维生素C尿负荷试验

维生素C尿负荷试验（一）目的及意义：评价被检者维生素C的营养状况。（二）原理：还原型抗坏血酸具有还原性，能还原2,6-二氯酚靛酚染料。该染料在酸性溶液中呈红色，被还原后红色失去。还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化成脱氢型抗坏血酸。一定量的尿样能还原标准染料的量与样品中所含抗坏血酸的量成正比。成人尿负荷4小时（口服500mg抗坏血酸）不足3mg正常3~10mg充裕10mg（三）仪器与试剂容量瓶（50ml）；微量滴定管；三角烧瓶（50ml）；吸管等1%草酸溶液；0.02％2,6-二氯酚靛酚溶液；标准抗坏血酸溶液（四）操作步骤（1）样品制备晨起空腹时被检者排出晨尿后，口服500mg抗坏血酸，收集其后4小时尿液。在尿液中加入一定量草酸，置于4度保存。（2）溶液配制VC应用液配制取1mlVC储备液（1mg/ml)→50ml容量瓶，以1%草酸溶液定容。（3）空白试验取10ml1％草酸溶液→三角瓶，以染料滴定至粉红色，记录用量（C）。（4）染料标定取5mlVC应用液和5ml1％草酸溶液于三角瓶，以染料滴定至粉红色，15s不褪色为终点，记录用量（A）。（5）以吸管吸取尿样2~5ml至50ml三角瓶，加入1%草酸5ml。（6）立即用标定过的2,6-二氯酚靛酚染料滴定之，直至淡粉红色15s不褪色为终点，记录染料用量。做平行样。（五）操作要迅速，滴定要准确。样品中可能含有其他物质能还原2,6-二氯酚靛酚染料，但还原染料的速度要比抗坏血酸慢，所以滴定时以15s不褪色为终点（六）结果计算与分析1．空白滴定A=(2.20+2.30)/2=2.25ml2．染料标定C=(0.1+0.15)/2=0.125ml3．四小时尿量205ml4．滴定用尿量5ml5.计算T值T0.02mg/ml×5ml=—————————=0.047mg/ml2.25ml-0.125ml6.尿中还原型抗坏血酸排出量=(3.80—0.125)×0.047mg/ml=——————————————×205ml=7.08mg5ml结果讨论与分析分析1．实验测得尿中还原型抗坏血酸排出量为7.08mg，而实验者口服2片VC含量为52.8mg的维生素片，即为105.6mg，对照标准得知被测者VC营养状况良好；2.VC在人体内无法自行合成，全部由饮食摄入，被测者VC营养状况良好则表明其日常膳食中的摄入量充足；3.在实验室的操作过程中由于动作不够迅速致使VC被氧化，则使得实验结果偏小；4.在滴定操作过程由于移液及读数则使得实验结果又误差；5.样品中还有含有其他物质能还原2,6—二氯靛酚染料，使得实验结果偏小，造成试验误差。CAVC用量应用液浓度小时尿量滴定用尿样量数染料相当于抗坏血酸每样品－空白）染料用量4)(mgml(T