应用滤袋技术测定粗纤维(CF)的方法

应用滤袋技术测定粗纤维（CF）的方法ANKOMA200i型半自动纤维分析仪A试剂(a)硫酸溶液—0.255±0.005N。1.25g硫酸/100mL蒸馏水(溶液浓度需要通过滴定核查)。(b)氢氧化钠溶液—0.313±0.005N。1.25g氢氧化钠/100mL蒸馏水。B.安全注意(a)丙酮易燃，操作时应在通风橱中进行，避免吸入或与皮肤接触。将滤袋放入烘箱之前，要确保滤袋完全干燥，丙酮完全挥发。(b)操作浓硫酸时要带橡胶手套和面罩。配制硫酸溶液时一定注意将硫酸倒入水中。如果酸接触到皮肤，请用大量水冲洗。C.设备(a)消化装置—ANKOMA200i纤维分析仪。(b)滤袋—ANKOMF57滤袋。如果样品非常细，可选用F58滤袋（见注1）(c)封口机(d)干燥器(e)分析天平-精确至0.1mg(f)电热干燥箱(g)耐溶剂记号笔D.步骤(a)用耐溶剂的记号笔给滤袋编号，称重(m1)。(b)直接准确称取1.0(±0.1)g制备好的样品(m)于滤袋中。样品需要粉碎过1mm筛。(c)在距离滤袋上边缘大约4mm用封口机封口。然后将样品在滤袋中展平，均匀分布。(d)至少取一个空白滤袋(C1)，同时做空白测定。(e)脂肪含量高的样品需要脱脂。将装有样品的滤袋放入玻璃容器中，加丙酮使滤袋完全浸没，浸泡10min。倒掉溶剂，将滤袋放在网筛上凉干。(f)一次最多可以在滤袋架上放24个滤袋。无论放置滤袋数量多少，9层滤袋架上托盘要全部使用，每层放三个滤袋。层与层之间错开120度。然后将装有滤袋的支架放入纤维分析仪消煮器中，然后在顶部将金属压锤放上，以确保消煮过程中不浮起。(g)当处理24个样品袋时，加入1900-2000mL已配好室温酸溶液。如果处理样品少于20个滤袋，按照每个滤袋加100mL酸溶液，但不能少于1500mL，确保滤袋托盘能完全浸没。(h)打开搅拌和加热开关，确保滤袋支架搅拌正常。盖上盖子并完全密封好。仪器将加热并维持溶液温度100°C。设置处理时间40min，包括加热升温时间。(i)消煮结束，关上加热和搅拌开关，打开排液阀（开始要慢一点），在打开盖子之前一定将热的溶液排完。*警示：消煮器中的溶液是有压力的。在打开盖子之前一定将废液阀打开以释放压力。(j)溶液排完后，打开盖子，关闭排液阀，加2000mL(50~90°C)蒸馏水，搅拌5min。盖上盖子并打开加热开关，或打开盖子并关闭加热开关。重复一次，共淋洗两次。(k)当处理24个样品袋时，加入1900~2000mL室温碱溶液(0.313M氢氧化钠溶液)。如果处理样品少于20个滤袋，按照每个滤袋加100mL碱溶液，但不能少于1500mL。(l)打开搅拌和加热开关，确保滤袋支架搅拌正常。盖上盖子并完全密封好。仪器将加热并维持溶液温度100°C。设置处理时间40min，包括加热升温时间。(m)消煮结束，关上加热和搅拌开关，打开排液阀（开始要慢一点），在打开盖子之前一定将热的溶液排完。*警示：消煮器中的溶液是有压力的。在打开盖子之前一定将废液阀打开以释放压力。(n)溶液排完后，打开盖子，关闭排液阀，加2000mL(50~90°C)蒸馏水，搅拌5min。盖上盖子并打开加热开关，或打开盖子并关闭加热开关。重复一次，共淋洗两次。(o)将滤袋从滤袋支架上取下来，轻轻挤压去掉多余的水。然后将滤袋放入250mL烧杯中，加丙酮至覆没滤袋，浸泡3~5min，然后取出并轻轻挤压去掉多余的丙酮。(p)在通风橱中展开滤袋，让其自然干燥。完全干燥后放入102°C±2°C烘箱烘干4小时。*警告：在丙酮完全挥发掉之前不能把滤袋放入烘箱中。(q)从烘箱中取出滤袋，直接放入干燥器中冷却至室温，然后称重（m2）。(r)将滤袋放入已经知道质量（m3）的坩埚中在600°C±15°C条件下灰化2小时，干燥器中冷却，称取质量，计算灰分质量（m4）。D.计算试样中粗纤维的质量分数按以下公式计算。