8实验八维生素B1片含量测定的方法验证

药物分析实验实验八维生素B1片含量测定的方法验证设计性实验实验原理•维生素B1又称盐酸硫胺（thiaminehydrochloride），化学名称为氯化4-甲基-3[(2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基)-甲基]-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐NNH2CN+CH2CH2OHCH3NH2H3CCl-HCl性质•溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶•硫色素反应：•紫外吸收特性：Amax=246nm•与生物碱沉淀试剂反应•氯化物特性：特征性鉴别含量测定氯化物检查原理•特征性鉴别——硫色素反应维生素B1在碱液中可被铁氰化钾氧化生成硫色素，色素转溶于正丁醇(或异丁醇、异戊醇)中，显现于酸中消失的蓝色荧光。（见刘文英主编《药物分析》第六版，P258）•含量测定维生素B1有紫外吸收，Amax=246nm，1%1421cmE实验方法1.鉴别反应取本品约5mg，加氢氧化钠试液2.5ml使其溶解，加铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇2min，放置使成两液层，上层醇液即显强烈的蓝色荧光，加酸使成酸性荧光即消失，再加碱使成碱性，则荧光复现。2.含量测定精密称取片粉适量，相当于维生素B125mg，置100ml量瓶中→加盐酸溶液（9→1000）约70ml，摇匀15分钟使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀→干燥滤纸过滤→精密量取续滤液5.0ml，置100ml量瓶中，共2份，盐酸溶液（9→1000）定容至刻度，摇匀→测A246，用吸光系数计算浓度。如何计算出所需要的量？稀释倍数？实验内容与要求•鉴别试验•吸收波长选择•精密度试验：用同一份样品溶液测定6次，计算RSD%•重复性试验：引用其他组同学数据（称样量，吸光度）计算标示量%，计算RSD%•稳定性试验：考察样品溶液30min内的稳定性，计算RSD%•加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计加样回收率试验•含量测定：根据测定结果计算含量，标示量%。如何引用？线性关系和范围分析方法的验证1精密度试验2重现性试验3加样回收试验4稳定性试验5线性与范围•目的•范围：达到一定精密度、准确度和线性、测定方法适用的高低限浓度或量的区间•线性：测试结果与试样中被测物的浓度或量直接呈正比关系的程度•要求•至少5份系列浓度的对照品溶液，高、低浓度之间要有明显差距，最好能有一定的比例关系。•线性相关系数符合规定，如UV-Vis法，r0.99；HPLC法，r0.999•列出回归方程、相关系数和线性图线性关系考察(示例）序号12345浓度（mg/ml）0.012500.025000.037500.050000.06250测定值0.2360.3360.4360.5360.636y=8x+0.136R2=100.10.20.30.40.50.60.700.010.020.030.040.050.060.07C(mg/ml)A246精密度试验•目的•检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可信程度•要求•用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶液，同浓度至少平行操作6份，浓度与信号值要在线性范围内•RSD2.0%……仪器分析精密度试验（示例）实验序号信号值平均值RSD10.5120.5100.2%(2.0%)20.50830.51140.50950.51060.509重现性试验•目的•考察样品溶液制备方法的可靠程度•要求•同批样品按相同方法制备样品溶液，至少6份,浓度与信号值均要在线性范围内•RSD2.0%……仪器分析重现性试验(示例)试验序号称样量（g）测定值（mg）含量（mg/g）平均含量（mg/g）RSD（%）10.166622.04132.29134.530.3%2.0%20.166724.82148.8930.166921.90131.2240.174223.54135.1350.166720.86125.136………稳定性试验•目的：•考察样品溶液制备后多少时间内稳定•要求•要有一定的时间间隔，如：在0、15、30、45、60min时间点分别测定样品的A246；在0、1、2、4、8、12h分别测定样品的峰面积。•RSD2.0%，则说明样品溶液在多少时间内稳定；•RSD2.0%，则需要重新选取时间点进行计算，直到RSD2.0%，否则要尽快测定•同批、同法序号时间(min)信号值平均信号值RSD（%）RSD（%）100.5050.507(2.0%)(2.0%)2150.5073300.5094450.5135600.5256900.54871200.567稳定性试验(示例)加样回收率试验•目的•考察准确度，即用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度•要求•设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别制备三份供试品溶液进行测试，计算回收率•RSD2.0%加样回收试验序号称样量（g）待测组分含量（mg）对照品加入量（mg）测得量（mg）回收率（%）平均加样回收率（%）RSD（%）10.1665.2820.250015.027.2100.130.251240.250953.0450.250015.029.898.660.250070.250442.8480.250015.033.1100.090.2510取含量测定时一半的称样量，0.5g/298~102%撰写方法学验证论文•线性与范围:设计对照品溶液的浓度•精密度试验•稳定性试验根据实验测定数值进行计算•重复性试验•加样回收试验:•设计称样量、对照品加入量•含量测定：根据实验测定数值进行计算