临床微生物学检验第五版第11章弯曲菌属与螺杆菌属

第11章弯曲菌与螺杆菌弯曲菌属与螺杆菌属弯曲菌目（Campylobacterale）弯曲菌科螺杆菌科（Campylobacteraceae）（Helicobacteraceae）弯曲菌属螺杆菌属（Campylobacter）（Helicobacter）弯曲菌属（Campylobacter）分类•弯曲菌原归属于弧菌属，1973年正式命名为弯曲菌属。•2005年的伯杰手册中将其分为30个种(亚种)临床意义分布：•广泛分布于温血动物•自然界的任何水中都可能含有弯曲菌所致病：•空肠弯曲菌主要引起肠道感染•胎儿弯曲菌主要引起肠外感染。空肠弯曲菌：感染来源：感染动物的粪便、未经处理的水和牛乳等。传播途径：以食物和水的传播为多见。传播方式：经口摄入。可能的致病物质：•细胞毒素，包括细胞致死性肿胀毒素，志贺样毒素和溶血毒素等。•内毒素和肠毒素致病部位及表现：•感染部位通常在空肠、回肠，也可蔓延到结肠。•腹泻大多为水样便，小部分为脓血黏液便。生物学特性形态染色•革兰阴性，菌体弯曲呈逗点、弧形、S形、螺旋形或典型的海鸥展翅形，陈旧培养物可呈球形或长丝状。•无芽胞、无荚膜、一端或两端有单鞭毛，运动非常活泼。空肠弯曲菌革兰染色空肠弯曲菌鞭毛（扫描电镜）生物学特性抗原：•菌体(O)抗原：血清分型的基础•热不稳定抗原(heatlabileantigen)•鞭毛(H)抗原生物学特性培养特性：•微需氧菌，最佳气体环境为5%O2,10%CO2和85%N2•最适生长温度因菌种而异---空肠/大肠弯曲菌最适生长温度42℃---胎儿弯曲菌于25℃和37℃均可生长•营养要求高：常用布氏肉体增菌，布氏血平板培养菌落特征：有两种•灰白色扁平湿润边缘不整齐蔓延生长的菌落（迁徙生长）•无色半透明圆形凸起有光泽的小菌落空肠弯曲菌在巧克力平板上的菌落生物学特性生化反应：•生化反应不活泼，不能利用糖类，以氨基酸为能量来源。•氧化酶和触酶阳性，硝酸盐还原（+）•尿素（-）、硫化氢（-）。生物学特性抵抗力：•对外环境抵抗力不强；•不耐干燥，对热和巴氏消毒敏感；•对酸性环境和消毒剂敏感,对氧也非常敏感。微生物检验程序血液、脑脊液粪便、肛拭子直接检测增菌（布氏肉汤）动力检查直接镜检7天不生长生长分离培养（布氏平板）（多块选择平板）弃去微需氧环境25℃、37℃、42℃24～72h可疑菌落涂片染色镜检纯培养（布氏血琼脂）鉴定微生物检验标本采集•采取新鲜粪便与肛拭子、血液、脑脊液等立即送检。•如不能及时送检应种入Cary-Blair运送培养基，放4℃冰箱保存。标本直接检查•直接显微镜检查–粪便与肛拭子可直接镜检：特殊形态和运动。•核酸检测–PCR方法直接检测粪便标本中的弯曲菌，分离培养与鉴定分离培养–粪便或肛拭标本：直接接种改良Campy-BAP选择平板–血、脑脊液标本：布氏肉汤增菌后转种分离培养基–微氧环境培养–不同细菌培养温度不同鉴定要点：–形态培养特征革兰阴性，菌体弯曲或呈S形，动力(+)氧化酶(+)生长温度(25℃、37℃、42℃)试验；–奈啶酸、头孢唑啉敏感试验空肠弯曲菌对奈啶酸敏感、对头孢唑啉耐药；胎儿弯曲菌对奈啶酸耐药、对头孢唑啉敏感。–马尿酸盐水解试验•凡马尿酸盐水解试验阳性、42℃生长、氧化酶阳性、与镜检形态相符者，即可报告空肠弯曲菌空肠亚种–醋酸吲哚水解试验•空肠弯曲菌阳性，胎儿弯曲菌阴性免疫学方法–胶乳凝集–酶免疫方法测定粪便中弯曲菌抗原–血清中抗体测定用于流行病学调查DNA探针和PCR扩增KeyPoints•革兰阴性逗点状或S形的菌,运动活泼•微需氧：最佳生长环境为含5%O2、10%CO2、85%N2•最适生长温度因菌种而异•营养要求高•氧化酶、触酶阳性，不能利用、不发酵各种糖类，硝酸盐还原（+），脲酶（-）•主要通过食物和水经口传播。CAMPYLOBACTER•CampylobacterareGram-negative,microaerophiles,whichmeansthattheycansurviveinalowoxygenenvironment.•Whatisunusualabouttheorganism,though,isthatitalsoprefersarelativelyhighconcentrationofcarbondioxideintheenvironment.Youcanimaginethedifficultyofproducinganenvironmentsuitableforculturingthisorganism.•ThemostcommonlyisolatedspeciesofCampylobacterisC.jejuni,anorganismthatcausesgastrointestinitis.Humansacquiretheorganismsbyeatingundercookedchickenordrinkingcontaminatedmilkandwater.