血清分离

实验室血清的分离和保存在做疾病检测特别是抗体水平监测时，我们选取的样本往往是动物的血清。众所周知，实验结果的可靠性、准确性受很多因素的影响。因此，为了尽量保证实验结果的可靠性，我们必须抓好采血这个环节。结合本人的实验经验，我认为要获得相对好的血清须从以下几个方面的细节工作做起：一、采血器的制备为方便离心，建议采用可以直接离心的一次性兽用采血器（但费用较高）。如无专门的采血器，亦可采用一次性使用无菌注射器。二、保定对于哺乳仔猪、保育猪、育肥前期和育肥中期猪，可使用人工保定，采血部位一般选择在颈静脉、前腔静脉。颈静脉与前腔静脉采血时，把猪仰卧保定比较好。对于成年母猪与公猪及育肥后期的猪则须用保定器保定，采血部位一般选择在颈静脉或耳静脉，因为颈静脉处脂肪比前腔静脉处脂肪薄，容易炸透。三、消毒为尽量减少污染，采血前应用75%的酒精棉由内向四周对采血部位进行消毒。酒精棉不宜太湿，否则容易发生溶血。四、血清的分离方法1条件允许时（即采用的是可直接离心的采血器且配备有离心机），可先将采好的血液呈45-60度角与4℃冰箱放置1小时，然后用低速离心机离心3-5分钟，转速为3000-4000转。即可倒出血清至血清杯中并标明序号（注意不要贴纸标签），并作好记录。此方法成功率基本上为100%。方法2首先用无菌的牙签轻轻地在注射器壁来回划（注意不能搅血凝块，以免发生溶血），使血凝块与注射器分开，然后与4℃冰箱中放置约1小时，然后再将血液放置于37℃（可放于恒温培养箱中）约1小时，即可析出血清。此方法成功率约为90%-100%。方法3将采好的血液呈45-60度角于室温（20-25℃）下放置约2-3小时即可分离出血清。如天气较为寒冷，则应辅以保温措施，但温度不宜过高。此方法成功率约为80%-90%。方法4如预快点析出血清而又没有离心机，则可以将采好的血液呈45-60度角与37℃放置，约2小时即可析出血清。此方法成功率约为85%-90%。五、血清的保存如果在三天内即进行检测，血清的保存可以选择冷藏，否则应选择冷冻保存。六、体会1、为能获得较为透亮的血清，倒血清时宜先用烧烫的针头在血清上方刺一小孔，使注射器内外的压强保持一致。2、如采出的血液完全呈胶冻样，建议用灭菌的针头小心地将胶冻样物质取出，再稍微离心或静置即可分离出血清。3、析出的血清应及时倒出，否则如果放置时间过长将会影响血清的品质，尤其是在炎热的夏天更应注意。4、在血液的量相同的情况下，方法1析出的血清的量较其他方法多，且血清分离的较彻底，血液的品质也是最好的，但其成本比较高；方法3需要的时间较长，但适用于没有配备离心机的场。关于血清胶冻样采血后放置的时间太短，凝血的程度不够，血液没有完全分层就做离心处理的原因，血刚抽出来，收缩不完全就离心，血清则呈胶冻状，而且由于离心使红细胞、活化的血小板离开了纤维蛋白网，缺乏磷脂表面，胶冻状的纤维蛋白将再也无法收缩。采血后要多放一段时间，待纤维蛋白收缩后，再离心，上层就是清亮的血清了。这种胶冻状的物质是胶原蛋白或者纤维蛋白原，在血液凝固过程中形成的。可以用枪头将胶冻状的物质挑去，然后吸取血清样品。一般进食后采血容易发生。所以建议空腹采血。采血后不要使用抗凝剂抗凝，自然析出的血清一般不会出现这种情况，使用抗凝剂的很容易出现，抗凝剂抗凝得到的血浆可以加适量的氯化钙温育一下再离心，就可以去除其中的纤维蛋白原和纤维蛋白！血液从人体抽出时间放置太短，纤维蛋白没有析出，所以会变成胶冻状，只要放置一定时间后离心或者直接用促凝管离心，就不会出现这种情况了。