初始污染菌试验操作指导书

初始污染菌、车间工作台面及工作服表面细菌总数、生产工人手细菌总数试验操作指导书文件编号:XX/JG-002版本：A修改状态：0受控状态：发布日期：实施日期：编写:校对:核准:XX/JG-002初始污染菌、车间工作台面及工作服表面细菌总数、A/0生产工人手细菌总数试验操作指导书11.引用标准：GB15980-1995，GB7918.2，2010版药典2.技术指标：一次性使用引流袋，一次性使用透析护理包等非管道类、敷料：≤100cfu/g；一次性使用静脉留置针，一次性使用内瘘针，血液净化装置的体外循环血路等管道类：内腔≤10cfu/件次，外部≤100cfu/件次；车间工作台面（尤其是关键操作点）及工作服表面细菌总数≤10cfu/cm2，生产工人手细菌总数≤300cfu/每只手。3.检测环境要求：环境洁净度10000级下的局部洁净度100级单向流空气域内进行。4.测试数量及频率：产品每批随机抽取10件；车间工作台面（尤其是关键操作点）及工作服表面细菌总数、生产工人手细菌总数每周检测一次。5试验设备：培养皿、镊子、5×5cm的灭菌规格板等采用干热灭菌205℃，4h；移液管、棉拭子、注射器等用牛皮纸包好，采用高压蒸汽灭菌，121℃，20min。6.试验试剂：6.1生理盐水：NaCl:8.5g+蒸馏水：1000mL，溶解后，去分装到试管中，锥形瓶中，每瓶90mL,121℃,20min高压灭菌；6.2营养琼脂培养基制备：①溶化：按照说明书称取溶解培养基；②校正酸碱度：调节PH指到7.1-7.4；③灭菌：采用高压灭菌，121℃，30min。7试验步骤：7.1供试液的制备：7.1.1供试品是一次性使用引流袋，一次性使用透析护理包时，用无菌手续取样品10g，放入100mL灭菌生理盐水中，充分振荡后得到1：10的供试液；7.1.2供试品是一次性使用静脉留置针，一次性使用内瘘针，血液净化装置的体外循环血路时，做内腔时，取10mL灭菌生理盐水，注入到产品中，得到的洗脱液即为供试液。取1mL供试液到9mL灭菌生理盐水中，即得1：10的供试液；7.1.3供试品是一次性使用静脉留置针，一次性使用内瘘针，血液净化装置的体外循环血路时，做外腔时；7.1.4供试品为工作台面或工作服表面时，将内径为5×5cm的灭菌规格板放在被检物体的表面，用浸有灭菌生理盐水的棉拭子，在规格板内涂抹10次（往返为1次），将棉拭子放入10mL灭菌生理盐水的采样管中，采平行样1～4个；7.1.5供试品为生产人员手时，取右手，被检手五指并拢，将浸有灭菌生理盐水的棉拭子在右手指曲面，从指尖、甲沟至指根处往返涂10次后，将棉拭子放入10mL灭菌生理盐水的试管中，采平行样1～4个；7.2用灭菌吸管吸取1：10的供试液1mL2次，分别注入到两个培养皿中，另取1mL注入到XX/JG-002初始污染菌、车间工作台面及工作服表面细菌总数、A/0生产工人手细菌总数试验操作指导书29mL灭菌生理盐水中，使成1：100的稀释液，吸取1mL2次，分别注入到两个培养皿中，如样品含菌量高，还可继续稀释成1;1000等，每个稀释级的供试液取两个平行样。7.3将灭好菌的培养基冷却至45-50℃，倾注于4.2中加过样品的平皿内，另倾注一个不加样品的灭菌空平皿内，作为空白对照，随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，带琼脂凝固后，翻动平皿，至37℃培养箱中培养48h。8.菌落计数方法及报告方法:8.1先用肉眼观察，点数菌落数，再用5-10倍的放大镜检查，以防遗漏。8.2记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。8.3若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数。若片状菌落不到平皿中的一半，而其他一半中的菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘以2，以代表全皿菌落数。8.4选取平均菌落数在30-300之间的平皿，作为菌落总数测定的范围。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘以其稀释倍数。8.5若有两个稀释度的平均菌落数均在30-300之间时，则应求出两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于2则报告其中较小的菌落数。8.6若所有稀释度的平均菌落数均大于300个，应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告。8.7若所有稀释度的平均菌落数均少于30个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告。8.8若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300个之间，且其中一个稀释度大于300个，而相邻的另一稀释度小于30个时，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告。8.9若所有稀释度均无菌生长，报告数为每克或每毫升小于10个。8.10菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五入计算。零的个数可采用指数法表示。在报告菌落数为“不可计”时，应注明样品的稀释度。8.11计算公式：菌落/每件次（或g）=平均菌数×稀释倍数/件次或重量（g）。