(1)用旋转减压蒸发方法考察了缓冲体系、pH值、温度和添加剂对干扰素活性的影响。以柠檬酸—磷酸氢二钠为缓冲体系、调节pH值到7.0左右利于干扰素的稳定性。考察了多种添加剂的稳定作用，结果表明卡波谱934、羟丙基甲基纤维素(HPMC，20000cp)、赖氨酸、蛋氨酸、聚乙烯吡咯烷酮(K30)、硫酸镁、卵磷脂、聚乙二醇-6000、吐温-20/80、2-羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)、聚乙烯醇、十二烷基硫酸钠(SDS)等添加剂对干扰素在旋转减压蒸发过程中的稳定性均有较好的保护作用。(2)喷雾干燥过程中，雾化气体流量越小以及进口温度越低则干扰素的活性越是能够得到保护。HP-β-CD、SDS、赖氨酸、HPMC(20000cp)、卵磷脂和吐温80/20都能够将喷雾干燥过程中干扰素的活性保持在90％以上。(3)加入各种活性保护剂后，喷雾干燥粉末多为内部中空的、规则的球体，堆密度在0.2到0.7g/cm'3之间。但是各个处方所得颗粒表面的光滑程度不尽相同，以HPMC为保护剂制得的产品颗粒形状极不规则，表面有许多皱褶和深度凹坑。(4)鉴于喷雾干燥粉末具有很强的吸湿性，筛选了一些抑湿剂。其中甘露醇、亮氨酸和氨基乙酸具有较好的抑制喷雾干燥粉末吸收水分的作用。(5)对干扰素粉雾剂的体外沉积性能进行了初步研究，结果表明沉积率较低，小于(9％)。胶囊的囊壳材料对沉积具有较大的影响，HPMC胶囊壳能够减少药物在胶囊壳内的残留，比明胶囊壳更适合用作粉雾剂储库。3、采取了多种方法来提高粉雾剂的沉积性能(1)利用喷雾冷冻干燥法制备了密度