GPC-操作手册

GPC操作說明什麼是GPC?GPC（GelPermeationChromatography）凝膠滲透層析儀/色譜分析儀•GPC主要是用以測量高分子的分子量分佈。•將樣品進行GPC測試，可以知道單體是否已經產生聚合的反應。TABLEA.儀器原理介紹B.樣品的準備C.實驗操作介面介紹D.數據讀取及轉檔A.GPC儀器構造Recycle一般來說，GPC是不關機的（即系統隨時處於待機狀態）而我們會把系統設定在Recycle的狀態，所以當我們要進行實驗前，會先把Recycle取消，避免新鮮的THF被污染而影響數據A.GPC儀器構造-1層析管柱內為矽膠材質，當溶液進入管柱時，小分子會進到矽膠內的氣孔迴路中，而使得小分子在管柱中逗留時間較長，所以也較晚被偵測出來。A.GPC儀器構造-2當分子通過層析管柱後，會進入偵測器，偵測的方式是利用光折射原理。當一光源進入兩個不同的介質(THF、sample)後，即產生一偏折角度，而不同的偏折角度計算出的電壓值也會不同。B.樣品準備烘烤溶解過濾B.樣品準備-1烘烤1.首先倒取適量的Gel於離型膜上，注意離型膜更兩面我們是倒在離型面（較滑的那一面）。2.將離型膜上的Gel平均攤開後即可進烘箱，烘烤條件為110℃2hr（若樣品為固含量100%則可省略步驟1、2）Ps1.以上動作是為了趕走Gel中的溶劑，以避免溶劑在實驗結果中所產生的干擾。Ps2.烘烤時，注意溫度不可超過120℃；烘烤時間不宜超過4hrB.樣品準備-2溶解3.取下已烘烤完的Gel15~20mg於玻璃瓶中4.加THF至9000±500mg與之進行溶解5.待靜置12hr後Gel即已溶解完全，即可進行過濾B.樣品準備-2過濾6.先用THF將玻璃注射管沖洗乾淨7.將過濾頭接上玻璃注射管8.將溶液倒入注射管中.9.合上注射器開始進行過濾Ps1.以上動作不可使用塑膠類器具進行（如塑膠滴管、塑膠注射器、塑膠瓶），因為塑膠在射出成型後管壁上可能會更若干的物質殘留Ps2.在承接過濾液時須注意，一般我們建議取中段的溶液較佳B.樣品準備-3過濾10.當過濾液達樣品瓶至8分滿時即可蓋上瓶蓋，即完成樣品的準備。11.過濾完成後需用THF將玻璃注射器清洗乾淨C.GPC操作介面平衡實驗PurgeABCC.GPC操作介面-A11.進入GPC的系統軟體“Empower”C.GPC操作介面-A22.在UserName的欄位內輸入”waters”而Password的欄位內留白即可C.GPC操作介面-A33.在接下來的子畫面中點選”RunSamples”C.GPC操作介面-A44.點選個人資料夾。C.GPC操作介面-A55.進入實驗相關設定的主畫面。6.點選“Samples”頁面。C.GPC操作介面-A67.待機狀態時流速設定為0.1mL/min，在跑平衡或實驗時MethodSet的設定中會定流速為1mL/min，為維持Pump的壽命，在執行實驗前我們會先訂定流速的加速方式。首先要點選流速變更標示(如圖示)。C.GPC操作介面-A78.進到流速變更的子畫面後，先將流速改成1.00。9.在Ramping的項目內，設定加速方式為以2min加速到1mL/min，以避免極速的變更流速對Pump造成傷害。1234C.GPC操作介面-A810.進行Project的相關設定。11.在實驗執行前要先進行跑平衡的動作，跑平衡的動作在“Recycle”的狀態下執行。Function:EquilibrateMethodSet:GPCsensitivity8RunTime:60.00C.GPC操作介面-A912.在執行Project前要先看流速是否已經昇到1mL/min後才能按執行。C.GPC操作介面-A1013.在該對話框內輸入“Nameforthissampleset”14.按Run開始執行平衡C.GPC操作介面-A1115.當該Project開始執行時我們會發現正在執行的Item會以紅色字體呈現可以觀察目前project共需消耗多少THF出現紅色的曲線藉以觀察目前基線的狀態C.GPC操作介面-A1216.跑平衡時我們是設定60min為一個section以方便我們觀察基線的狀態；當基線呈現接近直線的狀態時，即平衡完成。Ps.基線之所以不會呈水平直線狀態是因為系統迴路中更空氣進入的關係。C.GPC操作介面-A1317.