一般血液学检验

1第二章一般血液学检验TheGeneralExaminationOfHematology2•1.Themethodofdeterminationandclinicalsignificanceofredbloodcell,whitebloodcellandhemoglobin.•2.Redbloodcellandwhitebloodcellmorphologyevaluationandclinicalsignificance.•3.Diagnosisandclassificationofanemia.•4.Bloodcelldifferentialcountanditsclinicalsignificance.•5.Qualitycontrolandestimateofredbloodcellexaminationandwhitebloodcellexamination.KEYPOINTS3主要内容第一节外周血液血细胞形态学检验第二节红细胞检验第三节白细胞检验4第一节外周血液血细胞形态学检验一、血细胞涂片的制作和染色1、血涂片的制作手工涂片法自动涂片法52、血涂片的染色主要成分：碱性美兰与酸性伊红血细胞是由蛋白质组成的，带有氨基端和羧基端。各种血细胞的化学性质不同，对染料的亲和力也不同。物理吸附、化学亲和与电荷作用的共同结果。如血红蛋白是碱性蛋白，就和酸性伊红结合；细胞核蛋白是酸性蛋白，就和碱性美兰结合；还有一种颗粒两种染料都结合，为中性颗粒。瑞氏染色6显微镜检查法计算机图象分析二、红细胞形态检查方法7形态:表面积/体积比值大；增加气体透过面积；作为呼吸载体,结合、运输氧和CO2。1、正常红细胞形态8大小异常染色异常形态异常结构异常2、异常红细胞形态9大小异常小红细胞大红细胞还包括巨红细胞和红细胞大小不等。1011染色异常低色素性：中央淡染区扩大，甚至中间不着色。高色素性：红细胞内生理性中央浅染区缩小甚至消失，整个红细胞均染成红色，系红细胞内血红蛋白含量增高所致。嗜多色性：红细胞呈灰蓝色或灰红色，胞体较大，属于尚未完全成熟的红细胞，提示骨髓造红细胞能力活跃。12形态异常水滴型红细胞刺毛红细胞椭圆型红细胞类型很多，原因复杂常见有：13口形红细胞球型红细胞靶形红细胞还包括新月形、缗钱状、裂片形等。14结构异常嗜碱性点彩红细胞染色质小体卡-波环有核红细胞15161718卡--波环胞质中出现的紫红色细线圈状结构，环行或8字形，常与染色质小体同时存在，可见于白血病、增生性贫血等。19三、白细胞形态检查201、中性粒细胞核象变化成熟幼稚21（1）核象左移外周血中杆状核超过5%和/或出现杆状核以前的细胞，为核左移。见于急性感染、急性中毒、急性溶血。22（2）核象右移一般外周血中的中性粒细胞以3叶为主，如果5叶以上超过3%，为核右移。大多数由于缺乏造血物质，如恶性贫血、巨幼细胞性贫血。23空泡变性棒状小体中毒颗粒杜勒小体2、中性粒细胞其它异常24252627在传染性单核细胞增多征、病毒性肺炎、病毒性肝炎等病毒感染时或过敏原的刺激下，可使得淋巴细胞增生，并出现形态学的变化。•分为空泡型、不规则型和幼稚型3、异常淋巴细胞28291、方法显微镜计数法血细胞分析仪法一、红细胞计数第二节红细胞检验30•成年男性：(4.0—5.5)×1012/L•成年女性：(3.5—5.0)×1012/L•新生儿：(6.0—7.0)×1012/L2、参考值313、临床意义A、生理性增多新生儿、高原生活、剧烈运动、精神因素等（1）增多32（B）绝对性增多：继发性心、肺疾病异常血红蛋白病某些肿瘤等原发性真性红细胞增多症病理性增多（A）相对性增多：血浆水分丢失，有形成分相对增加，绝对值没有发生变化33生理性减少儿童、孕妇、老年人病理性减少A、骨髓造血功能低下如再障B、造血原料缺乏如缺铁贫、巨幼贫C、红细胞破坏增加如溶贫D、红细胞丢失过多（2）减少34二、血红蛋白测定（hemoglobinHb）35血红蛋白是由四条多肽链组成的,二条α链(每条含141个氨基酸残基)和二条β链(每条含146个氨基酸残基)。每条多肽链的螺旋结构形成一个疏水性的空间，可保护血红素分子不与水接触，Fe2+不被氧化。