大学生科技创新论文

大学生科技创新论文题目福美双对肉鸡肝脏和肾脏的SOD活性及MDA含量的影响姓名郭会田班级01级01班专业动物医学指导教师李家奎职称副教授中国·武汉二○○五年五月1福美双对肉鸡肝脏和肾脏的SOD活性及MDA含量的影响摘要120羽一日龄健康Avian商品代肉仔鸡，从7日龄起，随机均分为三组，每组40只：试验A组（基础日粮加50mg/kg的福美双）、试验B组（基础日粮加100mg/kg的福美双）、对照C组（基础日粮）。本试验主要研究胫骨软骨发育不良（TibialDyschondroplasia,TD）的发生特征、胫骨软骨发育不良与福美双之间的关系、福美双对患鸡肝和肾脏中超氧化物歧化酶（SuperoxideDismutase，SOD）活性及丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量的影响。结果显示:(1)福美双可增加胫骨软骨发育不良的发病率及病变程度；(2)26日龄时肝脏和肾SOD活性试验组与对照组差异显著(Ｐ0.05)，MDA含量试验组和对照组相比有升高趋势但差异不显著(Ｐ0.05)；（3）病鸡胫骨近端的纵切面有玉白色楔状软骨团块深入干骺端甚至骨髓腔，此软骨团块由大量的过渡型软骨细胞构成，血管稀少，骨小梁排列紊乱、扭曲，有时骨骺线参差不齐。本试验结果表明，福美双可以诱发胫骨软骨发育不良，饲料中添加福美双对肉鸡肝和肾脏的SOD活性及MDA含量有一定的影响。关键词肉鸡;胫骨软骨发育不良;福美双;超氧化物歧化酶;丙二醛TheeffectofThiramontheactivityofSODandthelevelofMDAofthebroilerchicks’liverandkidneyAbstractOnehundredandtwentyAvianchicks,aged1dwerepre-feedto7-dayold,andthendividedrandomlyintothreegroupsequally:groupA(basalfeedwith50ppmthiram),groupB(basalfeedwith100ppmthiram),andgroupC(basalfeedwithoutthiram).WestudythecharactersofthedevelopmentofTD,therelationshipbetweenTDandthiram,andtheeffectofthiramonthelevelofsuperoxidedismutase（SOD）andmalondialdehyde（MDA）ofthebroilerchicks’liverandkidney.Theresultsareasfollows:(1)thethiramcouldmaketheratioofTDrise;(2)thelevelofSODoftheliverandkidneyofthechicksunderthetreatmentAandBaredifferentformtreatmentC,whenthechicksare26-dayold.ButthelevelsofMDAarenotdifferentsignificantly;(3)thereisapieceofcartilageinthelongitudinalsectionoftheproximalendoftheTDchick’stibia,thecartilageisjade-whiteandwedgeshapeembedinthemetaphysesandeveninthemadullarycavityofbones.Thecartilageisavascular,composedbytrans-typecells,therangeoftrabecularboneisdisorganizedanddistortion,sometimestheepiphysislineisirregular.ItsuggeststhatfeedswiththiramcancouldincreasetheratioofTDinbroilersandhaveeffectonthelevelofSODandMDAofliverandkidneytosomeextent.KeywordsBroilerchicks;TibialDyschondroplasia;Thiram;SOD;MDA绪言2胫骨软骨发育不良（TibialDyschondroplasia,TD）是一种广泛存在于肉鸡、火鸡中的因遗传因素与代谢环境相互影响而发生的疾病（Leach等，1965），是肉鸡最常见的腿病之一，以软骨内骨化受阻和胫骨干骺端的软骨细胞增生形成无血管的玉白色的“软骨楔”为特征。其临床症状是：鸡胫骨关节肿大，行走困难，随着症状严重程度增加，鸡常卧于笼内，活动量下降，严重者不能站立行走。病理组织学的研究结果显示，生长快的肉鸡TD发病率高的机制是胫骨软骨增殖区非成熟的软骨细胞极度增生形成软骨栓。软骨栓内没有血管生成，不能及时供给软骨细胞发育成熟钙化所需的营养，从而进一步加剧了软骨栓的形成，最终导致胫骨软骨症（罗兰等，1994）。TD的临床发病率视条件为1%～40%，亚临床病变为26%～60%（Barry,1994）。病鸡由于胫骨受到侵害，行走困难，导致其生产性能下降，肉的品质降低，对肉鸡生产及肉产品加工均有重要的影响。国外学者已对TD给予了特别关注，国内近年来亦有少量报道（罗兰等，1994；朱连德等，1996；罗江培等，1998）。引起家禽TD原因通常认为与生长速度（Riddle,1975），遗传选育（Zhang等，1996），日粮调配及非营养因素等四大类有关。生长速度过快是TD发生的直接原因。SOD是机体超氧自由基的清除剂，而氧自由基是由于氧代谢过程接收电子不足而形成的，对机体有毒性，与衰老、肿瘤、炎症、损伤、辐射、肾脏病、消化系统疾病和药物作用等有着密切联系，对疾病的病因学探讨有着重要意义。SOD活力的高低间接反应了机体清除氧自由基的能力。机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物，如MDA和新的氧自由基。脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成活性化学剂，即非自由基性的脂类分解产物，而且通过链式或链式支链反应，放大活性氧的作用。氧自由基不但通过生物膜中的多不饱和脂肪酸的的过氧化引起细胞损伤，而且还能通过脂质过氧化物的分解产物引起细胞损伤。因而测试MDA的含量常常可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤的程度。福美双作为一种植物杀菌剂，是一种有效的胫骨软骨发育不良诱发剂，能为研究胫骨软骨发育不良提供很好的病理模型，但福美双诱发肉鸡胫骨软骨发育不良的机理仍不清楚。鉴于此，本试验根据国外相关文献制造病理模型诱发TD，通过观察福美双对肉鸡肝肾SOD活力及MDA含量的影响的研究，探讨福美双诱发肉鸡胫骨软骨发育不良的机理，为该病的防治提供理论依据。１材料与方法１．1材料１．1．1试验动物及其饲养管理本试验采用120羽1日龄Avian商品代肉仔鸡，雌雄混和，散养。预饲一周，7日龄时随机均分成三组：试验A组（50mg/kg福美双剂量组），试验B组（100mg/kg福美双剂量组）和对照C组（空白对照组）。每组40只鸡。1～21日龄饲喂正大牌510肉用仔鸡前期配合饲料，22~26日龄以后喂给正大牌511肉用仔鸡中期配合饲料（武汉正大有限公司提供）。按常规控制温度、湿度，自由采食和饮水。试验期内人工供光（红外线灯）：1~11日龄每天24h光照，从12日龄时开始每天晚上八点半开始到九点半禁饲1h。每天观察记录试验鸡腿部生长发育情况，以及其他异常现象（发病和死亡）。并记录每天的温度和干湿度。试验至26日龄时，宰杀部分鸡，颈动脉放血，每组有5只被开膛取出肝脏和肾脏；取右腿胫骨及以下部分，用手术刀从中部剖开，观察其软骨组织形态。饲养所用饲料的配方如表1-1所示。