CF(%)=[(m2-m1xC1)-（(m4-m3)]x100/m其中：m1为空袋质量，g；m2为提取烘干后滤袋+样品质量，g；m3为坩埚质量，g；m4为坩埚+灰分质量；C1为空白袋子校正系数(烘干后质量/原来质量)；m为样品质量，g。E.注解有些粉碎非常细的样品需要用F58滤袋替代F57滤袋，以避免样品流失。应用滤袋技术测定中性洗涤纤维（NDF）的方法ANKOMA200i型半自动纤维分析仪A.试剂(a)称取30.0g十二烷基硫酸钠（USP）；18.61g乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA）；6.81g四硼酸钠（Na2B4O7）十水；4.56g磷酸氢二钠（Na2HPO4）-无水；10.0ml三甘醇(C6H14O4)；全部溶解在1L水中，适当的搅拌和加热有助于溶解。检查适当的pH在6.9—7.1。(b)α-淀粉酶(Alpha-amylase)–热稳定细菌α-淀粉酶：活性为17,400单位/mL。1个活性单位表示能将1mg可溶性淀粉用30min水解。(c)无水亚硫酸钠（Na2SO3）。(d)丙酮：无色，并且蒸发后无残渣。B.安全注意(a)丙酮易燃，操作时应在通风橱中进行，避免吸入或与皮肤接触。将滤袋放入烘箱之前，要确保滤袋完全干燥，丙酮完全挥发。(b)十二烷基硫酸钠对黏膜有刺激，因此操作时要带防尘口罩和手套。C.设备(a)消化装置-ANKOMA200i纤维分析仪。(b)滤袋-ANKOMF57滤袋。(c)封口机(d)干燥器(e)分析天平-精确至0.1mg(f)电热干燥箱(g)耐溶剂记号笔D.步骤(a)滤袋和样品的准备1)用耐溶剂的记号笔给滤袋编号，称重(m1)。2)直接准确称取0.5g(±0.05g制备好的样品(m)于滤袋中。样品需要粉碎过1mm筛。3)在距离滤袋上边缘大约5mm用封口机封口。然后将样品在滤袋中展平，均匀分布。4)至少取一个空白滤袋(C1)，同时做空白测定。5)一次最多可以在滤袋架上放24个滤袋。无论放置滤袋数量多少，9层滤袋架上托盘要全部使用，每层放三个滤袋。层与层之间错开120度。然后将装有滤袋的支架放入纤维分析仪消煮器中，然后在顶部将金属压锤放上，以确保消煮过程中不浮起。6)样品含有大豆产品或脂肪超过5%，将装有样品的滤袋放入带盖玻璃容器中，加丙酮使滤袋完全浸没，盖好盖子。摇动容器10次，浸泡10min。然后更换新的丙酮，重复上述操作一次。最后将滤袋取出，放在网筛上凉干。例外：烘烤大豆，由于烘烤大豆的特殊性，需要采用改进后的下面脱脂方法。将装有样品的滤袋放入带盖玻璃容器中，加丙酮使滤袋完全浸没，盖好盖子。摇动容器10次，然后更换新的丙酮，浸泡12h。取出滤袋，放在网筛上凉干。(b)当处理24个滤袋时，向2000mL中性洗涤剂溶液中加无水亚硫酸钠20g(0.5g/50mLND溶液)和4.0mL热稳定alpha-amylase。让无水亚硫酸钠在溶液中充分溶解。向容器中加入该溶液。如果处理样品少于20个滤袋，按照每个滤袋加100mL酸溶液，但不能少于1500mL，确保滤袋托盘完全浸没。(c)打开搅拌和加热开关，确保滤袋支架搅拌正常。盖上盖子并完全密封好。仪器将加热并维持溶液温度100°C。设置处理时间75min，包括加热升温时间。(d)消煮结束，关上加热和搅拌开关，打开排液阀（开始要慢一点），在打开盖子之前确保废液排放管与废液容器安全连接，一定将热的溶液排完。*警示：消煮器中的溶液是有压力的。在打开盖子之前一定将废液阀打开以释放压力。(e)溶液排完后，打开盖子，关闭排液阀，加2000mL(70°C~90°C)蒸馏水，并且第1和第2次淋洗时同时加4.0mLα-淀粉酶，放下盖子，但不旋紧。打开搅拌开关（不打开加热开关）搅拌3~5min。排掉废液，重复2次，共淋洗3次。(f)最后一次淋洗后，加冷的自来水以操作和使冷却容器，为下轮测定做好准备。排干水，从容器中取出带滤袋的支架。将滤袋从滤袋支架上取下来，轻轻挤压去掉多余的水。然后将滤袋放入250mL烧杯中，加丙酮至覆没滤袋，浸泡3~5min，然后取出并轻轻挤压去掉多余的丙酮。