实验动物生物安全

实验动物的生物安全2020/4/8实验动物中心2医学实验动物学主讲：王晓斌联系方式13512518859EMAIL:[e-mail]引言实验动物：指经人工饲养、繁育，对其携带的微生物及寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚的，应用于科学研究、教学、生产和检定以及其他科学实验的动物。如大白鼠、小白鼠、裸鼠、豚鼠、家兔、比格犬、恒河猴、小型猪等。KM小鼠C57小鼠裸鼠SD大鼠新西兰兔Hartely豚鼠引言•实验用动物•实验动物•野生动物•观赏动物•经济动物•实验动物是从事科学研究、教学、生产、检定的重要支撑条件，广泛应用于医药研发、教学实验、生物检定等方面。•实验动物为人类健康和社会进步作出了巨大贡献。引言引言•全国一年繁殖实验动物约1300万只，实际用量在1000万只左右。实验动物在生产、使用过程中，存在感染、繁殖病原体的可能以及向环境扩散的危险，对人和环境产生生物安全问题。引言1999年北京某实验室曾发生实验人员感染流行性出血热事件。事件起因就是操作人员被携带病毒的实验动物抓咬伤而受感染引起的。引言•2006年长春市某高校中药系实验室发生学生感染流行性出血热事件，76名学生中有10名学生受感染。整个事件起因也是由于实验操作过程中被动物抓咬伤而造成的。引言•2009年3月法国食品卫生安全署(Afssa)的科学家，在实验室中对动物病体进行实验研究时。意外感染致命性炭疽病菌，受感染的5名人员被紧急隔离至医院监控以及治疗。•引言实验动物生物安全已引起国、内外高度重视。•2001年我国实施新版《实验动物国家标准》，其中规定：实验用大小鼠的等级提高到SPF级;•2004年《北京市实验动物管理条例》，修改和增加了实验动物生物安全方面内容;•2006年第二届北京实验动物科学国际论坛上，日本国立大学生物安全委员会委员长佐藤浩教授提出，生物安全已成为实验动物研究中不容忽视的重要因素。•实验动物生物安全是对实验动物可能产生的潜在风险或现实危害的防范和控制。•由实验动物造成的各种风险和危害包括：生产和使用实验动物中的各个环节，如实验动物的引种、保种、繁育、运输、进出口，使用实验动物(包括感染和非感染实验动物)进行动物实验、从事科研活动等过程中实验动物造成的各种危害。引言实验动物生物安全的条件与保障•国家、地方法律、法规•合格的实验动物与设施•严格、标准化的操作•废弃物的正确处理引言国家或地方实验动物主要法规、标准1、《实验动物管理条例》（1988）2、《实验动物质量管理办法》（修订版）（2001）3、《实验动物许可证管理办法（试行）》（国家：2001、江苏省：2002）4、《实验动物种子中心管理办法》5、《省级实验动物质量检测机构技术审查准则》国家或地方实验动物主要法规、标准6《实验动物微生物等级及监测》7《实验动物寄生虫等级及监测》8《实验动物环境及设施》9《哺乳类实验动物的遗传质量控制》10《实验动物配合饲料通用质量标准》11《实验动物配合饲料卫生标准》国家或地方实验动物主要法规、标准•实验动物生产许可证实验动物使用许可证国家或地方实验动物主要法规、标准国家或地方实验动物主要法规、标准•江苏省实验动物管理条例：第四章：生物安全与实验动物福利•第二十二条实验动物发生传染性疾病时，从事实验动物生产、使用的单位和个人应当及时采取隔离、预防控制措施，防止动物疫情扩散，同时报告当地畜牧兽医主管部门、动物防疫监督机构；当发生人畜共患病时，还应当立即报告当地疾病预防控制机构。实验动物分为四级：一级为普通级；二级为清洁级；三级为无特定病原体（SPF）级；四级为无菌级（包括悉生动物）。目前比格犬、恒河猴、小型猪等大动物多为普通级，大、小鼠、裸鼠均为清洁级、SPF以上，豚鼠、家兔等既有普通级，又有清洁级、SPF级。实验动物设施分为三级：一级为普通系统；二级为屏障系统；三级为隔离系统。