第九章 细菌类疫苗

1第九章细菌类疫苗第一节概述温州医学院药学院生物制药系林绍强Dr.Prof.2011.09.272细菌类疫苗定义：用细菌、支原体、螺旋体或其衍生物制成，进入人体后使机体产生抵抗相应细菌能力的生物制品——细菌类疫苗种类：（1）减毒活疫苗（2）灭活疫苗（3）亚单位疫苗或成分疫苗3附表：目前用于人群的细菌性疫苗卡介苗百日咳疫苗脑膜炎球菌疫苗伤寒疫苗精制破伤风疫苗（类毒素）霍乱弧菌疫苗痢疾疫苗用法：i.d.,s.c.,d.s.,i.m.,p.o.4第二节细菌灭活疫苗灭活疫苗的生产工艺与检定1.菌种检定与制备1）菌种检定：包括培养特性、血清学特性、毒力试验、抗原性试验、免疫力试验2）菌种制备菌种启开：接种于适宜的培养基上，37±1°C一代培养；扩量转种：一代菌种的扩量接种，于37±1°C二代培养。52.生产方法（1）固体培养法（2）液体通气培养法（大规模生产用）3.细菌采集（1）固体培养法采集时逐瓶检查，污染杂菌者废弃。（2）液体培养法采集时应做纯菌试验，确定无杂菌生长。64.杀菌/脱毒终浓度不超过1%的甲醛37℃或者2~8℃处理一定时间杀菌，之后还要进行杀菌检查，接种于合适培养基培养，应无本菌生长。5.原液检定及保存（1）浓度测定（2）镜检（3）凝集试验（4）无菌试验（5）免疫力试验（6）保存76.配合稀释及分装按要求稀释，或与其他疫苗成分按比例混合后加入吸附剂。7.成品检定按规程进行8常用灭活细菌疫苗1.霍乱疫苗（1）霍乱简介由霍乱弧菌引起的烈性肠道传染病，霍乱弧菌在小肠分泌霍乱毒素（choleratoxin），引起腹泻及其他症状。（2）抗原鞭毛抗原：不耐热，无分型意义，有免疫保护作用。菌体抗原：主要成分为LPS，耐热，根据其抗原决定基可分为200多钟血清型，O1和O139为流行血清型。9（3）目前最常用的霍乱疫苗口服霍乱灭活全菌体+重组霍乱毒素B亚单位重组霍乱毒素B亚单位（sBS）具有黏膜免疫佐剂特性，该疫苗安全有效且无明显不良反应，保护力持久。102.伤寒疫苗（1）概述由伤寒沙门杆菌引起的急性全身感染，患者出现高热，胃肠炎，败血症等。含有三类抗原:LPS，荚膜多糖，鞭毛抗原，耐药性比较严重。（2）生产工艺与检定全菌体死疫苗分三种，按杀菌剂不同可分为丙酮灭活苗，加温加酚灭活苗(收取的菌液经56度加温灭活1小时后，再加入酚（最终含量为0.5%)作为防腐剂），甲醛灭活苗（收取菌液加入甲醛（最终含量为1%，置于36度24小时灭活后进一步加工。。11①菌株我国现用两个菌株生产疫苗：国际通用Ty2株国内代表株②培养基及培养方法采用马丁琼脂、肉汤琼脂或其他经批准的培养基，主要采用固体培养法，也可进行发酵生产接种后35~37℃培养18~24h。12③成品检定鉴别试验、外观、化学检定、无菌试验、异常毒性试验、菌形及纯度检查④疫苗规格及有效期每安瓿瓶5ml，每人用剂量含伤寒菌6×107~3×108，2~8℃避光保存和运输，有效期1.5年。13（3）伤寒Vi多糖疫苗早期乙酸处理Vi多糖，抗原性明显降低，经溴化-16-烷基-3-甲基氨处理Vi多糖，得到的非变性多糖可显示较好的免疫原性，但是对2岁以下儿童无效，且多糖是T淋巴细胞非依赖性抗原，不具有加强免疫记忆的作用，蛋白质-Vi多糖结合疫苗正在研制当中。14（4）伤寒Ty21a口服减毒活疫苗德国学者将野生型菌株Ty2经化学突变剂亚硝基胍处理而获得的突变株，在提供较高免疫保力的同时具有很高的安全性。153.百日咳疫苗1）概述由百日咳杆菌引起的急性呼吸道传染病，主要侵犯婴幼儿，全病程较长，可持续几个月，故名百日咳。百日咳菌可分四种相变：Ⅰ相菌毒力最强，有免疫原性；Ⅳ相毒力消失，无免疫原性；Ⅱ、Ⅲ相菌介于Ⅰ、Ⅳ之间。172）百日咳死疫苗的生产工艺与检定①菌种生产用菌种采用百日咳Ⅰ相含1型、2型、和3型凝集原的菌株。②培养方法固体培养采用半综合碳琼脂培养基，也可发酵生产。18③原液检定浓度测定、镜检、血清学试验、无菌试验、特异性毒性试验、效价测定。④原液保存2~8℃，有效期3年⑤配合稀释及分装按原液中具有1、2和3型菌株的配比混合，也可制成百白破三联疫苗（百日咳、白喉、破伤风）19第三节细菌减毒活疫苗一、生产工艺与检定2021二、常用细菌减毒活疫苗炭疽疫苗结核疫苗鼠疫疫苗221、炭疽疫苗1）概述：定义：由炭疽杆菌引起的人畜共患的一种急性传染病。