2.3-动物细胞工程

第二章克隆技术第二节动物的克隆动物细胞培养动物细胞培养：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。剪刀剪碎动物细胞培养的过程加培养液稀释剪刀剪碎原代培养：初次培养动物胚胎或幼龄动物的组织水、无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清等原代培养：从机体取出后立即进行的细胞培养。用剪刀剪碎胰蛋白酶消化CO2培养箱中保温培养O2是细胞代谢必须的；CO2维持培养液的pH。传代培养：分瓶后培养传代培养：将原代培养的细胞分离稀释后转入新的培养瓶中继续培养。营养物质枯竭，细胞密度过大，接触抑制动物细胞的生长特性50代以后失去接触抑制接触抑制贴壁生长贴满瓶壁停止生长贴壁生长：悬浮液中分散的细胞贴附在培养瓶内壁才能生长。无限传代接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂。单层什么是细胞系？细胞系：原代培养物经传代培养后所得到的一群不均一的细胞（异质性）。①连续细胞系：无限传代，不死性，遗传物质改变（发生转化），具有异倍体核型。②有限细胞系：二倍体细胞（2N）。细胞系分瓶原代培养物什么是细胞株？细胞株：通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞群。特点：①具有恒定的染色体组型、同工酶类型、病毒敏感性和生化特性等。②遗传物质未改变。动物细胞体外培养的条件①无菌、无毒的环境。②营养物质。③温度和pH。④气体环境（O2和CO2）分散成单个细胞使贴壁细胞从瓶壁上脱落下来动物组织块例题：用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞（）A.容易产生各种变异B.具有更强的全能性C.取材十分方便D.分裂增殖的能力强例题：动物细胞培养的特点（）①细胞贴壁②有丝分裂③细胞分化④接触抑制⑤减数分裂⑥原代培养一般传1-10代A.①②④⑥B.②③④⑤C.①③④⑥D.③④⑤⑥例题：下列为有关动物细胞培养的叙述，其中不正确的是（）A.用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织B.将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞C.在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液D.动物细胞培养只能传50代左右，所培养的细胞全部衰老死亡动物细胞克隆细胞克隆：又克隆培养法，把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体。未经克隆化的细胞系具有异质性，经过克隆培养以后成为纯系（均一性）。特点：来源于一个共同的祖细胞，遗传性状均一，表现的性状相似，便于研究。原代培养细胞和有限细胞系克隆起来有实际困难，无限细胞系、转化细胞系和肿瘤细胞系比较容易克隆。例题：下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是（）A.培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞B.克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变C.二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的D.恶性细胞系的细胞可进行传代培养例题：（2014·浙江高考）下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是（A.连续细胞系的细胞大多具有二倍体核型B.某些癌细胞在合适条件下能逆转为正常细胞C.由多个祖细胞培养形成的细胞群为一个克隆D.未经克隆化培养的细胞系细胞具有相同的性状特别注意：①低等动物细胞的全能性一般比较容易体现。②癌细胞仍能逆转为正常细胞。③细胞克隆：由同一个祖先细胞通过有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。例题：（2013·浙江高考）实验小鼠皮肤细胞培养（非克隆培养）的基本过程如图所示。下列叙述错误的是（A.甲过程需要对实验小鼠进行消毒B.乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶消化C.丙过程得到的细胞大多具有异倍体核型D.丁过程得到的细胞具有异质性特别注意：未经克隆化的细胞系具有异质性，经过克隆培养以后成为纯系（均一性）。动物细胞融合生物法物理法化学法单核细胞动物细胞融合：又动物细胞杂交，是指两个或多个动物细胞融合形成一个细胞的过程。