紫外和荧光分光光度计..

紫外和荧光分光光度计工作原理紫外—可见分光光度计基本结构：六个基本部分组成光源单色器比色室检测器放大器显示装置光源：发出所需波长范围内连续光谱，有足够光强度,稳定；所用灯的不同提供光的区间范围也不同。可见光区：钨灯，碘钨灯(320～2500nm)紫外区：氢灯，氘灯(180～375nm)紫外可见光区：氙灯（190-800nm）单色器：核心部件将光源发出的连续光谱分解为单色光的装置。棱镜:玻璃350～3200nm石英185～4000nm色散原理：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同；特点：色散均匀，谱带宽窄不同；入射狭缝准直透镜棱镜聚焦透镜出射狭缝白光λ1λ2光栅：在镀铝玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600、1200、2400条/mm)特点：波长范围宽、色散均匀、分辨性能好、使用方便。M1M2出射狭缝光屏透镜平面透射光栅光栅衍射示意图分光原理：光通过光栅，发生衍射和干涉而分光样品室样品室：容纳各种光径的吸收池的装置和附件。比色池：如：普通比色池、微量池、流动池等。紫外区一定要用石英杯，可见区可用玻璃杯。检测器：（光电检测器）常见：光电池、光电管、光电倍增管和光电二极管阵列。放大装置、转换器和记录仪：将测量信息放大、显示并输出的装置。单光束紫外可见分光光度计：双光束紫外可见分光光度计：光源—吸收池—单色器—DAD检测器—数据转换记录全谱分析偏离朗伯—比尔定律的因素：1、谱带宽度和溶液本身性质溶剂的选择：1、在测定的波长范围内吸收较少2、不会与溶质（被测样品）起化学反应3、挥发性较小特殊样品：1、会发射荧光的被测样品2、非常混浊的一片2、仪器性能与测量误差仪器性能：仪器误差，杂散光干扰等，系统误差误差引起透光率（T）产生误差△T，浓度（C）也随之产生误差△C。什么情况下浓度的相对误差△C/C最小？当T%=36.8%（A=0.456）时,测量所引起的相对误差最小。T=20%-65%，A=0.2~0.8之间进行测量,相对测量误差较小.减少误差的方法采取调节光径与浓度C的办法减少误差差示光谱法（低浓度、高浓度）T3、光的反射朗伯—比尔定律在推导过程中，曾经忽略了溶液对光的反射作用。如果溶液和溶剂对光的反射有较大的差异，就会引起比尔定律的偏离。为了消除误差，要尽可能地使参比溶液与样品溶液的组成接近。4、其它因素的影响：检测器非线性响应、溶液pH值、光分解、水解、温度等对吸光度产生影响；在选择参比溶液和显色剂时也要注意。DAD（PAD）检测器分光光度计二极管阵列检测器（DAD）又称光电二极管列阵检测器（PAD）PDA（photo-diodearray）PDAD（photo-diodearraydetector）Diodearraydetector，DAD20世纪80年代出现的一种光学多通道检测器。一个二极管对应接受光谱上一个纳米谱带宽的单色光每一个二极管相当于一个单色器的出口狭缝DAD检测器的灵敏度比通常的UA检测器约低一个数量级。单纯用于含量测定或杂质检查时，还是采用UA检测器为好。F-4500荧光分光光谱仪（日本Hitachi）荧光分光光谱仪工作原理：光源的激发光照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，被光电倍增管接受，最后以图或数字的形式显示出来。光源：高压汞灯或氙灯，在190nM-800nM范围，发射强度较大的连续光谱。激发单色器：置于光源和样品室之间的单色器（第一单色器）发射单色器：置于样品室和检测器之间的为单色器（第二单色器。样品室：石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。光源与检测器成直角安排，测量固体时，光源与检测器成直角。检测器：光电管或光电倍增管。可将光信号放大并转为电信号。荧光光谱仪工作原理示意图相对应该强度紫外-可见与荧光分光光度计工作原理区别：其它附属设施控温系统和装置停留装置固体样品架仪器功能VU—Vis仪光谱扫描（吸收、透光率、能量）定波长或多波长测定时间扫描拟合运算功能输出（强大的Excel表格输出）液体样品荧光光谱仪光谱扫描（Em、Ex）时间扫描同步荧光和共振荧光磷光分析时间分辨（荧光寿命）拟合运算功能输出（强大的Excel表格输出）液体、固体样品荧光猝灭猝灭：非光辐射跃迁浓度猝灭：临界浓度温度猝灭：T℃↑，发光强度降低动态猝灭——猝灭剂与发光分子碰撞静态猝灭——猝灭剂与发光分子结合混合猝灭——动态、静态（解析困难）猝灭公式：0q0SV1[Q]1[Q]FKKFPQnQPn0fAlogloglog[Q]FFKnF][10QKFF小结紫外和荧光分光光度计工作原理和功能