茶多酚酒石酸亚铁比色法

多酚类物质的提取与含量测定一、实验原理酒石酸亚铁分光光度比色法的原理：过量的酒石酸亚铁与提取液中多酚反应生成稳定的紫褐色络合物，溶液颜色的深浅与溶液中多酚含量成正比。测定总多酚时所用的标准物则需根据样品中所含多酚的种类而定，比如测定茶叶中茶多酚含量时，儿茶酚能较好地代表茶多酚，则以儿茶酚作标准物；而测定藤茶多酚时，则以没食子酸作标准物较合适。二、实验材料、试剂与仪器材料：茶叶；仪器：水浴锅，分光光度计，三角瓶，容量瓶，吸管等；试剂：（1）酒石酸亚铁溶液：称取1.00g硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）和5.00g酒石酸钾钠(C4H4O6NaK·4H2O）,混合后加蒸馏水溶解,定容到1000mL；（2）pH7.5磷酸盐缓冲液：称取60.20gNa2HPO4·12H2O和5.00gNaH2PO4·12H2O，混合后加蒸馏水溶解,定容到1000mL。三、操作步骤（一）标准曲线的制作或茶多酚含量经验值的应用#标准曲线的制作参照GB-8313-87《茶—茶多酚测定》方法。为简化操作，可用在一定操作条件下“吸光度值为1.00时，供试液中茶多酚的浓度为7.826mg/mL”这一经验值，直接由待测液的吸光度值计算样品中茶多酚的含量。（二）样品总多酚的提取准确称取1.0g磨碎并混匀的茶叶样品于200mL三角瓶中，加入80mL沸水，并在沸水浴中保温浸提30min，然后过滤、洗涤滤渣，将滤液合并、冷却、加蒸馏水定容至100mL。（二）样品多酚提取液的多酚总量测定吸取1mL样品多酚提取液于25mL容量瓶中，加入4mL蒸馏水和5mL酒石酸亚铁溶液，摇匀，再用pH7.5磷酸盐缓冲液稀释至刻度，混匀。同是以蒸馏水代替样品提取液，加入与样品测定同样的试剂作空白，用0.5cm比色皿在540nm波长处测定吸光度。4.3测定步骤4.3.1试液的制备按GB8305-87《茶水浸出物测定》中3.4.1的规定,制备试液。4.3.2测定准确吸取上述(4.3.1)试液1mL,注入25mL的容量瓶中,加水4mL和酒石酸亚铁溶液(3.1)5mL,充分混合,再加pH7.5的缓冲液(3.2)至刻度,用10mm比色杯,在波长540nm处,以试剂空白溶液作参比,测定吸光度(A)。四、计算7.826—吸光度为1.00时,茶多酚含量的经验值(mg/mL)。#如果制作标准曲线，则样品提取液的测定与标准曲线制作步骤相同，并根据标准曲线和相应公式，求得样品中茶多酚的含量。计算方法和公式茶叶中茶多酚的含量,以干态质量百分率表示,按下式计算:A×1.957×2L1茶多酚(％)＝——————×—————×100100L2×M×m式中:L1--试液的总量,mL;L2--测定时的用液量,mL;M--试样的质量,g;m--试样干物质含量百分率,％；A--试样的吸光度;1.957--用10mm比色杯,当吸光度等于0.50时,每毫升茶汤中含茶多酚相当于1.957mg。如果符合重复性(5.2)的要求,则取两次测定的算术平均值作为结果。5.2重复性同一样品的两次测定值之差,每100g试样不得超过0.5g。