原理：细胞膜的流动性诱导动物细胞融合的方法：①物理法：电刺激。②化学法：聚乙二醇。③生物法：灭活的仙台病毒。单克隆抗体的制备Y形抗体抗体：机体受抗原刺激后产生的，能与该抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。抗原不纯抗体不纯什么是单克隆抗体？单克隆抗体：由单个B淋巴细胞经过克隆形成细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。克隆什么是杂交瘤技术？杂交瘤细胞的特点：既能无限增殖，又能产生特异性抗体。能无限增殖动物细胞融合技术B、BB、B瘤、瘤瘤、瘤只有杂交瘤细胞才能活动物细胞培养技术获得产生相应抗体的B淋巴细胞获得能产生所需抗体的杂交瘤细胞获得杂交瘤细胞1975年，米尔斯坦（英）和科勒（德）融合选择性培养基抗体检测细胞融合从脾脏中分离注射特定抗原体内培养：从小鼠腹水中提取；体外培养：从培养液中提取。活动：简述单抗制备的过程单克隆抗体的应用①疾病诊断：试剂盒。②生物导弹：用单克隆抗体与抗癌药物连接，用于治疗癌症。单抗诊断试剂盒生物导弹例题：用小鼠制备单克隆抗体可用于人类疾病的诊断和治疗，关于单克隆抗体的叙述错误的是（）A.由杂交瘤细胞分泌B.具有特异性强、灵敏度高的特点C.与抗癌药物结合可制成“生物导弹”D.用于疾病治疗时人体不会产生任何免疫排斥单克隆抗体的优点：化学性质单一，特异性强，灵敏度高。例题：单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）①淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞A.②④B.①③⑤C.①②③④D.②③例题：用a表示骨髓瘤细胞，b表示B淋巴细胞，则细胞融合过程中两次筛选的目的分别为（）A.a、aa、ab、bb、b→a、aa、ab→ab培养B.a、aa、ab、bb、b→ab、bb、b→ab培养C.a、aa、ab、bb、b→ab→产生特定抗体的ab培养D.a、aa、ab、bb、b→aa→能无限增殖的aa培养第一次筛选：用选择性培养基获得杂交瘤细胞。第二次筛选：通过抗体检测获得能产生所需抗体的杂交瘤细胞。动物的克隆繁殖特别注意：动物细胞的全能性会随着动物细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能逐渐变弱。动物细胞的全能性特别注意：动物的受精卵和卵裂球含有2-8个细胞时，每个细胞都具有全能性。32细胞胚胎干细胞桑椹胚高等动物的胚胎发育受精卵→二分裂球→四分裂球→八分裂球→桑椹胚→囊胚→原肠胚→组织和器官→幼体。什么是细胞核移植？去核卵母细胞重组细胞核移植：将动物一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，形成重组细胞，并最终发育成一个新的动物个体。早期胚胎过程：去核（显微操作）→注核→形成重组细胞。电脉冲刺激实验结论：胚胎细胞核移植的成功率远高于体细胞核移植。卵细胞肠上皮细胞囊胚选择去核的卵细胞作为受体细胞的原因：①体积较大，易操作。②含有供早期胚胎发育的营养物质。③含有促进细胞核全能性表达的物质。绵羊多莉的克隆过程1997年，苏格兰罗斯林去核卵细胞细胞核移植胚胎移植代孕母体活动：用最简洁的语言总结多莉羊的诞生过程动物细胞培养核移植胚胎移植动物克隆成功的条件（1）具有包含本物种完整基因组的细胞核的活细胞如：乳腺上皮细胞。（2）能有效调控细胞核发育的细胞质物质如：去核卵细胞的细胞质。（3）完成胚胎发育的必要的环境条件如：诱导重组细胞生长、分化的实验条件和怀胎母体的子宫环境。详见P-20例题：如图为细胞融合的简略过程，请据图回答：（1）若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已用处理，除去了；A、B到C的过程中，常用的物理方法是。融合完成的标志是。（2）若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用技术把D培养成植株。（3）若A、B是动物细胞，一般取自，然后用使其分散开来，A、B到C的过程中，常用的不用于植物细胞的手段是，所形成的D称为。（4）若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠B淋巴细胞，那么，在获得此细胞之前，小鼠已被注射了。注射后小鼠身体产生了相应的，生成了。图中B为。（5）若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到C的过程中，所形成的C有种，用来培养的D细胞应该是，从中选出它的方法是用培养，获得D后，常用的培养方法是和。动物细胞培养动物细胞核移植