彝药制剂分析实验

1彝药制剂分析实验药学教研室2016.7.2实验一中药制剂的理化定性鉴别一、实验目的通过对几种中成药的理化定性鉴别，掌握中药制剂理化定性鉴别方法和原理。二、提要利用中药制剂中某些化学成分特有的颜色反应进行鉴别。三、实验用品（1）器材：研钵、烧杯、漏斗、试管、量瓶、恒温水浴、电炉、紫外分光光度计（2）样品：牛黄解毒片、复方丹参片（均为市售品）（3）试剂均为AR级四、试验步骤1．牛黄解毒片的理化鉴别：主要成分：人工牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、桔梗、冰片、甘草。理化鉴别：取本品6片（包衣者除去包衣），研细，加乙醇10ml，温热10分钟，滤过，滤液作如下反应：①取滤液5ml，加镁粉少量与盐酸0.5ml，加热，即显红色。②另取滤液4ml，加氢氧化钠试液，即显红色，再加30%过氧化氢溶液，加热，红色不消失，加酸呈酸性，则红色变为黄色。2．复方丹参片的紫外鉴别：取复方丹参片1片，研细，分次加少量水搅拌，滤过，滤液移至100ml量瓶中，并加水至刻度，取溶液2ml，加水至25ml，用紫外分光光度计，在200~400nm范围内扫描，以水作空白，供试液在283±1nm波长处应有最大吸收。五、思考题1.牛黄解毒片中大黄、黄芩一般理化鉴别中分别鉴别哪类成分？其变色机理是什么？3实验二牛黄解毒片的TLC鉴别一、实验目的1.掌握薄层荧光法的原理与操作。2.掌握薄层色谱法在中药制剂鉴别中的应用。二、提要利用标准品、对照药材作为对照进行TLC检识，以鉴别中成药的真伪。三、实验用品（1）器材：研钵、烧杯、漏斗、试管、量瓶、回流装置、恒温水浴、电炉、紫外灯（365nm）、烘箱（2）对照品：猪去氧胆酸、胆酸。（3）样品：牛黄解毒片（4）试剂均为AR级四、试验步骤：①薄层板制备：取CMC-Na上清液30ml，置乳钵中，取10g硅胶G，分次加入乳钵中，充分研磨均匀后，分别加到2块备用玻璃板上，轻轻振动玻板，使调好的悬浊液充分涂布整块玻板上，而获得均匀的薄层板，晾干。再在110℃活化1h，贮于干燥器中备用。②供试品溶液制备：取本品2片，研细，加氯仿10ml研磨，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5ml溶解，作为供试品溶液。③对照品溶液制备：取胆酸、猪去氧胆酸对照品，分别加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，即得对照液。④点样与展开：在距薄层板底边1~1.5cm处，用铅笔轻轻划一起始线。用毛细管分别在同一薄层板上点上述三种溶液，样斑直径不超过2~3mm。将点样后的薄层板置于盛有展开剂[正己烷-乙酸乙酯-醋酸-甲醇（20：25：2：3）的上层溶液]的容器中饱和15min后，再将点有样品的一端浸入展开剂约0.3~0.5cm，展开，待展开剂移行15cm左右取出玻板，立即划出溶剂前沿，晾干，喷以10%4硫酸乙醇溶液，在105℃烘约10分钟，置紫外灯（365nm）下检视，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的两个荧光斑点。五、思考题1.理化鉴别反应与TLC鉴别各有什么特点？2.TLC鉴别方法中鉴别用的对照物有哪些？5实验三玄明粉中重金属的检查一、实验目的通过对中药或中药制剂中重金属的检查，以掌握重金属的检查原理及操作方法。二、提要目视比色法是以肉眼直接观察比较样品溶液与标准品溶液的颜色深浅，判断样品所含杂质是否超出规定限度。重金属系指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用而显色的金属杂质，常以Pb2+为代表，其原理为：在酸性溶液中：SHCONHCHpHOHCSNHCH2232235.3HPbSHSHPb2)(22黑色在碱性溶液中：NaPbSHSNaPb222（黑色）三、实验用品（1）恒温水浴（2）25ml纳氏比色管及比色架（3）万分之一分析天平（4）量瓶、刻度吸管、烧杯、量筒等（5）样品：玄明粉（6）其他试剂均为AR级四、实验步骤取25ml纳氏比色管2支，甲管中加标准铅溶液2ml与醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml后，加水使成25ml。