Fe2+位于血红素卟啉环的中央，与卟啉环的4个吡咯基以及多肽链上的组氨酸形成六配位体。每个血红蛋白分子可逆结合4个氧分子，每克血红蛋白可结合1.34mL氧气。361、测定方法•氰化高铁血红蛋白法（HiCN）•十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法（SDS-Hb）•叠氮高铁血红蛋白法（HiN3）372、参考值成年男性：120~160g/L成年女性：110~150g/L新生儿：170~200g/L38测定方法手工温氏比积法分析仪微量法三、血细胞比容测定（hematocrit，Hct）红细胞比积（Hct、PCV）：又叫红细胞体积分数。指在一定条件下经离心沉淀压紧的红细胞在全血标本中所占体积的比值。39【参考值】男性：0.40-0.50L/L（40-50容积%）。女性：0.37-0.48L/L（37-48容积%）。【临床意义】●红细胞比积增高：相对性增多（血液浓缩）。绝对性增高（真性红细胞增多症）。●红细胞比积减少：见于各种贫血。40四、红细胞相关参数的计算1、平均红细胞容积（meancorpuscularvolume,MCV）。MCV=每升血液中红细胞比积每升血液中红细胞数【参考范围】80～95fl41四、红细胞相关参数的计算２、平均红细胞血红蛋白量（meancorpuscularhemoglobin,MCH）MCH=每升血液中血红蛋白量每升血液中红细胞数【参考范围】27～31pg42３.平均红细胞血红蛋白浓度（meancopuscularhemoglobinconcentration，MCHC）四、红细胞相关参数的计算MCHC=每升血液中红细胞比积每升血液中血红蛋白量【参考范围】320～360g/L（32%～36%）43四、红细胞相关参数的计算４、红细胞体积分布宽度（RDW）定义：是反映周围血红细胞间体积差异的参数通过变异系数定量的表示红细胞体积分布的离散程度。原理：血细胞自动分析仪通过电阻的改变，产生脉冲信号的强弱。【参考范围】成人：≤15.0%新生儿：男≤15.9%女≤16.2%44【临床意义】根据上述指标可进行贫血的形态学分类。四、红细胞相关参数的计算45各种贫血时三项指数的变化MCVMCHMCHC大细胞性贫血正常正常正常正常细胞性贫血正常正常正常单纯小细胞贫血正常正常正常小细胞低色素性贫血正常正常正常46MCVRDWIDA↓↑巨幼贫↑↑溶贫↑↑铁粒幼贫血→↑再障→→单纯小细胞性贫血↓→47五、网织红细胞（reticulocyte）计数界于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡阶段细胞。因其胞质中残存的核糖核酸经碱性染料活体染色后，呈现点状或线网状结构，故名网织红细胞。48１、计数方法（1）手工方法：米勒Miller窥盘法该方法可明显提高计数的准确性和准确性.A31B将Miller窥盘放在显微镜目镜中,通过窥盘中大小方格间的9比1比例关系计算RBC数和网织RBC。49抗凝全血噻唑橙染色，用流式细胞仪分析样本中10000个细胞，报告网织红细胞%和平均荧光强度。荧光强度越强，细胞越幼稚。流式细胞仪分析简便，结果精确、灵敏，消除了取样带来的误差。（２）流式细胞仪法：50•成人：0.005～0.015（0.5%～1.5%)•新生儿：0.02～0.06•绝对值：(24～84)×109/L２、参考值51（1）评价骨髓增生能力，判断贫血类型再障时，明显降低。绝对值低于5×109/L可做为急性再障的辅助诊断指标。失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明显高于正常。营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持正常、轻度升高或降低。３、临床意义52（2）评价疗效网织红细胞反应：IDA或巨幼细胞贫血分别给予铁剂、维生素B12或叶酸治疗2-3d后，网织红细胞计数值开始上升，7-10d达到最高(10%左右)；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、血红蛋白开始升高。