螺杆菌属（Helicobacter）诺贝尔生理学和医学奖•1983年Marshall和Warren首先用微需氧技术从慢性胃炎、消化性溃疡患者的胃黏膜分离出弯曲状的细菌，并证明该细菌感染胃部会导致胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡，由此获得了2005年诺贝尔生理学和医学奖。分类•弯曲菌目（Campylobacterale）•螺杆菌科（Helicobacteraceae）•螺杆菌属（Helicobacter）•幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)曾命名为幽门弯曲菌(campylobacterpylori)临床意义•高度适应或只能生活于胃黏膜的细菌,胃窦为其定植的最佳部位。•菌体周围微环境的pH值为7.0。•HP感染与慢性浅表性胃炎或萎缩性胃炎有关。•胃癌发病率在一些Hp感染率高的人群中较高。HP致病机制•尚不清楚，可能与下列因素有关：–特殊的螺旋状和端鞭毛有利于Hp穿透–具有高活性胞外脲酶分解尿素，产生氨中和菌体周围胃酸，有助于细菌定植–细胞毒素相关蛋白（CagA）和空胞毒素（VacA）生物学特性形态结构：•革兰染色阴性。•菌体细长弯曲呈螺形、S形或海鸥形。•固体培养基上生长时，除典型形态外，有时可出现杆状或圆球状。•菌体一端或两端可有多根带鞘鞭毛，运动活泼。幽门螺杆菌革兰染色幽门螺杆菌端鞭毛（示意图）培养特征：•微需氧：5%O2、10%CO2、85%N2•最适生长温度：35~37℃•高湿度环境：湿度大于98%•营养要求高：特殊血平板生长菌落特征：•无色半透明、圆形、“露滴样”小菌落，轻度溶血•扁平、融合成片，沿穿刺线扩散生长生化反应•不活跃，不能利用糖类、马尿酸水解（-）•脲酶强（+）、氧化酶和触酶（+）幽门螺杆菌在血平板上菌落微生物检验程序胃、十二指肠活检标本血清,胃液显微镜PCR分离培养血清检测检查快速脲酶试验微需氧,高湿度革病理免疫25℃、35℃,42℃IgGSIgA兰切片组化3～7天染特殊色染色25℃不生长35℃生长42℃不生长初报可疑菌落革兰染色、氧化酶（+）触酶（+）动力（+）生化反应报告微生物检验标本采集•经胃镜活检胃部病变组织•床边接种或放入Stuart’s转运培养基内，4℃中保存不超过24h•受检者术前应停服铋剂或抗菌药物一周标本直接检查1.直接显微镜检查–涂片或悬滴观察–直接涂片染色镜检–组织切片染色镜检•切片经W-S银染色、姬姆萨染色、HE染色和荧光染色等，染色后镜检Hp，以W-S银染效果最好。–免疫组化–间接免疫荧光法（IIF）2.快速脲酶试验尿素培养基检测3.核酸检测4.粪便标本Hp抗原检测分离培养与鉴定•分离培养–宜用新鲜配制的选择培养基。将标本的粘膜面在平板上反复涂擦，或将标本研碎后用研磨棒蘸取适量匀浆接种–将接种后的平板放入微需氧和98%以上湿度的环境培养•鉴定–形态和染色性–菌落特征，35℃生长–氧化酶和触酶（+）、脲酶强（+）萘啶酸耐药、头孢噻吩敏感–在1%甘油和1%胆盐中均不生长抗体检测•用血清学方法检测患者体内的抗Hp抗体（IgG、IgM和IgA）系最常用的无创伤性诊断Hp感染的方法•补体结合试验•胶乳凝集试验•ELISA:应用最为广泛13C或14C标记尿素呼吸试验•基本方法是患者禁食一夜，进食用13C或14C标记的尿素，Hp产生的脲酶分解尿素释放13CO2或14CO2，因此可测定患者呼气中释放带有标记的CO2量，如CO2含量超过标准，提示有Hp存在。KeyPoints•革兰阴性弯曲菌，动力（+）•微氧高湿度培养环境，营养要求较高•氧化酶和触酶（+）、脲酶强（+）HELICOBACTER•TheHelicobactergenusfeatures：Gram-negative,micraerophilicorganismsthatareverysimilartoorganismsoftheCampylobactergenus.•SufficientcolonygrowthcanbeseeninthreedayswhentheorganismisplatedontoBrucella-sheepbloodagarandplacedinamicroaerophilicenvironment.•AGram-stainwillreavealweaklystainedrodwithauniquecurvature.Helicobacterpyloriisalsostronglyurease-positive,whichmayhelpinidentification.LABORATORYINDICATIONS(H.pylori)•Urease+•Catalase+•Motile•Microaerophile