红细胞比容、血红蛋白测定

红细胞比容测定血红蛋白测定一、红细胞比容测定目的掌握红细胞比容的测定方法。原理将定量的抗凝血灌注于带刻度玻璃管中，定时、定速离心后,有形成分和血浆分离，上层呈淡黄色的液体是血浆，中间很薄一层为灰白色，即白细胞和血小板（或栓细胞），下层为暗红色的红细胞，彼此压紧而不改变细胞的正常形态。根据红细胞柱及全血高度，可计算出红细胞在全血中的容积比值，即为红细胞比容（压积）。离心后血液分层layerafterbloodcentrifugated方法与步骤改进的温氏分血管比容法•采血（加入抗凝剂肝素钠，抗凝血）•用移液器取1ml抗凝血，放入EP管中。•离心：将分血管以3000r/min离心30min，取出分血管，读取红细胞柱的高度。[注意事项]•选择抗凝剂必须考虑到不能使红细胞变形、溶解。本实验采用肝素钠抗凝。•血液与抗凝剂混合、注血时应避免动作剧烈引起红细胞破裂。•温氏分血管内壁要充分干燥。血液进入毛细管内的刻度读数要精确，血柱中不得有气泡。二、血红蛋白的测定•目的掌握用比色法测定动物的血红蛋白的含量。•原理血红蛋白的颜色常与氧的结合量多少有关。但当用一定的氧化剂将其氧化时，可使其转变为稳定、棕色的高铁血红蛋白，而且颜色与血红蛋白（或高铁血红蛋白）的浓度成正比。可与标准色进行对比，求出血红蛋白的浓度，即每升血液中含血红蛋白克数（g·L-1）。方法与步骤沙里氏血红蛋白计测定•沙里氏比色法是用HCl使血红蛋白酸化形成棕色的高铁血红蛋白，然后和标准比色板进行比色。•沙里血红蛋白计主要具有标准褐色玻璃比色箱和1只方形刻度测定管组成。比色管两侧通常有两行刻度；一侧为血红蛋白量的绝对值，以g·dl-1(每100ml血液中所含血红蛋白的克数)表示，从2～22g；另一侧为血红蛋白相对值，以%（即相当于正常平均值的百分数）来表示，从10%～160%。为避免所使用的平均值不一致，因此一般采用绝对值来表示。具体测定方法如下：①用滴管加5～6滴，0.1mol·L-1HCl到刻度管内,(约加到管下方刻度”2”或多或10%处)。②用微量采血管吸血至20μl，仔细揩去吸管外的血液。③将吸血管中的血液轻轻吹到比色管的底部，再吸上清液洗吸管3次。操作时勿产生气泡,以免影响比色。用细玻棒轻轻搅动，使血液与盐酸充分混合，静置10min，使管内的盐酸和血红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血红蛋白。④把比色管插入标准比色箱两色柱中央的空格中。⑤使无刻度的两面位于空格的前后方向，便于透光和比色。用滴管向比色管内逐滴加入蒸馏水，并不断搅匀，边滴，边观察、边对着自然光进行比色，直到溶液的颜色与标准比色板的颜色一致为止。⑥读出管内液体面所在的克数，即是每100ml血中所含的血红蛋白的克数。比色前，应将玻棒抽出来，其上面的液体应沥干净，读数应以溶液凹面最低处相一致的刻度为准。换算成每升血液中含血红蛋白克数（g·L-1）。【注意事项】•血液要准确吸取20μl，若有气泡或血液被吸入采血管的乳胶头中都应将吸管洗涤干净，重新吸血。洗涤方法是：先用清水将血迹洗去，然后再依次吸取蒸馏水、95%酒精、乙醚洗涤采血管1～2次，使采血管内干净、干燥。