实验动物及其设施的等级•隔离系统(Insulationsystem)是以隔离器(Isolator)为主体及其附属装置组成的饲养系统。用作饲养无菌动物和已知菌动物。•屏障系统(Barriersystem)这是清洁级、SPF级动物生产或实验的设施。人、实验动物、饲料、饮水、垫料、空气及其它物品均需进行严格的微生物控制。•普通系统(Opensystem)只能进行普通级实验动物的生产与实验。实验动物及其设施的等级实验动物及其设施的等级•不同等级动物及其设施：必须由省级实验动物监测机构监测合格，发放“实验动物质量监测保合格证或设施合格证”。•实验中所用动物必须为质量合格动物。实验动物及其设施的等级隔离环境•以隔离器(Isolator)为主体及其附属装置组成的饲养系统。用作饲养无菌动物和已知菌动物。洁净度达到一百级。实验动物及其设施的等级•隔离环境动物设施主要指标•洁净度：100级（空气三级过滤后，加隔离器）•温度：生产设施为20-26℃，实验设施为20-25℃•日温差：生产≤4℃，实验≤3℃•相对湿度：40-70%•压强梯度：100-150Pa•换气次数：20-50次/h；气流速度：0.1-0.2m/s•落下菌数：≤0个/皿;氨浓度：≤14ng/m3屏障环境主要用于进行SPF级、清洁级的大鼠、小鼠、裸鼠等小动物实验（配备饲养室及操作室）。屏障系统(Barriersystem)这是饲养SPF动物的设施。人、实验动物、饲料、饮水、垫料、空气及其它物品均需进行严格的微生物控制。送入的空气需经初、中、高效三级过滤，洁净度达到10000级，饲料、饮水、垫料经灭菌后方可使用。实验动物及其设施的等级屏障系统通行路线图•在屏障设施内一切操作要实行严格的微生物控制，因为屏障系统内要长期饲养SPF动物,保持不被污染，而人员、物品要经常出入,其中人员又不能彻底灭菌,所以人是最大可能的污染源，因此，对人员的要求要特别严格，要有严密的操作细则。实验动物及其设施的等级•屏障环境（正压）动物设施主要指标•洁净度：10000级（空气经过初、中、高效三级过滤）•温度：生产设施为20-26℃，实验设施为20-25℃•日温差：生产≤4℃，实验≤3℃•相对湿度：40-70%•压强梯度：20-50Pa•换气次数：10-20次/h；气流速度：0.1-0.2m/s•落下菌数：≤3个/皿;氨浓度：≤14ng/m3实验动物及其设施的等级屏障环境动物实验设施设备实验动物及其设施的等级屏障环境动物实验设施设备实验动物及其设施的等级屏障环境动物实验设施设备普通环境主要用于进行兔、猫、狗、猴等大动物实验饲养（配备饲养室及操作室）。实验动物及其设施的等级实验动物及其设施的等级•普通环境动物设施主要指标•洁净度：--•温度：生产设施为16-28℃，实验设施为16-26℃•日温差：实验≤4℃•相对湿度：40-70%•压强梯度：--•换气次数：8-10次/h；气流速度：0.1-0.2m/s•落下菌数：≤30个/皿;氨浓度：≤14ng/m3实验动物及其设施的等级普通环境动物实验设施设备实验动物及其设施的等级普通环境动物实验设施设备涉及传染性、中毒性、放射性、致癌性、致突致畸及致死性实验等应在有特殊要求的生物安全实验室中（负压）进行，应根据生物安全防护的要求进行建筑或改造，按照有关规定执行。WHO将动物生物安全实验室分为四级：•动物生物安全实验室一级(ABSL-1)•动物生物安全实验室二级(ABSL-2)•动物生物安全实验室三级(ABSL-3)•动物生物安全实验室四级(ABSL-4)实验动物及其设施的等级实验动物及其动物实验的操作•实验动物生产的生物安全：实验动物生产过程中，对实验动物可能造成的各种风险和危害的防范和控制。实验动物生产，包括实验动物的引种、保种、繁育、运输、进出口等过程。定期进行严格的微生物指标监测。•实验动物引种：实验动物种子来源于国家实验动物保种中心，遗传背景清楚，质量符合国家标准。•实验动物保种和繁育：必须由国家或行业主管部门认可的单位进行。