(g)在通风橱中展开滤袋，让其自然干燥。完全干燥后放入102°C±2°C烘箱烘干4小时。*警告：在丙酮完全挥发掉之前不能把滤袋放入烘箱中。(q)从烘箱中取出滤袋，直接放入干燥器中冷却至室温，然后称重（m2）。E.计算试样中中性洗涤纤维质量分数按以下公式计算。NDF(%)=(m2-(m1xC1))x100/m其中：m1为空袋质量，g；m为样品质量，g；m2为提取处理后样品残渣+滤袋质量，g；C1为空白袋子校正系数(烘干后质量/原来质量)。应用滤袋技术测定酸性洗涤纤维（ADF）的方法ANKOMA200i型半自动纤维分析仪A.试剂(a)酸性洗涤剂溶液：称取20g十六烷三甲基溴化胺（CTAB），溶于1000mL已标定过的1.00N硫酸溶液中，加热搅拌使其溶解。(b)丙酮：无色，并且蒸发后无残渣。B.安全注意(a)丙酮易燃，操作时应在通风橱中进行，避免吸入或与皮肤接触。将滤袋放入烘箱之前，要确保滤袋完全干燥，丙酮完全挥发。(b)CTAB对黏膜有刺激，因此操作时要带防尘口罩和手套。C.设备(a)消化装置-ANKOMA200i纤维分析仪。(b)滤袋-ANKOMF57滤袋。(c)封口机(d)干燥器(e)分析天平-精确至0.1mg(f)电热干燥箱(g)耐溶剂记号笔D.步骤(a)滤袋和样品的准备1)用耐溶剂的记号笔给滤袋编号，称重(m1)。2)直接准确称取0.5g(±0.05g制备好的样品(m)于滤袋中。样品需要粉碎过1mm筛。3)在距离滤袋上边缘大约4mm用封口机封口。然后将样品在滤袋中展平，均匀分布。4)至少取一个空白滤袋(C1)，同时做空白测定。5)一次最多可以在滤袋架上放24个滤袋，每层放三个滤袋。层与层之间错开120度。然后将装有滤袋的支架放入纤维分析仪消煮器中，然后在顶部将金属压锤放上，以确保消煮过程中不浮起。6)样品含有大豆产品或脂肪超过5%-将装有样品的滤袋放入带盖玻璃容器中，加丙酮使滤袋完全浸没，盖好盖子。摇动容器10次，浸泡10min。然后更换新的丙酮，重复上述操作一次。最后将滤袋取出，放在网筛上凉干。例外：烘烤大豆–由于烘烤大豆的特殊性，需要采用改进后的下面脱脂方法。将装有样品的滤袋放入带盖玻璃容器中，加丙酮使滤袋完全浸没，盖好盖子。摇动容器10次，然后更换新的丙酮，浸泡12h。取出滤袋，放在网筛上凉干。(b)当处理24个滤袋时，向容器中加入2000mL酸性洗涤剂溶液。如果处理样品少于20个滤袋，按照每个滤袋加100mL酸溶液，但不能少于1500mL，确保滤袋托盘能完全浸没。(c)打开搅拌和加热开关，确保滤袋支架搅拌正常。盖上盖子并完全密封好。仪器将加热并维持溶液温度100°C。设定处理时间60min，包括加热升温时间。(d)消煮结束，关上加热和搅拌开关，打开排液阀（开始要慢一点），在打开盖子之前确保废液排放管与废液容器安全连接，一定将热的溶液排完。*警示：消煮器中的溶液是有压力的。在打开盖子之前一定将废液阀打开以释放压力。(e)溶液排完后，打开盖子，关闭排液阀，加2000mL(70°C~90°C)蒸馏水，关闭盖子并打开加热开关，或打开盖子并关闭加热开关。搅拌5min。排掉废液，重复2次，共淋洗3次或洗涤至中性。(f)将滤袋从滤袋支架上取下来，轻轻挤压去掉多余的水。然后将滤袋放入250mL烧杯中，加丙酮至覆没滤袋，浸泡3~5min，然后取出并轻轻挤压去掉多余的丙酮。(g)在通风橱中展开滤袋，让其自然干燥。完全干燥后放入102°C±2°C烘箱烘干4小时。*警告：在丙酮完全挥发掉之前不能把滤袋放入烘箱中。(q)从烘箱中取出滤袋，直接放入干燥器中冷却至室温，然后称重（m2）。E.计算试样中酸性洗涤纤维质量分数按以下公式计算。ADF(%)=(m2-(m1xC1))x100/m其中：m1为空袋质量，g；m为样品质量，g；m2为提取处理后样品残渣+滤袋质量，g；C1为空白袋子校正系数(烘干后质量/原来质量)。F．几点说明如果样品同时测定NDF和ADF，可以先测定NDF，然后将测定完装有残渣的滤袋放在样品架子上，直接加酸性洗涤