实验五、线粒体的超活染色与观察

实验五线粒体的超活染色与观察验证型•掌握口腔上皮细胞临时标本的制做方法•理解并掌握超活染色的原理及注意事项。一、实验目的三、实验原理1)活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。2)线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。3)詹纳斯绿B（JanusgreenB）是线粒体的专一性活体染色剂。线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。•仪器：光学显微镜、载玻片、盖玻片、培养皿、消毒牙签、吸水纸、擦镜纸；•药品：詹纳斯绿B染液、生理盐水；•材料：口腔上皮、洋葱鳞茎内表皮三、实验器材试剂配制（1）Ringer溶液（100mL）•氯化钠0.85g•氯化钾0.25g•氯化钙0.03g（2）1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液•称取0.5g詹纳斯绿Ｂ溶于5mLRinger溶液中，稍加热(30-40℃)溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。•取1mL1%原液加入49mLRinger溶液，即得1/5000工作液，将其装入棕色瓶中备用。最好现配现用，以保持充分的氧化能力。四、实验步骤（一）口腔上皮线粒体显示口腔粘膜上皮细胞涂片的制作染色绘图并描述现象1、口腔粘膜上皮细胞涂片的制作：1）将载玻片刷洗干净，用纱布擦干，置于实验台的适当位置；2）蒸馏水漱口，将牙签粗的一端放入自己口腔中；3）用力适当的在口腔颊内刮几下（用力轻重适宜，以获得活力旺盛的细胞，又不损伤皮肤）4）将刮下的白色粘性物薄而均匀地涂在载玻片上（可用生理盐水，细胞容易展开；可不用，不用的容易贴壁）。2、染色：将片子放在37℃水浴中在材料部位滴3-5滴詹纳斯绿B染液染色5-10分钟加盖玻片后，擦净盖片周围残液镜检预期效果低倍镜：口腔内粘膜上皮细胞成群或分散存在，大多呈扁平状，核呈圆形或椭圆形，被染成淡蓝色。选择轮廓清楚的细胞，转换高倍镜观察，可见细胞质中散在一些被染成亮绿色的粒状和短棒状的颗粒，即线粒体。（二）洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体显示（1）载玻片中央加2滴詹纳斯绿Ｂ溶液工作液（1/5000）；（2）镊子撕取适当大小的洋葱鳞茎内表皮，铺展在染液中；（3）载玻片置于37℃恒温水浴，染色5～10min；（4）吸去染液，加Ringer溶液１滴，盖上盖玻片，显微镜下观察。五、作业1、分别绘制口腔上皮细胞和洋葱内表皮细胞内线粒体分布图；2、简单计数两种类型细胞内线粒体数目。