6.实验五、网织红细胞计数

网织红细胞计数Retic【概念】网织红是晚幼红细胞脱核后到完全成熟的红细胞之间的过渡型细胞，其胞浆中尚存有嗜碱性物质，用煌焦油蓝活体染色后，胞浆中可见有兰绿色网状结构，故名网织红。计数时任何没有核的，有两个或更多的相当于核糖粒RNA蓝染物质颗粒的红细胞，均计为网织红细胞。【形态特点】比成熟红细胞稍大，直径8.0～9.5μm。细胞内含有兰色颗粒或线条状网织结构，颗粒愈少愈成熟，多分布于边缘。O型花冠型Ⅰ型丝球形Ⅱ型网型Ⅲ型破网型Ⅳ型点粒型骨髓周围血【形态】Ⅰ型丝球形Ⅱ型网型Ⅲ型破网型Ⅳ型点粒型【形态】【器材】1、显微镜2、Miller窥盘（直径19mm，厚1mm，内含大小两个正方格，二者面积比为9:1）3、试管、玻片4、水浴箱【试剂】1、新亚甲兰溶液此液为WHO所推荐，对Ret染色强,且稳定。2、煌焦油兰盐水液【方法】1、试管法小试管内加染液2滴+血2滴混匀（颜色为墨绿色）37℃水浴15min。取出混匀2min，制成薄血膜片待干油镜计数1000个红细胞中的网织红细胞数【方法】2、玻片法1）在载玻片的一端加加煌焦油蓝1滴，干燥备用。2）取血液1滴，滴在干燥的染料上，用推片角混匀，然后用另一块玻片盖在此载玻片后静置15min～20min，取用1滴制成薄血涂片。3）观察计算同试管法【计算】除1000即为网织红细胞分数数。除10即为百分率。【结果报告】X.X%【注意事项】1．染色时间要充足，混合后不能立即推片。2．室温下（25℃）染色Ret检出率明显低于37℃染色，应于37℃染色。3．试管法染色液：血液应为1：1，当染色液加入血液后颜色由蓝色变为墨绿色时即可。【注意事项】4．不宜瑞氏复染。可使网织红细胞计数结果减少。①红细胞染色越深，网织结构越不清晰。②染料沉渣易沉淀在血膜上影响观察。5．试剂应定期重配，以免变质沉淀。【注意事项】6．Miler窥盘是用1/9的面积推断整个大方格内的红细胞数，所以细胞分布必须很均匀，否则会得出错误结果，判断的方法如下：5个大方格内红细胞数/5个小方格内红细胞数=97．对压线细胞应按数上不数下，数左不数右的原则进行计数。