药物分析课件第9章-维生素类药物的分析

第九章维生素类药物的分析概述维生素A维生素D维生素E维生素B1维生素C练习与思考返回主目录基本要求基本要求一、掌握维生素类药物的结构特点与分析方法之间的关系。二、掌握维生素类药物的鉴别原理与方法。三、掌握三点校正法测定维生素A的原理、测定方法与计算方法。四、掌握维生素D的HPLC含量测定法和维生素E的GC含量测定法。五、掌握维生素B1非水溶液滴定法与维生素C碘量法的测定原理、方法与注意事项。六、熟悉本类药物其他的含量测定方法。七、熟悉本类药物杂质检查方法。八、了解维生素A三点校正法的推导过程。返回概述维生素：是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物资。人体不能合成维生素。VitA、D2、D3、E、K1等脂溶性水溶性VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。分类按溶解度分返回-H维生素A醇-COCH3维生素A醋酸酯-COC15H31维生素A棕榈酸酯R:第一节维生素A为一个具有共轭多烯侧链的环己烯（一）结构与性质一、具有UV吸收存在多种立体异构化合物VitA2VitA3易发生脱氢、脱水、聚合反应鲸醇酸醛环氧化物、氧化剂紫外线、VitAVitAVitA]O[O2△或有金属离子存在时氧化↑共轭多烯侧链易被氧化（二）环氧化物VitA醛VitA酸三氯化锑反应（一）条件无水无醇紫红蓝色3SbClVitACHCl3鉴别试验二、-RCOOSbCl5+CH2蓝色紫红+CH2-RCOOSbCl5（BP（2000））VitAVitAHCl去水△无水乙醇λmax为326nm一个吸收峰UV法（二）λmax为350～390nm三个吸收峰去水VitA（VitA3）CH2↓VitAUSP显色剂磷钼酸规定斑点颜色和Rf值BP杂质对照品法显色剂三氯化锑TLC法（三）立体异构体氧化降解产物合成中间体UV法（一）含量测定三、维生素A2维生素A3环氧化物维生素A醛维生素A酸三点校正法（法定方法）1.原理：（1）杂质的吸收在310~340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；（2）物质对光的吸收具有加和性。2.波长的选择：（1）1VitA的max（328nm）（2）23分别在1的两侧各选一点测定对象VitA醋酸酯328340316328第一法等波长差法=12nm第二法等吸收比法测定对象VitA醇32176AAA1=325nm,2=310nm,3=334nm3.测定法（1）基本步骤:第一步A的选择选择依据：所选A值中杂质的干扰已基本消除注意：C为混合样品的浓度第二步求)(%cm1样l(%)CA%)(cm1样)()(%cm1%cm1纯样第三步求效价换算因数）效价（样样%)(cm1)(Eg/IU换算因数由纯品计算而得：%)(cm1Eg/IU纯）效价（换算因数＝醋酸酯维生素Ag344.0IU12907000g344.0g101g/IU6）效价（15302907000Eg/IU%)(cm1纯）效价（换算因数＝1900醇维生素Ag300.0IU13330000g300.0g101g/IU6）效价（18203330000Eg/IU%)(cm1纯）效价（换算因数＝1830第四步：求标示量％％标示量平均丸重＝100g/IU％标示量丸标示量％＝100/IU％标示量平均丸重换算因数100CA•方法：（2）第一法维生素A醋酸酯iAnm360340328316300ml/IU159S处测、、、、分别于溶液～环己烷•判断是否在326～329nm之间maxmax在326～329nm之间改用第二法是否•求算并与规定值比较328iA/A299.0AA811.0AA0000.1AA907.0AA555.0AA328360328340328328328316328300规定值差值328iA/A•判断差值是否超过规定值的02.0有一个以上超过02.0无超过02.0•计算A328（校正）•用A328计算%100AAAf328328)(328校正3403163283282523AAA.A校正03%－15%－3%第二法校正328A328A第二法讨论1.VA醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法（即代数法）推导而来；VA醇的吸收度校正公式是用相似三角形法（几何法或称6/7定位法）推导而来。2.在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定。在测定前务必要校正波长。测定的样品应不得少于两份。VitAD胶丸中VitA的含量测定精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.07985g/丸）的内容物0.1287g至10ml烧杯中，加环己烷溶解并定量转移至50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为A300：0.374A316：0.592A328：0.663A340：0.553A360：0.228A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.834A360/A328：0.344求本品中维生素A占标示量的百分含量？