通则2351-黄曲霉毒素测定法-中华人民共和国药典2015年版四部

2351黄曲霉毒素测定法第一法本法系用高效液相色谱法(通则0512)测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2总量计)，除另有规定外，按下列方法测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以%甲醇-乙腈-水(40：18：42)为流动相；采用柱后衍生法检测，①碘衍生法：衍生溶液为0.05%的碘溶液(取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀释至1000ml制成)，衍生化泵流速每分钟0.3ml，衍生化温度70℃；②光化学衍生法：光化学衍生器(254nm)；以荧光检测器检测，激发波长λex=360nm(或365nm)，发射波长λex=450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。混合对照品溶液的制备精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液(黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2标示浓度分别为1.0ug/ml、0.3ug/ml、1.0ug/ml、0.3ug/ml)0.5ml,置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为贮备溶液。精密量取贮备溶液lml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。供试品溶液的制备取供试品粉末约15g(过二号筛)，精密称定，置于均质瓶中，加人氯化钠3g，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟(搅拌速度大于11000转/分钟)，离心5分钟(离心速度2500转/分钟)，精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45um)滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲合柱，流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取上述混合对照品溶液5ul、l0ul、15ul、20ul、25ul，注人液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液20〜25ul，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的量，计算，即得。第二法本法系用高效液相色谱-串联质谱法测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素(以黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2总量计)，除另有规定外，按下列方法测定。色谱、质谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以l0mmol/L醋酸铵溶液为流动相A,以甲醇为流动相B；柱温25℃；流速每分钟0.3ml；按下表中的规定进行梯度洗脱。时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)0~4.565→1535→854.5~615→085→1006~6.50→65100→356.5~106535以三重四极杆串联质谱仪检测；电喷雾离子源(ESI)，采集模式为正离子模式；各化合物监测离子对和碰撞电压(CE)见下表。系列混合对照品溶液的制备精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液(黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的标示浓度分别为1.0ug/ml、0.3ug/ml、1.0ug/ml、0.3ug/ml)适量，用70%甲醇稀释成含黄曲霉毒素B1、G2浓度为0.04~3ng/m，含黄曲霉毒素B1、G1浓度为0.12~l0ng/ml的系列对照品溶液，即得(必要时可根据样品实际情况，制备系列基质对照品溶液)。供试品溶液的制备同第一法。测定法精密吸取上述系列对照品溶液各5ul，注人高效液相色谱-质谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样浓度为横坐标，绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液5ul，注入髙效液相色谱-串联质谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的浓度，计算，即得。【附注】(1)本实验应有相应的安全、防护措施，并不得污染环境。(2)残留有黄曲霉毒素的废液或废渣的玻璃器皿，应置于专用贮存容器(装有10%次氯酸钠溶液)内，浸泡24小时以上，再用清水将玻璃器皿冲洗干净。(3)当测定结果超出限度时，采用第二法进行确认。