水卫生生物学

第一节水中的病原微生物基础知识：水体中的微生物主要来源于土壤、以及人类和动物的排泄物。其中，能够引起疾病的微生物称之为病原微生物。与水有关的微生物感染疾病主要有：霍乱、伤寒、沙眼、血吸虫病、军团病等。目前，80%的疾病都与水有关。水中常见的病原细菌：1致病性大肠杆菌2伤寒杆菌（沙门氏菌）3痢疾杆菌（志贺氏菌）4霍乱弧菌5军团菌6粪链球菌第一节水中的病原微生物水中常见的病毒：1肠道病毒（脊髓灰质炎病毒等）2肝炎病毒3轮状病毒4冠状病毒（SARS）第一节水中的病原微生物水中常见的病原性原生动物及寄生虫：1隐孢子虫和贾第鞭毛虫（两虫）2溶组织内阿米巴（痢疾阿米巴）3蛔虫4血吸虫第一节水中的病原微生物第二节水质生物学指标水质生物学指标用来评价水中的病原性微生物，预防流行性传染病爆发。对每种病原微生物进行检测是不切实际的。研究发现，水中病原微生物主要来源于人畜粪便。因此检查人畜粪便中通常存在的微生物，作为评价水受粪便污染的程度。这样的微生物称作指示微生物。第二节水质生物学指标几种常用的指示微生物病原细菌指示微生物：细菌总数;大肠菌群；粪大肠菌群;粪链球菌;梭菌/产气荚膜梭菌病毒指示微生物：SC噬菌体；F-RNA噬菌体；脆弱拟杆菌噬菌体;脊髓灰质炎病毒病原性原生动物：隐孢子虫、贾第鞭毛虫为何选择大肠菌群作为病原细菌指示微生物？（1）大肠菌群的生理习性与大部分病原菌相似，并且外界存活时间基本一致；（2）大肠菌群在人粪便中数量很大。（3）检验技术不复杂。大肠菌群第二节水质生物学指标大肠菌群的形态和生理特性1种类（1）大肠埃希氏杆菌（最为常见）Escherichiacoli；E.coli（2）产气杆菌（3）枸橼酸盐杆菌（4）副大肠杆菌第二节水质生物学指标大肠菌群大肠埃希氏杆菌特性兼性好氧革兰氏阴性菌，无芽孢，两端钝圆短杆菌。大小约0.5～0.8×2.0～3.0微米。生长温度10～46摄氏度，适宜温度37摄氏度，生长pH范围4.5～9.0，适宜的pH为中性。能分解葡萄糖、甘露醇、乳糖等多种碳水化合物，并产酸产气，所产生的CO2/H2为1:1。远藤氏培养基上菌落呈红色、带金属光泽，直径约2～3mm。第二节水质生物学指标大肠菌群贾第虫病蓝氏贾第鞭毛虫所致贾第虫滋养体虫群隔离免疫缺陷及免疫功能低下者易发生严重感染症状：腹泻96%、上腹痛61%、疲乏72%、体重减轻62%、恶心60%、稀便57%、腹胀42%、发热17%⑴急性患者：暴发性腹泻、水样便、恶臭、腹痛等。⑶慢性患者：多见，周期性稀便，很臭，反复发作。儿童较易感染，可出现脂肪痢。⑵亚急性患者：间歇性稀便，腹痛等。隐孢子虫病隐孢子虫所致⒉寄生部位：人及哺乳动物的肠上皮细胞及呼吸道上皮细胞⒊感染途径：经口误食被污染的食物或饮水⒈感染期：卵囊4.临床表现⑴免疫功能缺陷型隐孢子虫病：症状多而重，持续时间长，直至死亡。多有严重腹泻与吸收不良。霍乱样水泻最常见，数十次/日。有脱水及酸中毒，体重，恶病质。⑵免疫功能正常型隐孢子虫病：自限性腹泻，5~10次/日，可自愈。大便量多，水样/粘液稀便，无血便。可伴有上腹部疼痛、恶心、呕吐、腹胀、厌食、体重减轻等。少数可发热，头疼，婴幼儿可出现脱水及酸中毒。第三节水的卫生学检验方法主要内容：1细菌总数的测定2大肠菌群测定1）发酵法2）滤膜法3）病毒监测方法（蚀斑检验法）4）噬菌体监测方法（ISO10705）5）原生动物的监测方法（USEPA1623）第三节水的卫生学检验方法细菌总数的测定将定量的水样接种于营养琼脂培养基中，在37℃温度下培养24hr后，计数生长的细菌菌落数，然后根据接种的水样数量就可算出每毫升水中的细菌数。