乙管取玄明粉1.0g，加醋酸盐缓冲液2ml与适量水溶解成25ml。在甲乙两管中分别加入硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。6附注1.标准铅溶液制备精密称取在105℃干燥至恒重的硝酸铅0.1598g置1000ml量瓶中，加硝酸5ml，水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为储备液。临用前，精密量取储备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于10μg的Pb）五、思考题1.玄明粉的重金属限量是多少？2.中国药典规定重金属检查有几种方法？各适用于哪些药品？7实验四玄明粉中砷盐的检查一、实验目的通过对中药或中药制剂中砷盐的检查，以掌握砷盐的检查原理及操作方法。二、提要古蔡法检查砷盐原理：3++2+33-+2+3233-+2+4233233323323As+3Zn+3H3Zn+AsHAsO+3Zn+9H3Zn+3HO+AsHAsO+4Zn+11H4Zn+4HO+AsHAsH+3HgBr3HBr+As(HgBr)()2As(HgBr)+AsH3AsH(HgBr)()As(HgBr)+AsH3HBr+AsHg()黄色棕色棕黑色因为3-4AsO在酸性溶液中被Zn还原速度很慢，为提高反应速度，常在反应液中加入KI及酸性SnCl2将3-4AsO还原为3-3AsO：3--+3-43223-2++3-4+432AsO+2I+2HAsO+I+HOAsO+Sn+2HAsO+Sn+HO反应生成的I2又能与Sn2+反应：2+-4+2I+Sn2I+Sn而I-可与Zn2+起络合反应：-2+244I+Zn[ZnI]从而使生成的AsH3的反应不断进行。三、实验用品（1）恒温水浴（2）25ml纳氏比色管及比色架（3）古蔡法测砷装置（4）万分之一分析天平（5）量瓶、刻度吸管、烧杯、量筒等8（6）样品：玄明粉（7）其他试剂均为AR级四、实验步骤1.安装古蔡法测砷装置：测试前，先于导气管C中装入醋酸铅棉花60mg（装管高度为60~80mm）；再于旋塞D的顶端平面上放一片溴化汞试纸（试纸大小以能覆盖孔径而不露出平面为宜），盖上旋塞E，即可。2.标准砷斑的制备：精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温下放置10分钟，加锌粒2g，立即将瓶塞塞上（瓶塞上装有醋酸铅棉花），将瓶置25~40℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，即得。3.供试品的砷盐检查：取玄明粉0.1g，加水23ml溶解后，再加盐酸5ml，照标准砷斑的制备，自“再加碘化钾试液5ml......”,依法操作。将生成的砷斑与标准砷斑比较，颜色不得更深。附注1.标准砷溶液制备精密称取在105℃干燥至恒重的三氧化二砷0.132g，置1000ml量瓶中，加氢氧化钠液（1→5）5ml溶解后，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为储备液。临用前，紧密量取10ml储备液置1000ml量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于1μg的As）。2.醋酸铅棉花制备取脱脂棉1g，浸入醋酸铅试液与水的等容混合液12ml中，湿透后，挤压除去过多的溶液，使之疏松，在100℃以下干燥后，储于玻璃瓶中备用。3.古蔡法测砷装置9五、思考题1.砷盐检查中应注意哪些问题？2.比较古蔡法与Ag-DDC法的异同？10实验五酸性染料比色法测定半夏露中麻黄碱的含量一、实验目的1.学习和掌握酸性染料比色法的基本原理及操作方法。2.了解糖浆剂中麻黄碱的测定方法。二、提要半夏露是由生半夏、桔梗、麻黄、远志等制成的中药复方制剂。其中麻黄含主要成分麻黄碱。该实验利用生物碱（B）在一定pH介质中与H+结合成盐（BH+），在此条件下，一些酸性染料（HIn）解离为阴离子（In-），而与上述盐的阳离子定量结合成有色络合物（BH+·In-）。此络合物可定量地溶于某些有机溶剂。测定有机相的吸收度，即可按比色法算出样品中生物碱的量。