特点：潜伏期3-5d。临床表现为皮肤、肺部、脑膜和肠道等处的急性感染。临床分型：①体表感染型②消化道感染型③呼吸道感染型23皮肤型炭疽242）炭疽菌的病原学①革兰氏阳性，个体最大的杆菌之一，呈竹节状，无鞭毛，在机体内或特殊培养条件下能形成荚膜。②营养要求不严，需氧，最适温度34~37℃炭疽杆菌的营养细胞抵抗力不强，芽孢抵抗力强，过氧乙酸、高锰酸钾、和甲醛对芽孢的杀灭力较强。25③抗原菌体抗原：多糖组分，耐热性强。荚膜抗原：由质粒决定，可以抵抗细胞的吞噬作用，引起感染，对动物没有免疫保护力，不能作为疫苗。毒素抗原：水肿因子（EF）；致死因子（LF）；保护性抗原（PA）；单独组分无毒性，成对结合才能获得毒素活性。263）炭疽疫苗（1）目前人用炭疽疫苗①减毒活疫苗②铝胶培养上清液疫苗（2）炭疽疫苗的生产工艺与检定①生产用菌株人、兽用的炭疽活疫苗生产均采用无荚膜具毒素（cap-tox+）菌株，我国采用的的A16R菌种均由药品生物制品检定所分发。27②培养及收获生产用培养基采用牛肉汁琼脂或其他批准培养基③半成品配置及分装用灭菌的50%甘油将原液稀释成每ml含菌数4×109④成品检定鉴别试验、外观、纯菌试验、特异性毒性试验活菌数测定、浓度测定、效力测定28⑤疫苗规格及有效期安瓿瓶装，10人份含菌2×109，2~8℃避光保存运输，有效期两年。（3）目前人用炭疽疫苗的缺点①毒力不稳定②采用划痕接种，免疫效果不均一③副反应较大④免疫保护力持续时间比较短292、结核疫苗病原菌为结核杆菌，能引起人畜共患结核病（1）流行概况全世界约1/3人口感染；每年约1600万人患病，其中300多万人死于结核病。中国治疗难题：①发现率低；②无法接受正规治疗或没钱治疗；③耐药性30（2）传染与传播方式主要由呼吸道传染，少数由消化道和皮肤粘膜的损伤处侵入。传播方式：①飞沫传染②痰液传染③食物传染④接触传染31（3）结核杆菌的潜伏和复燃结核杆菌类脂质等成分能对抗溶酶体中酶的破坏作用，使细菌在巨噬细胞内繁殖，导致巨噬细胞裂解死亡，病状扩散至邻近淋巴结，形成原发感染灶，当机体抗感染力较强时，淋巴结病灶逐渐纤维化和钙化，此时病灶内的结核杆菌处于休眠期，并潜伏下来，几年或十几年后，结合杆菌可以重新复燃，引起成年人肺结核。32（4）结合杆菌抗药性伴随着结核病回升的另外一个问题是抗药性的产生，多重抗药性的发生率也越来越高，研制和开发有效的结合新疫苗势在必行。332）结核杆菌的病原学①革兰氏阳性，含分枝酸，具有抗酸性，胞壁含大量脂质，有较强的抵抗力②灭菌方法③具有免疫佐剂活性343）结核疫苗——卡介苗的生产工艺与检定卡介苗（BCG）是牛型结合杆菌经培养后，收集菌体，加入稳定剂冻干后制成的，用于预防结核病①菌种卡介菌D2PB302菌株②培养和收集生产用培养基采用苏通马铃薯培养基、胆汁马铃薯培样基或液体苏通培养基，搜集菌膜压干，低温研磨，加入稳定剂，制成原液。35③半成品配置及冻干用特定的保护剂稀释成半成品，无菌分装到安瓿瓶内④成品检定鉴别试验、外观、溶解时间、水分、纯菌试验、无有毒分枝杆菌试验、活菌计数、效力测定⑤疫苗规格及有效期10人份含卡介菌0.4~0.6mg，2~8℃避光保存运输，有效期一年。36（4）新型结核疫苗的研究方向①以BCG为载体的基因工程结核疫苗②营养缺陷型结核减毒活疫苗（牛型/人型）③结核亚单位疫苗④结核DNA疫苗373、鼠疫疫苗（1）概述：鼠疫是由鼠疫杆菌引起的自然疫源性烈性传染病。主要以“鼠→蚤→人”为主要传播方式。38（2）鼠疫杆菌的病原学①鼠疫杆菌属肠杆菌科，耶尔森氏菌属。革兰染色阴性短小杆菌。有荚膜，无鞭毛，无芽胞。②抗原和免疫原性39（3）鼠疫疫苗的生产工艺与检定①菌种：采用鼠疫杆菌弱毒菌株EV株②培养及收获：培养基：厚金格尔琼脂培养基（pH6.8~7.2）肉眼检查及纯菌试验合格方可收获。③半成品配制及冻干细菌比浊标准调整原液浓度，加冻干保护剂，分装。④成品检定：鉴别试验、理化实验、纯菌试验、特异性毒性试验、活菌数测定、浓度测定、菌形检查、效力测定⑤疫苗规格及效期10人份含菌8×109，2~8℃避光保存运输，有效期一年。