实验-土壤中细菌的分离与纯化

实验十微生物的分离与纯化一、目的要求1.掌握土壤微生物的分离纯化方法和无菌操作技术；2.初步掌握微生物的鉴定技术。二、实验原理1.自然界中各种微生物混杂生活在一起，要研究某种微生物的特性，首先须使该微生物处于纯培养状态。从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。2.土壤是微生物生活的大本营，可以从中分离到很多有价值的菌株。本实验将采用三种不同的培养基从土壤中分离不同类型的微生物。三、实验器材1.土样：采集校园土壤2.培养基：牛肉膏蛋白胨培养基——细菌高氏Ⅰ号培养基——放线菌马丁氏培养基——真菌3.其他：无菌的培养皿、盛90mL无菌水并带玻璃珠的三角瓶、盛9mL无菌水的试管、小铁铲、吸头、移液器、无菌玻璃涂棒、接种环、显微镜、染色液等。四、操作步骤（1）1.制备土壤稀释液2.涂布平板3.培养4.挑菌落5.平板划线分离6.转入斜面7.观察菌落特征、制片镜检菌体形态8.菌种保藏1.制备土壤稀释液四、操作步骤（2）2.涂布四、操作步骤（3）四、操作步骤（4）3.培养：高氏Ⅰ号培养基平板和马丁氏培养基平板倒置于28℃培养箱中培养3~5d，牛肉膏蛋白胨培养基平板倒置于37℃培养箱中培养2~3d。四、操作步骤（5）4.挑菌落接种和分离工具1.接种针；2.接种环；3.接种钩；4.5.玻璃涂棒；6.接种圈；7.接种锄；8.小解剖刀四、操作步骤（6）5.平板划线分离平板划线分离的方法1.斜线法；2.曲线法；3.方格法；4.放射法；5.四格法四、操作步骤（6）平板划线法四、操作步骤（6）平板划线分离斜面接种时的无菌操作(1)接种灭菌;(2)开启棉塞;(3)管口灭菌;(4)挑起菌苔;(5)接种;(6)塞好棉塞四、操作步骤（7）6.转入斜面1.试拟出从土壤中分离芽孢杆菌的主要实验步骤。2.如何检验平板上某个单菌落是不是纯培养？六、思考题