A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.834A360/A328：0.3440.5550.9071.0000.8110.299+0.01－0.010+0.02+0.04－－－－－=====A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)=3.52(2×0.663–0.592–0.553)=0.637A328(校正)–A328(实测)A328(实测)×100=0.637–0.6630.663×100=-3.92E1%1cm(328nm)=A328(校正)100ms/D=0.637100×0.1287/1250=61.87供试品中维生素A效价=E1%1cm(328nm)×1900=61.87×1900=117553（IU/g）标示量%=VA效价(IU/g)×每丸内容物平均装量(g/丸)标示量(IU/丸)×100%=117553×0.0798510000×100%=93.9%适用于维生素A醇（等吸收比法）第一法无法消除杂质干扰时用此法[皂化法、6/7A法]（3）第二法i/KOHAnm334325310300ml/IU159VitAVitAS处测、、、于～稀释至溶解异丙醇除去植物油的干扰甘油和脂肪酸盐植物油醇醋酸酯皂化液挥干乙醚乙醚提取乙醇水溶性脂溶性•判断max是否在323～327nm之间取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定•计算325300AA是否•判断A300/A325是否大于0.73是否取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定•计算A325(校正)%100AAAf325325)(325校正334310325325260455528156A.A.A.A校正03%－3%校正325A325A校正325A三氯化锑比色法（二）优点简便快速λmax618nm～620nm标准曲线法SbOClSbClOH32缺点呈色不稳定（5~10s内）水分干扰与标准曲线温差≤1℃专属性差三氯化锑有腐蚀性（二）蓝色+3SbClVitA返回第二节维生素DHOHHCH2CH3HHHCH3CH3CH3CH3维生素D2一、结构与性质HOHHCH2CH3HHCH3CH3CH3维生素D3开环的甾体：具有甾类化合物的显色反应，可用于鉴别。手性碳原子：具有旋光性，可用于鉴别。多烯：可进行紫外检测。二、鉴别试验1.显色反应醋酐--硫酸反应D2黄红紫绿D3黄红紫、蓝绿绿三氯化锑反应橙红色渐变粉红三氯化铁反应橙黄色二氯丙醇和乙酰氯反应绿色2.比旋度鉴别维生素D2维生素D3溶剂浓度比旋度值无水乙醇无水乙醇40mg/ml5mg/ml+102.5°～+107.5°+105°～+112°注意事项：应于容器开启30分钟内取样，在溶液配制后30分钟内测定。3.区别反应：以96%乙醇为溶剂，加乙醇和85%硫酸，D2显红色，在570nm处有最大吸收，D3显黄色，在495nm处有最大吸收。4.其他方法：TLC、HPLC、制备衍生物测熔点三、杂质检查维生素D2中麦角甾醇的检查：加洋地黄皂苷溶液，混合，放置18h不得发生浑浊或沉淀。前维生素D的光照产物四、含量测定方法中国药典（2000年版）采用正相高效液相色谱法测定维生素D的含量，定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲酸二甲酯，该法分为三个方法。固定相：硅胶流动相：正己烷-正戊醇（997：3）第一法：用于无维生素A醇及其它杂质的干扰的情况，步骤如下：1．系统适用性试验：测定重复性和分离度。VitD3对照品前VitD3反式VitDVitD3速甾醇DVitD3重复性前VitD3与反式VitD3VitD3与速甾醇D390℃1h254nm365nmHPLC冷却环己烷R大于1.0RSD小于2.0%峰：峰峰332．测定校正因子：AS/mSf1=--------Ar/mrf2=（ASmr-f1mSAr1）/（Ar1mS）3．含量测定：mi=（f1Ai1+f2Ai2）mS/AS第二法：用于有杂质的干扰的情况，步骤如下：1．皂化处理：皂化、乙醚提取、洗涤提取液、蒸除乙醚、制备供试液A。2．净化：供试液A经液相色谱分离，准确收集含有维生素D及前维生素D混合物的全部流出液，制备成供试液B。固定相：ODS流动相：甲醇-乙腈-水（50：50：2）3．含量测定：取供试液B按第一法测定。第三法：用于经第二法处理后仍有杂质的干扰的情况。步骤如下：1．制备供试液：取供试液A，净化，水浴加热，得供试液C。制备对照液：对照品储备液：稀释、加热。2．含量测定：在第一法的色谱条件下，交替精密进样对照液和供试液，按外标法定量。返回苯并－二氢吡喃醇第三节维生素EOHOOR1HOR2CH3名称R1R2相对活性α-生育酚β-生育酚γ-生育酚δ-生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1***CH3COOCH3CH3CH3CH3CH3CH3H3CH3COdl－α－生育酚醋酸酯结构与性质一、苯环+二氢吡喃环+饱和烃链1、UV2、乙酰化的酚羟基易水解緘緘緘瑌]O[醌型化合物△生育酚緘緘緘緘畗緘+orOHHVitE杂质，需检查緘]O[生育红（一）硝酸反应橙红色鉴别二、75℃15′緘緘緘畗緘HNO3VitE生育酚OOCH3C16H33H3CCH3O（橙红色）生育红CH3HOOCH3C16H33CH3H3C生育酚HNO3强氧化剂三氯化铁－联吡啶反应（二）OCH3CH3CH3CH3CH3-COOC16H33KOHHOOCH3CH3CH3CH3C16H33OOH3CCH3OHCH3C16H33CH3CH3HOOCH3C16H33CH3H3C生育酚对-生育醌+3Fe[O]弱氧化剂血红色+23Fe3++2FeNNNN=41.0～45.5%cmE11λmax=284nmλmin=254nm0.01%无水乙醇中UV法（三）薄层板硅胶G展开剂环己烷-乙醚（4：1）显色剂硫酸（105℃5′）VitERf=0.7-生育酚Rf=0.5-生育醌Rf=0.9TLC法（四）2.游离生育酚生育醌对生育酚++++3422CeCe杂质检查三、原理1.酸度以NaOH滴定液（0.1mol/L）体积控制。nCMT（M生育酚=430.8））（ml/mg154.228.43001.0T例取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不得过1.0ml。%100WTV%限量≤2