D-dimer测定试剂盒标准操作规程

标题：NycoCardD-dimer测定试剂盒标准操作规程版本号：1修订号：0文件编号：1402-yan-06-LJ-发布日期：2006年03月10日生效日期：2006年03月10日发布部门：检验科质量管理小组编制人：审核人：批准人（签章）：D-二聚体标准操作规程（NycoCardD-dimer测定试剂盒）1.检测目的：本试剂盒用于检测血浆中纤维蛋白的降解产物D-二聚体（D-dimer）的浓度。可作为血栓性疾病诊治过程的重要辅助工具。2.原理：基于免疫过滤试验原理，将血浆加入检测卡孔内，样品被吸入，D-dimer分子被吸附到包被D-dimer单克隆抗体的膜中，然后加入D-dimer单克隆抗体与胶体金偶联物溶液，膜中D-dimer将与抗体金偶联物发生结合反应，形成三明治嵌合体，过剩偶联物用洗涤液洗去。样本中存在病理水平的D-dimer，检测膜显现微红色，颜色的深浅与样本中D-dimer的浓度成正比。色泽强度可用比色卡进行对比评价，也可用读数仪（NycoCard®READER）进行读数。3.试剂盒：NycoCardD-dimer测定试剂盒3.1试剂盒的组成：试剂盒的规格为48人份/盒3.11检测卡包装在铝箔袋内，每卡有6个检测孔，孔内的渗水膜包被D-dimer单克隆抗体。卡已经过处理，允许使用记号笔在孔下的空白处对病人/标本的属性进行标记。3.12偶联抗体反应液R11×3ml，黑盖棕色瓶，为D-dimer单克隆抗体与胶体金偶联物溶液。3.13洗涤液R21×12ml，白色瓶盖，内容PH8.0的缓冲液，主要成分为小牛血清白蛋白及清洗剂。3.14阳性质控品1×1ml，白色瓶盖，主要为纤维蛋白的降解产物与小牛血清白蛋白的缓冲液及稳定剂，参考值参见瓶签所示范围。3.15判读比色卡1个，塑料比色卡，五个颜色逐深的孔分别代表0.3-8mg/L的5个水平D-dimer的浓度，用于判读检测结果。3.16塑料袋2只，一只存放开启的未使用的检测卡，一只用于存放使用后的检测卡。3.2试剂盒的储存条件：在2-8℃贮存，失效期见试剂盒上的标签。避免储存温度超过25℃、光线直射和潮湿。试剂盒室温下储存可达一周。3.21检测卡检测卡在2-8℃保存在未开启的铝箔袋内或开启后放置在盒中的塑料袋内，可稳定至标签所示的效期。使用过的检测卡放置在盒中的塑料袋，在2-8℃保存，检测结果可稳定四周。3.22试剂及阳性质控品未开启的试剂（2-8℃）可稳定至失效期。开启后的试剂（2-8℃）可稳定3个月。使用后，应拧紧瓶盖。4.标本采集4.1标本名称及类型4.11标本名称：血液4.12标本类型：柠檬酸抗凝的无血小板血浆4.13标本量：静脉取血2~3ml4.2标本采集方法：住院病人卧位真空采血管采血，门诊与急诊病人坐位采血，静脉取血2~3ml，加入抗凝剂（0.11或0.11M柠檬酸钠），比例为9：1（血：抗凝剂）。然后最好立即以2000g离心力离心15分钟分离血浆，最迟须在6小时内分离血浆。4.3标本送检间隔最长时间及标本采集后保存条件：标本采集后最好立即送检，送检间隔最长时间2h。血浆标本须在24小时内进行测定。样本可于-20℃保存4周内再测定，冰冻量在1.0ml内，复溶条件为37℃水浴15分钟。5.实验条件：温度18℃-30℃，最佳23℃，空调冷却能力必须约为172kcal/小时（最大）。相对湿度50％-85％。电压220V±10％清洁度执行临床实验室安全准则NCCLS同类标准GP17—A避免强光照射及辐射源辐射。6.操作步骤：在检测卡的反应孔下标记患者或质控品的标记，操作步骤如下：6.1预清洗：吸取50ul洗涤液R2加入反应孔内，使洗涤液浸润反应卡，注意勿使加样器触及反应孔膜。6.2加样：向反应孔加入50ul未稀释的柠檬酸盐抗凝的无血小板血浆标本或质控品，样品应在45秒内渗入卡内。6.3加偶联液：向反应孔加入50ul偶联液R1，加入前须将偶联物瓶颠倒两次使其混匀。