骨髓移植、EPO治疗后：若骨髓开始恢复造血功能，网织红细胞计数值上升。３、临床意义53（3）放、化疗监测机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制，早期HFR和MFR降低，然后才检测到网织红细胞的降低。而停止放、化疗，骨髓功能恢复后，又见上述指标依次上升。可指导临床医师适时调整治疗方案，避免造成严重的骨髓抑制。３、临床意义54•（Reticulocyteproductionindex,RPI）•病人网织红细胞/2*病人PCV/正常人PCV（男0.45，女0.40）•意义：•＞3提示溶血性贫血或急性失血性贫血；•＜2提示为骨髓增生低下或红细胞系成熟障碍性贫血。网织红生成指数55概念红细胞在一定条件下沉降的速度而言，简称血沉。在健康人血沉数值波动于一个较狭窄范围内。在许多病理情况下血沉可明显加快。六、血细胞沉降率（erythrocytesedimentationrate,ESR）56魏氏法：取静脉血1.6ml，按4:1比例与柠檬酸钠溶液（0.4ml）混匀，然后吸入清洁、干燥的标准魏氏血沉管，并调至“0”刻度处。血沉管在室温下（18～25℃）严格垂直放置。避免阳光直照、振动和血液外溢。1h后，读出血浆凹液面底部至沉降红细胞柱顶部之间距离，即为血沉结果。１、测定方法57动态监测法：根据血沉在中间40min中线性下降的原理，采用红外线技术每隔45s动态监测线性下降过程中红细胞沉降的位置，根据线性方程换算成魏氏法1h或2h的结果。１、测定方法58光密度法：意大利UDINE公司专利技术。红细胞缗钱状结构的形成对红细胞沉降的整个过程发挥关键作用，因此，全血的透光性将随着时间的变化而增加。该方法利用激光为光源，对毛细管中的微量全血进行照射，动态检测红细胞聚集和沉降的变化过程，而后通过光密度的变化换算成魏氏法的相关结果。１、测定方法59２、影响血沉的因素（１）血浆因素•正电荷的大分子蛋白质：血沉加快;•负电荷的蛋白质：血沉减慢;•脂类：胆固醇，甘油三脂，利于红细胞聚集，血沉加快;卵磷脂使血沉减慢;•分子多聚体药物：使红细胞聚集，如葡萄糖，白明胶等。60２、影响血沉的因素（２）红细胞因素红细胞数量：数量越少，阻力越小，血沉加快;红细胞形态：直径大，厚度薄，红细胞易形成缗钱状，血沉加快。61２、影响血沉的因素（３）技术因素血沉管的位置：倾斜，血沉加快;温度：温度越高，血沉加快;抗凝剂的使用:62３、临床意义（1）生理性加快妇女月经期；妊娠3月以上；老年人，特别是70岁以上的高龄者。63（2）病理性加快各种炎症组织损伤及坏死恶性肿瘤高球蛋白血症贫血高胆固醇血症64第二节白细胞检验无色有核细胞，分为中性粒细胞，嗜酸粒细胞，嗜碱粒细胞，淋巴细胞和单核细胞五种。65白细胞成熟过程祖细胞释放入外周血液血循环血管壁边缘池循环池原粒细胞早幼粒中幼粒晚幼粒杆状核分叶核成熟池(髓内)分裂池(髓内)贮备池(髓内)66一．白细胞计数是测定单位体积（通常是每升）血液中各种白细胞的总数。67１、参考值范围成人（4～10）×109/L儿童（5～12）×109/L6月~2岁(11～12）×109/L新生儿（15～20）×109/L68２、显微镜计数法原理用白细胞稀释液将血液稀释一定倍数并破坏红细胞后，在显微镜下计数一定容积中的白细胞数，经换算求得每升血液中的白细胞总数。69３、质量考核与评价（1）经验控制与红细胞数比较RBC:WBC=500:1WBC(×109/L)WBC/highpower,HP4~72~47~104~610~136~1013~1810~12与白细胞分布密度比较70(2)常规考核标准(RCS)(RoutineCheckingStandard)WBC≦4×109/L,RCS30%；WBC(4.1~14.9)×109/L,RCS20%；WBC≧15×109/L,RCS15%；超过以上标准为不合格。四大格所见白细胞数最大值－最小值四大格所见白细胞数平均值×100%RCS=71二.白细胞分类计数（