实验动物及其动物实验的操作适用于SPF/无菌动物饲养或运输•实验动物运输：运输实验动物时，所使用的转运工具和笼器具，应当符合所运实验动物的微生物和环境质量控制标准。不同品种、品系、性别和等级的实验动物，不得在同一笼盒内混合装运。实验动物及其动物实验的操作实验动物及其动物实验的操作实验动物使用的生物安全：动物及饲养要求:1、引进动物进行实验必须具备实验动物质量合格证,实验前隔离检疫1-6天。2、坚持卫生消毒制度：定期对动物室、操作室和饲养用具进行消毒。3、饲养管理人员要定期做健康检查。实验操作要求：动物实验人员实验操作过程中做好防护，穿戴好工作衣、帽、口罩、手套;严格按标准操作规程进行。实验动物及其动物实验的操作实验动物及其动物实验的操作屏障环境标准操作规程•SPF级动物实验室的管理责任•SPF级动物实验室工作人员职责•SPF级动物实验室人员进出的标准操作规程•SPF级动物实验室物品进出的标准操作规程•SPF级动物实验室动物进出的标准操作规程•使用SPF级动物实验室的标准操作规程•SPF级实验动物购买的标准操作规程•SPF级实验动物接收和检疫的标准操作规程实验动物及其动物实验的操作屏障环境标准操作规程•SPF级动物实验室实验动物饲料、饮水、垫料管理的标准操作规程•SPF级实验动物抓取和保定的标准操作规程•SPF级实验动物逃脱处理的标准操作规程•SPF级实验动物死亡和伤病处理的标准操作规程•高压蒸汽灭菌器使用与维护的标准操作规程•传递窗使用与维护的标准操作规程•渡槽使用与维护的标准操作规程实验动物及其动物实验的操作屏障环境标准操作规程•SPF动物室照明及紫外线设备使用与维护的标准操作规程•消毒灭菌方法的标准操作规程•SPF动物实验室日常管理的标准操作规程•屏障系统日常卫生与消毒的标准操作规程•空调净化系统使用与维护的标准操作规程•SPF动物实验室净化的标准操作规程•SPF级动物实验室内环境监控的标准操作规程•SPF级动物实验室实验动物笼子标记的标准操作规程实验动物及其动物实验的操作普通环境标准操作规程•普通级实验动物设施管理责任的标准操作规程•使用普通动物实验室的标准操作规程•实验动物重新进入普通级动物室的标准操作规程•普通级实验动物、饲料、饮水、垫料购买及管理•普通级动物室人员保健和安全的标准操作规程•普通级动物室实验动物接收的标准操作规程•普通级动物室实验动物和物资进出管理的标准操作规程•普通动物室抓取动物的标准操作规程实验动物及其动物实验的操作普通环境标准操作规程•普级级实验动物逃脱、死亡和伤病处理的标准操作规程•进入普通级动物实验室内人员管理的标准操作规程•普通级动物室环境监控的标准操作规程•普通级动物室笼具和其它辅助设备管理标准操作规程•普通级动物室环境卫生管理的标准操作规程•普通级动物室实验动物笼子标记的标准操作规程•实验用Beagle狗饲养的标准操作规程•实验用兔饲养的标准操作规程•实验用豚鼠饲养的标准操作规程实验动物及其动物实验的操作•不同品种、不同等级和互有干扰的动物实验，不得在同一实验间进行饲养，同一来源、相同品种、品系而用于不同实验目的动物实验饲养，原则上也不得在同一实验间进行。•不得将普通级动物带进屏障环境中进行实验，如将实验动物带离屏障环境进行实验，须经过严格的包装、灭菌处理，否则不得再带回屏障环境中进行饲养、实验。实验动物及其动物实验的操作•在进行实验时，为了不损伤动物的健康，不影响观察指标，并防止被动物咬伤，首先要限制动物的活动，使动物处于安静状态。•实验人员必须掌握合理的抓取固定方法,掌握熟练的动物实验操作技术。实验动物及其动物实验的操作实验动物误伤的处理•实验动物咬伤救治在伤口上方扎止血带，然后用高猛酸钾或双氧水冲洗伤口，并用5％石炭酸或硝酸烧灼腐蚀伤处。伤口若比较大或自己不好处理，最好去医院处理。•同时24小时内到防疫站注射疫苗（如狂犬疫苗、流行性出血热疫苗，等）。标本处理：动物血液及组织标本立即按实验要求进行分离、冻存或固定等处理后存放。动物实验标本及废弃物的处理动物实验标本及废弃物的处理•实验动物使用的各种废弃物可按《医疗废物分类目录》进