三、实验用品（1）分液漏斗、移液管、刻度吸管、烧杯、量杯（2）分光光度计（3）盐酸麻黄碱对照品溶液（0.1mg/ml）；溴麝香草酚蓝染料（0.001mol/L）；混合磷酸盐缓冲液（pH6.8）。（4）样品：半夏露（市售品）（5）氯仿等其他试剂均为AR级四、实验步骤1.标准曲线精密吸取盐酸麻黄碱对照品液0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml分别置于分液漏斗中，加入缓冲液10ml，再精密加入氯仿10.0ml和溴麝香草酚蓝染料1.0ml，振摇使分层。放出氯仿层与比色池中，在420nm处测其吸收度A，以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标作标准曲线。2.样品液的制备精密吸取样品液0.5ml置分液漏斗中，按标准曲线项下的方法，从加入缓冲液10ml起，依法测其吸收度A。从标准曲线上读出样品在吸收度为A值时的盐酸麻黄碱的浓度，11计算出麻黄碱的百分含量。mgmlml100%ml标准曲线上读出的浓度（/）10S%=样品量（）五、思考题1.本实验在操作中应注意哪些问题？2.酸性染料比色法适合哪些药品的检测12实验六柱色谱-紫外分光光度法测定左金丸中盐酸小檗碱的含量一、实验目的通过对左金丸中黄连有效成分盐酸小檗碱的含量测定，掌握柱层析-紫外分光光度法测定中成药含量的原理及操作方法。二、提要利用柱色谱把左金丸中黄连的有效成分盐酸小檗碱分离出来，盐酸小檗碱在345±1nm处有最大吸收，通过测定此波长下柱色谱的洗脱液的吸收度，从而求出样品中盐酸小檗碱的含量。三、实验用品（1）分析天平。（2）恒温水浴锅。（3）容量瓶、三角瓶、量筒、烧杯、量杯、索氏提取器、色谱柱。（4）中性氧化铝（层析用）。（5）分光光度计。（4）样品：左金丸（市售品）。（5）其他试剂均为AR级四、实验步骤提取左金丸研成粉末（通过三号筛），取约1g，精密称定，置索氏提取器中，加盐酸-甲醇（1：100）适量，回流提取至提取液无色。将提取液（必要时浓缩）移至50ml量瓶中，用盐酸-甲醇（1：100）稀释至刻度，摇匀。分离精密吸取5ml上述提取液，置于已处理好的氧化铝柱（内径约0.9cm，中性氧化铝5g，湿法装柱，并先用乙醇约30ml预洗）上，用乙醇25ml分次洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取2ml，置50ml量瓶中，加硫13酸液（0.5mol/L）稀释至刻度，摇匀。测定照分光光度法，在345±1nm波长处测定样品液的吸收度，以乙醇2ml及硫酸液（0.5mol/L）稀释至50ml的混合溶液为空白，比色池厚度为1cm。计算按盐酸小檗碱（C20H18ClNO4）的吸收系数（E1cm1%）为728计算即得。要求本品按干燥品计算，含总生物碱以盐酸小檗碱计，不得少于6.0%50.0050.0050.00%100%10052.00样A含量=728W五、思考题1.本实验在操作中应注意哪些问题？14实验七HPLC法测定五味子中五味子醇甲的含量一、实验目的1.了解液相色谱法测定的一般原理。2.熟悉气相色谱法的一般定量方法及操作。二、提要本实验以五味子醇甲作为对照品，采用高效液相色谱法测定了药材中五味子醇甲的含量，药典规定五味子醇甲的含量不得少于0.4%。三、实验用品（1）高效液相色谱仪、紫外检测器、微量进样器、超声仪（2）对照品：五味子醇甲（3）样品：五味子粉末（过三号筛）（4）试剂：甲醇（AR级）四、色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水（13：7）为流动相；检测波长为250nm，理论板数按五味子醇甲计算应不低于2000。五、实验步骤1.对照品溶液的制备取五味子醇甲对照品15mg，精密称定，置50ml量瓶中，用甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含五味子醇甲0.3mg）。2.样品液制备取本品粉末（过三号筛）约0.25g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇约18ml，超声处理（功率250W，频率20kHz）20分钟，取出，加甲醇至刻度，摇匀