Premix-PrimeSTAR-HS-使用说明书

2×PCRSolutionPremixPrimeSTAR®HS使用说明书TakaraCode:DR040A包装量：500μl×5支。50μl的PCR反应体系时100次量，每次使用25μl。制品说明本制品是PCR反应用的2倍浓度的Premix制品，内含DNAPolymerase、Buffer、dNTPMixture等。DNAPolymerase使用了Takara独自开发的兼具高保真性和高扩增效率的PrimeSTAR®HSDNA聚合酶。使用本制品时，只需在制品溶液中加入模板和引物便可以进行PCR反应，大大简化了操作过程，减少了PCR操作过程中的污染。PrimeSTAR®HSDNA聚合酶具有极强的3’→5’Exonuclease活性，显示出超群的校正功能，同时还具有优于TaqDNAPolymerase的高扩增效率，其扩增得到的PCR产物几乎都为平滑末端，经磷酸化后可直接克隆于平滑末端的载体中。Premix溶液组成PrimeSTAR®HSDNA聚合酶1.25U/25μldNTPMixture2×conc.；各0.4mMPrimeSTAR®Buffer2×conc.；2mMMg2+保存温度:-20℃。反复冻融活性可能降低，请在第一次融解后轻轻混匀，然后分装至PCR反应管中（50μl反应时，每管分装25μl）后-20℃保存，以避免多次反复冻融。用途高保真PCR扩增DNA片段。PCR反应性能1）以λDNA为模板可以很好地扩增8、10、12、15kb的DNA片段。2）以人基因组DNA为模板，可以很好地扩增0.5、1、2、4、6、8kb的DNA片段。反应条件1.按下列组份配制PCR反应液。PremixPrimeSTAR®HS25μl模板DNA*200ng引物1（20μM）0.2-0.3μM（finalconc.）引物2（20μM）0.2-0.3μM（finalconc.）灭菌蒸馏水upto50μl*【50μlPCR反应体系中模板DNA推荐使用量】人基因组DNA5ng~200ng（200ng）大肠杆菌基因组DNA100pg~100ngλDNA10pg~10ng质粒DNA10pg~1ngcDNALibrary1~200ng2.PCR反应条件。98℃10sec55℃5sec或15sec30Cycles72℃1min/kbOr98℃10sec68℃1min/kb注）本酶具有高退火效率，所以在设定PCR条件时可以缩短退火时间。应用例1.以人基因组DNA为模板进行PCR扩增。模板：人基因组DNA50ng（50μl反应体系）。PCR仪：TaKaRaPCRThermalCyclerDice®。PCR条件：【0.5～6kb时进行3StepPCR】98℃10sec60℃5sec30Cycles72℃1min/kb【7.5～8.5kb时进行2StepPCR】98℃10sec68℃8minPCR结果：2.以大肠杆菌基因组DNA为模板进行PCR扩增。模板：大肠杆菌基因组DNA100pg（50μl反应体系）。PCR仪：TaKaRaPCRThermalCyclerDice®。PCR条件：3StepPCR98℃10sec60℃5sec30Cycles72℃1min/kbPCR结果：30Cycles30CyclesM11234567M2M1:pHYMarker1:0.5kb的DNA扩增片段2:1kb的DNA扩增片段3:2kb的DNA扩增片段4:4kb的DNA扩增片段5:6kb的DNA扩增片段6:7.5kb的DNA扩增片段7:8.5kb的DNA扩增片段M2:λ-HindIIIdigest1:2kb的DNA扩增片段2:4kb的DNA扩增片段3:6kb的DNA扩增片段4:8kb的DNA扩增片段5:10kb的DNA扩增片段M:λ-HindIIIdigestM12345M注意事项1.为保持制品活性，请在第一次融解后轻轻混匀，分装至PCR反应管中（50μl反应时，每管分装25μl）后-20℃保存，以避免多次反复冻融。2.PCR反应液请在冰中配制，然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法（CoolStartMethod）可增加PCR扩增时的特异性，减少PCR过程中的非特异性反应，能够得到良好的PCR结果。NOTICETOPURCHASER:LIMITEDLICENSE[L15]HotStartPCRLicensedunderU.S.PatentNo.5.338,671and5,587,287,andcorrespondingpatentsinothercountries.[M54]PrimeSTAR®HSDNAPolymeraseThisproductiscoveredbytheclaimsofU.S.PatentNo.7,704,713anditsforeigncounterpartsV2012.01