1ml1ml1ml1ml1ml1ml原水9毫升无菌水1ml1ml1mlCK对照先接种稀释水样再倾注培养基10-210-337℃培养大肠菌群的测定：发酵法第三节水的卫生学检验方法水样接种初步发酵产酸产气大肠菌群厌氧芽孢杆菌好氧芽孢杆菌大肠菌群好氧芽孢杆菌阳性管大肠菌群革兰氏阴性无芽孢革兰氏染色产生典型菌落鉴别培养基平板分离产酸产气复发酵三步：（1）初步发酵试验；（2）平板分离；（3）复发酵试验大肠菌群的测定：发酵法说明：（1）采用含有乳糖的培养基，则分析结果不包括副大肠杆菌；采用葡萄藤或甘露醇培养基，则分析结果包括副大肠杆菌.因为副大肠杆菌分解乳糖缓慢或不能分解（2）我国一般采用乳糖培养基第三节水的卫生学检验方法方法：将水样置于乳糖液体培养基中，37℃培养24h，观察产酸和产气情况。如产酸产气可初步确定有大肠菌群。产酸：溴甲酚紫作指示剂，培养基由紫色变为黄色。产气：杜氏小管顶端有气泡。杜氏小管产酸产气的菌有:1大肠菌群;2厌氧芽孢杆菌;3好氧芽孢杆菌第三节水的卫生学检验方法发酵法测定大肠菌群步骤：1初步发酵试验（1）将第一步产酸产气的菌落划线接种在远藤氏培养基或伊红美兰培养基表面，37℃培养24h，目的阻止厌氧芽孢杆菌生长。（2）革兰氏染色取有典型菌落特征的单个菌落进行革兰氏染色。大肠菌群和好氧芽孢杆菌生长。同时大肠菌群有特征性菌落出现。发酵法测定大肠菌群步骤：2平板分离第三节水的卫生学检验方法大肠菌群：革兰氏阴性菌、不生芽孢、好氧。好氧芽孢杆菌：革兰氏阳性菌、生芽孢、好氧。将可疑菌落（革兰氏阴性、大肠杆菌特征菌落）移接于乳糖液体培养基中，37℃培养24h。产酸产气者确定为有大肠菌群存在。最后根据有大肠菌群的阳性管数查表或通过公式计算。发酵法测定大肠菌群步骤：3复发酵试验第三节水的卫生学检验方法1、抽滤法过滤定量水样，将细菌截留在滤膜上。2、将滤膜中没有细菌的一面贴在品红硫酸钠培养基或伊红美蓝固体培养基上，以培育和获得单个菌落。3、将滤膜上符合大肠菌群菌落特征的菌落进行革兰氏染色、镜检。4、将革兰氏染色阴性无芽孢杆菌的菌落接种到含糖培养基中，根据产气与否来判断有无大肠菌群存在、5、根据滤膜上大肠菌落数和水样体积，计算结果。滤膜法测定大肠菌群步骤：第三节水的卫生学检验方法病毒的检测方法•蚀斑检验法生活饮用水的卫生学标准（GB5749-2006）第三节水质生物学指标常规指标:总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌群(MPN/100ml或CFU/100ml)不得检出细菌总数(CFU/100ml)100非常规指标:贾第鞭毛虫(个/10L)1隐孢子虫(个/10L)1新增方法介绍•耐热大肠菌群和大肠埃希氏菌••耐热大肠菌群定义：用提高其培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开，在44.5℃仍能生长的大肠菌群••WHO第二版：建议将粪大肠菌群改为耐热大肠菌群••大肠埃希氏菌：WHO第三版提出其为粪便污染最合适的指示菌••大肠埃希氏菌定义：大肠菌群检测试验为阳性，能产生β-葡萄糖醛酸酶分解MUG，菌落能够在366nm紫外光下产生蓝色荧光的细菌下产生蓝色荧光的细菌新增方法介绍•藻类污染-藻毒素•􀁺限值：微囊藻毒素-LR1ug/L•􀁺微囊藻毒素的检测方法•􀁺生物测试•􀁺磷酸酶抑制法•􀁺ELISA•􀁺HPLC•􀁺LC-MS•􀁺饮用水源水中蓝藻细胞限值•