基線是否平直其要求為基線的電壓值維持在±0.5之間18.欲變更電壓值的刻度首先須在圖內點滑鼠右鍵19.點選“Properties”C.GPC操作介面-A1420.點選“Scaling”的頁面21.輸入欲變更的數值後，按”套用”，再按”確定”即可。1243C.GPC操作介面-A1522.當達平衡完成時，我們就可以終止跑平衡的project，先按紅色燈。1C.GPC操作介面-A1623.在出現的視窗按”OK”後綠燈會亮起，然後才能關掉主畫面。Ps.終止平衡時如果沒更先按Abort而直接關閉視窗的話，系統會一直處於執行狀態，進而造成系統錯亂。23C.GPC操作介面-B11.點選”RunSamples”開始進行實驗。C.GPC操作介面-B22.設定相關資料。3.解除Detector的”Recycle”後，才能按綠燈開始執行。1.每次實驗後皆需執行針頭的清洗2.Detector的清洗可視需求設定及終止C.GPC操作介面-B34.輸入“Nameforthissampleset”後，按“Run”系統即開始實驗的進行。Ps.當實驗進入執行狀態時，Detector同時也會出現lock的標示。21C.GPC操作介面-B45.若實驗已進入執行階段而欲進行插單動作，先在表格上按滑鼠右鍵，然後點選“AlterRunningSamples”。Ps.若欲進行插單動作須先觀察執行中的Item已經執行多少時間，插單只更在實驗時間10~55min內可執行，不然可能會傷害到針頭C.GPC操作介面-B56.在以下對話框按”確定”後，我們可以發現綠燈亮起。C.GPC操作介面-B67.按滑鼠右鍵，點選“InsertRow”。C.GPC操作介面-B78.輸入相關資料後，按綠燈執行。12C.GPC操作介面-B89.按“Run”後，主視窗的顯示燈會只剩紅燈亮著即表示完成插單動作。D.數據讀取及轉檔-11.欲讀取data，首先點選“ReviewData”，找到當初的Project按OK。D.數據讀取及轉檔-22.進入主畫面後，點選“Channels”頁面。D.數據讀取及轉檔-33.點選欲查詢的Item後按滑鼠右鍵，點選“Review”D.數據讀取及轉檔-44.進入主畫面後，若欲觀察兩筆資料疊圖的結果需先執行”工具列Plot\Overlay”D.數據讀取及轉檔-55.疊圖的結果。D.數據讀取及轉檔-66.在進行積分前先需點選“工具列File\Open\ProcessingMethod“D.數據讀取及轉檔-77.依實驗結果選擇適當的Method。Ps.42min以後出現的peak我們認定為solvent的影響，不列入Peak的計算1Peak時需注意，當Peak出現在30~40min請選擇“1Peaksmallpeak”2Peak的分佈是指其中一個Peak出現在20~30min另一個Peak出現在30~40minD.數據讀取及轉檔-88.按”確認”。D.數據讀取及轉檔-99.積分前先將積分範圍用滑鼠拖曳的方式標註出來。D.數據讀取及轉檔-1010.按”工具列\Process\Quantitate”。D.數據讀取及轉檔-1111.積分完後會出現計算值，點選“File\Save\Result“儲存結果。D.數據讀取及轉檔-1212.回到Project的主畫面，點選“Results”頁面。D.數據讀取及轉檔-1313.找到剛才的Item按滑鼠右鍵，點選“Preview/Publisher”。D.數據讀取及轉檔-1414.依圖示點選ReportMethod後，按“OK”。21D.數據讀取及轉檔-1515.報告出爐。D.數據讀取及轉檔-1616.如欲變更圖示的座標需先回到上一個視窗，在圖示上按滑鼠右鍵，點選“ChromatogramProperties”。D.數據讀取及轉檔-1717.點選Scaling頁面後，變更座標刻度。18.按”套用”，按“確定”2134D.數據讀取及轉檔-1819.點選“工具列File\SaveReport“D.數據讀取及轉檔-1920.儲存至需求路徑即可。D.數據讀取及轉檔-2021.如報告內容要更疊圖的效果則在點選若干Item後，按滑鼠右鍵，點選“Preview/Publisher”D.數據讀取及轉檔-2122.依圖示點選後，按“OK”D.數據讀取及轉檔-2223.疊圖結果。END