表１-１Avian肉鸡全价颗粒饲料组成3原料（mg/Kg）0-21d21d后玉米56.561豆粕37.232磷酸氢钙2.11.9石粉0.950.9食盐0.30.3蛋氨酸0.130.13多维0.020.02豆油2.53.2微量0.20.215%金霉素0.080.0750%氯化胆碱0.10.08代谢能2.9923.09营养水平(%)粗蛋白2119.07有效磷0.4770.442钙0.9620.884蛋+胱氨酸0.7690.724赖氨酸1.1991.07注：每公斤饲料含：VA5512IU，VD32200IU，VE64mg,VK31.5mg,VB14mg,VBB25mg,VB1250μg,叶酸0.6mg,烟酸20mg,泛酸15mg,Cu12mg,Fe80mg,Mn120mg,Zn100mg,Se0.25mg,I0.5mg。1．1．2主要仪器设备756型紫外可见分光光度计：上海光谱仪器有限公司生产TGL-5-A型低速台式大容量离心机：上海安亭科学仪器厂生产WH-2型微型旋涡混合仪：上海沪西分析仪器厂生产电热恒温水浴箱：上海医疗器械七厂生产AE240s型电子分析天平：上海酶特勒-托利多仪器有限公司生产1．1．3试剂超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒，批号20050407，南京建成生物工程研究所生产。丙二醛（MDA）测定试剂盒，批号20050423，南京建成生物工程研究所生产。1．1．4药物福美双：河南省濮阳市蔚林化工有限公司惠赠，批号:04122901英文名称：Thiram纯度：92.1%分子式：C6H12N2S4物化性质：纯品为白色结晶，相对密度1.29，难溶于水，微溶于有机溶剂。在酸中较稳定，在有还原剂的酸性溶液中分解，工业品为白色或淡黄色粉末。应用：福美双是一种广谱，低毒，保护性有机硫杀菌剂，也可用作橡胶硫化促进剂。1．2方法41．2．1分组及处理预饲一周，至7日龄时，将所有鸡称重，按质量梯度分成四组，然后将四组鸡，随机均分到三个不同的鸡舍：试验A组（50mg/kg福美双剂量组），试验B组（100mg/kg福美双剂量组）和C组（空白对照组）。称量相应质量的福美双，将颗粒饲料磨碎，用逐级稀释法将福美双与饲料混匀，然后进行饲喂。1．2．2样品的采集和制备试验至26日龄时，宰杀部分鸡，颈动脉放血，每组有5只被开膛取出肝脏和肾脏（1~2g）。在冰的生理盐水中漂洗，除去组织上的血液，滤纸拭干，再用电子分析天平准确称取0.5g，用移液管量取4.5mL0.86%的冷生理盐水，用手工匀浆法制作组织匀浆：将组织块放在玻璃匀浆管口，用眼科小剪尽量剪碎组织块，再用加液枪吸取3mL冷的生理盐水，尽量将组织冲到玻璃匀浆管底部，然后进行匀浆。左手持匀浆管将下端放在冰袋上，右手将捣杵垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6~8min），充分研碎，使组织匀浆化，然后用1.5mL冷生理盐水冲洗捣杵，将制备好的10%组织匀浆转移至离心管，用TGL-5-A型低速台式大容量离心机3000r/min离心10min，取其上清，4℃冰箱保存备用。1．2．3试验指标的检测1．2．3．1发病率的统计及病变程度的观察试验进行至37日龄时每组宰杀30只鸡，颈动脉放血，然后取其右腿胫骨及其以下部分，用手术刀从中部剖开，观察其软骨组织形态，并做相关记录和统计。1．2．3．2超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定本试验采用羟胺法测定SOD活性。取组织匀浆样品按表1-2进行操作，然后用旋涡混合仪充分混匀，10min后取反应液用756型紫外可见分光光度计在550nm处测定其吸光度。按下面的公式计算组织中的SOD活性。酶活性单位的定义为：每mL反应液中SOD抑制率为50%时所对应的SOD量为一个亚硝酸盐单位（NU），其单位以NU/mL表示。SOD活性（NU/mL）=÷50%×对照管吸光度—测定管吸光度对照管吸光度反应液总体积（mL）取样量（mL）÷组织中蛋白含量(mgprot/mL)(1-1)表1-2SOD活性测定步骤mL试剂测定管对照管试剂一1.01.0样品0.04蒸馏水