BD-Accuri-C6-手册

流式细胞术的原理及应用Scienceishard.FCMshouldbeeasy.BDIntroductionFCMPrinciplesFCMApplicationsBDAccuriC6BDIntroductionBD是由MaxwellW.Becton和FairleighS.Dickinson于1897年在纽约创立的，总部设在新泽西州。经过一百多年的发展，BD已成为世界上最大的医疗技术及医疗设备公司之一，它以领先的技术、卓越的产品质量和诚实可信的服务赢得了全球用户及合作伙伴的广泛赞誉。FairleghS.DickinsonMaxwellW.BectonBD生物科学作为BD的一个业务组成，一直致力于为生命科学研究者和临床医生提供创新的临床和科研工具。其主要产品包括流式细胞仪；细胞图象分析系统；单克隆抗体和试剂盒；药物研发产品及临床诊断试剂等。1973年世界第一台商品化的流式细胞仪FACSIBDIntroductionBDHLA-B27KitStemCellsTCellsResearchBDIntroductionBDIntroduction流式专业论坛FCMPrinciplesFCMApplicationsBDAccuriC6流式细胞术（FlowCytometry,简称FCM）是一种快速、准确、客观的同时检测直线流动状态中单个细胞多项物理及生物学特性，加以分析定量的技术。检测速度快，分析样本量大在极短时间内可分析大量细胞，这是流式不同于其他细胞分析仪器的主要特点，可以每秒钟上万个细胞的速率进行测量。可检测的样本种类多样各种细胞（如外周血，骨髓，实体组织，悬浮或贴壁培养的细胞），微生物，人工合成微球。FlowCytometryPrinciplesFlowCytometryPrinciples液流系统液流系统将样本悬液聚焦在光源的中心处InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluid鞘液作用1.避免堵塞管道2.约束样本位于中心、提高测量精度光学系统激发光学系统–激光器（C6：488nm&640nm）–透镜和反射镜接收光学系统–滤光片电子系统LaserLaserLaserTimeVoltageTimeVoltageTimeVoltage-将模拟信号转化为数字信号-计算每个脉冲峰的高度H，宽度W和面积A-和计算机连接以传出数据散射光信号，散点图(DotPlot)流式细胞仪的工作原理荧光信号某些物质在特定波长范围内的光线照射下，可发出波长比照射光波长长的光线-即荧光。而这些受激发后能产生荧光的物质称为荧光素单参数荧光直方图双参数荧光散点图样本收集及处理流式细胞术操作流程免疫荧光染色上机检测数据分析制备单细胞悬液BDIntroductionFCMPrinciplesFCMApplicationsBDAccuriC6细胞结构•细胞大小•细胞颗粒度•细胞表面积•核浆比例•DNA含量与细胞周期•RNA含量•蛋白质含量•……细胞功能•细胞表面/胞浆/核的特异性抗原•细胞活性•细胞内/外的细胞因子•激素结合位点、细胞受体•蛋白磷酸化•pH值•钙离子浓度•细胞膜电位、线粒体膜电位•……FlowCytometryApplicationsFlowCytometryApplicationsG2MG0G1sJournalofMolecularSignaling2011,6:13细胞周期&倍体分析FlowCytometryApplicationsAnnexinV，PI双染法检测细胞凋亡细胞凋亡分析FlowCytometryApplicationsChannels(CFSE-A)050100150200250Number0100200300400500600Channels(CFSE-A)04080120160200Number04080120160细胞增殖分析-CFSE标记法FlowCytometryApplications免疫学研究FlowCytometryApplicationsFlowCytometryApplications根据功能，淋巴细胞主要分为•T淋巴细胞（CD3+），与细胞免疫有关总T和总B可以用来判断某些免疫缺陷和自身免疫性疾病•B淋巴细胞（CD19+）与体液免疫有关•NK细胞（CD3-CD16+56+），行使免疫监控功能，能够介导对某些肿瘤细胞和病毒感染细胞的细胞毒性作用。淋巴细胞亚群分析FlowCytometryApplications调节性T细胞（Tregs）•Tregs在抑制重要的病理性的免疫反应中，如：过敏反应、自身免疫病、免疫-炎症状况等有重要影响。•表面标志：CD4，CD25，CD127，FOXp3FlowCytometryApplications北京时间10月8日，2012年诺贝尔生理学或医学奖揭晓，约翰·戈登（JohnB.Gurdon）和山中伸弥（ShinyaYamanaka）获奖，获奖理由为“发现成熟细胞可被重编程变为多能性”。干细胞研究c-MycOct3/4Klf4Sox2FlowCytometryApplications干细胞研究方法-FCM•FCM应用–胞内–胞外–上清•细胞培养•分化•寻找生物标记•StemCells定性•SidePopulation分析•StemCells分离FlowCytometryApplications毒理药理实验——微核分析正在复制的细胞由于出现染色体断裂或者纺锤装置功能异常而导致有丝分裂染色体分布紊乱，分裂后期这些染色体碎片或整条染色体遗留在细胞液中，即所谓微核(micronucleus，MN)传统的微核计数方法枯燥、耗时，而且易受操作者主观因素影响，流式细胞术(flowcytometry，FCM)计数是一种高通量、客观、灵敏和自动化的替代方法。微核具有边缘清晰和特异染色的特征，尤其适用于FCM技术进行自动化计数。FlowCytometryApplications超冷甲醛固定洗去超冷甲醛或LTSS将细胞与RNase,anti-CD71-FITC和anti-Platelet-PE共同孵育加入碘化丙啶溶液用生物标准样品校准流式细胞仪（488nm激发光）分析实验用血样将固定后的样本置于长期保存溶液(LTSS)中。若储存恰当，可至少保存3年。血液样本处理FlowCytometryApplications流式检测微核实验结果FlowCytometryApplicationsFCM与常规方法相比的优势•首先，在数小时内FCM可以分析30个动物血样，而在相同的时间内常规显微镜阅片只能完成5张左右。•此外，使用FCM每个血样至少分析20000个RET，是常规骨髓阅片的10倍，大大增加了MN检测的准确性和统计能力，也可基本满足目前分子生物学大量候选化合物的高通量毒性筛选要求；•除速度和通量提高以外，FCM亦能得出MN大小和分布的资料，即PI相关的荧光数值的大小(如DNA含量)，这也有利于MN形成机制的研究，区分该遗传毒性化合物是DNA断裂剂还是非整倍体诱导剂FlowCytometryApplicationsBDIntroductionFCMPrinciplesFCMApplicationsBDAccuriC6BDFlowCytometers•所有接收器环绕流动室排列，信号直接被检测器接收，大幅提升接收效率•滤光片可以根据需要更换，满足不同检测需求专利环形光路ExistingSystem24-bitAccuriC6就好比为流式技术装上了超宽屏幕！跨越107.2的超高动态范围，免调电压BDFlowCytometersFL3=670LPFL1=530/30FL2=585/40FL4=675/25Pre-OptimizedDetectors-AdjustViewwithZoom高灵敏度，低CV，更适合细胞周期等实验BDFlowCytometersCFlow软件，简单易用，30min时间即可操作免调电压，脱机补偿软件无加密，可安装到用户个人电脑上进行分析图和统计数据可直接导出为PPT或Excel，或拖至Word分析关机自动清洗，节省您的宝贵时间BDFlowCytometersC6软件，简单即用,30分钟即可掌握，支持彩色显示，单界面涵盖所有主要功能BDFlowCytometers•Simple使用简单•Multiplex多重功能•Accurate结果精确•Receptibleprice价格合理•Transportable便携性强SMARTChoiceBDFlowCytometersBD流式细胞术培训中心COE（上海，北京）BD每年开展巡回学术讲座（全国各大城市）BD编撰《FlowCytometry》刊物，不断向客户传达更多、更新的流式资讯BD——BeWithYou!BD为您提供专业流式服务Thanks!