偶联液应在45秒内渗入卡内。6.4用加样器吸取50ul洗涤液R2加入反应孔中。并保持反应孔周围清洁，可用吸水纸吸拭。7.结果判读：检测结果须在洗涤液完全吸入检测卡之后2分钟内立即判读。7.1使用NycoCard®-Reader小型读数仪：请参阅读数仪操作说明，测量范围：0.1-20.0mg/L。7.2使用比色卡：将比色窗置于反应孔上对比相近颜色而获得结果，五个浓度颜色相当于如下血浆D-dimer浓度：①3mg/L②1mg/L③2mg/L④4mg/L⑤8mg/L报告结果可按最接近样品颜色的比色窗值报告。若样品颜色正介于二色窗之间，也可按二浓度的平均值报告。检测结果以D-dimer的浓度mg/L表示。8.正常参考范围：正常人血浆D-dimer浓度低于0.3mg/L；Cut-off值为0.3mg/L。9.质量控制：试剂盒内含一支D-dimer阳性定值范围的质控物，用于试剂稳定性及试验的质量控制。阳性定值质控接近2mg/L。每日对患者标本检测前须先对批内阳性定值质控进行检测，如质控物检测结果在控（接近2mg/L），可对患者标本进行检测。如质控物检测结果失控（偏离2mg/L），须按如下步骤查找原因：①在同一检测卡上重新对质控物进行检测，以排除人为的偶然误差，如质控物检测结果在控（接近2mg/L），可对患者标本进行检测；如质控物检测结果失控（偏离2mg/L），进行下一步。②新开启一张检测卡对质控物进行检测，如质控物检测结果在控（接近2mg/L），可在该检测卡上对患者标本进行检测；如质控物检测结果失控（偏离2mg/L），进行下一步。③与有关专家或生产商联系，考虑更换试剂盒。10.注意事项：①本试验仅限体外诊断使用。②不同批号的试剂不能混用。③试剂和样本检测前必须平衡至室温20-25℃（敞口容器约30分钟）。④使用前应混匀试剂。⑤试剂中含有0.1％叠氮化钠作为稳定剂系毒性物质，操作时应加以小心。⑥阳性质控品来自HbsAg，HCV-Ab，HIV-Ab阴性的人血液蛋白；尽管如此，应同病人血标本一样视为传染性材料来处理。⑦操作过程应连续，不可间断。⑧如果血浆在45秒内未渗透到孔内，可产生假的实验结果。要获得正确的检测结果，应在重新检测前再次离心15分钟，离心力为2000g，重新处理后的标本，渗透时间小于45秒为合格。11.临床意义：血浆中D-dimer浓度的升高表明血管网中有过量的纤维蛋白形成。通过激活纤溶系统，纤维蛋白可被纤溶酶降解形成各种可溶性的降解产物片断，其中就有D-二聚体。纤维蛋白降解产物D-二聚体的水平升高，表明体内存在持续的纤维蛋白降解过程。因此，纤维蛋白降解产物D-二聚体是诊断深静脉栓塞（DVT），肺栓塞（PE），弥散性血管内凝血（DIC）的关键试验指标。同时，由于非交联的纤维蛋白（如蛇毒类凝血酶作用时）和纤维蛋白原在纤溶酶的降解作用下所产生的降解物为非交联的碎片E、D、X、Y等，而不形成交联的D-二聚体，因此，D-二聚体的检测又可以用于原发性纤溶与继发性纤溶的鉴别。D-dimer浓度升高出现在继发性纤溶中。12.方法学性能：特异性：本试验采用D-dimer新抗原结构的单克隆抗体；血浆成分如纤维蛋白原、纤维蛋白单体等不会在检测中与D-dimer发生交叉反应，因而，NycoCard®D-dimer试剂对纤维蛋白降解产物D-dimer具有专一性。标准化：目前尚无国际通用标准品，NycoCard®D-dimer生产时使用AsserachromáD-dimer检测的体外降解浓度样本进行校准。检测范围：使用NycoCard®READER检测范围在0.1-20.0mg/L，可精确到0.1mg/L。精确度：本试剂的精密度以变异系数表示为10％-15％。抗干扰性：血浆中高值胆红素及血红蛋白的存在不影响本试剂盒的结果；血浆标本中含有血细胞，或高脂血浆，或高粘血浆等对本试验有干扰，由于这些将影响标本渗透流速，可及时发现并可通过过滤或再离心排除。