生物学——毕业答辩

明德正行博学多能明德正行博学多能生命科学学院2016届本科毕业答辩意大利苍耳入侵地土壤真菌多样性及其化感作用的研究答辩人：王悦专业：生物技术指导教师：邵华（副研究员）黄先忠（教授）汇报内容研究背景及目的结果与讨论结论致谢研究内容及方法1.研究背景及目的研究背景意大利苍耳根际微生物研究背景研究背景土壤微生物对入侵种和本土种的反馈作用是多种植物入侵成功的原因之一。目前对于意大利苍耳的研究报道主要集中在关于其生物学特性及危害性等方面的描述，对于其根际分泌物对土壤微生物多样性的影响，尤其是根际微生物所产生的次生代谢产物的活性研究尚未见报道。研究目的探讨意大利苍耳根际效应是否改变根际微生物的群落结构和功能，并辅助自身的生长和扩张。分离纯化意大利苍耳根际真菌及其活性物质，以期得到对意大利苍耳或伴生植物有促生/抑生的活性化合物。2.研究内容与方法研究内容意大利苍耳入侵对根际土壤微生物多样性的影响意大利苍耳根际土壤真菌次生代谢产物的化感活性研究研究方法3.实验结果与讨论3.1意大利苍耳根际真菌的分离、鉴定以及多样性研究土壤微生物的分离与计数对意大利苍耳根际土和对照土的土壤微生物数量进行分析,结果如下：土壤微生物的分离计数根际土壤中的微生物均有明显增长，其中真菌的增长率最高，故选其作为后续实验研究对象。样品细菌数量增长率放线菌数量增长率真菌数量增长率微生物总数SamplesQuantityofbacteriarateofincreaseQuantityofactinomycesrateofincreaseQuantityoffungirateofincreasetotalofmicroorganismCK1.04×106_1.1×105_0.79×104_115.79×104根际土2.67×1061.572.26×1051.052.82×1042.57292.42×104根际真菌的分离纯化运用稀释平板法分得66株真菌，现将部分真菌菌落形态图片整理如下：根际真菌的分离纯化真菌的ITS-rDNA序列分析和系统发育树构建真菌属菌株编号菌株数参考物种(登录号)相似性镰刀菌XI3(KX008628)1Fusariumsp.(DQ657851)99%XI15(KX008639)1Fusariumsolani(KM873045)99%XI22(KX008640)1Fusariumphaseoli(KF717534)100%曲霉XI1(KX008625)3Aspergillusustus(JN545824)99%XI21(KX008647)1Aspergillustubingensis(KP994290)100%XI24(KX008651)1Aspergillusaff.(KF986800)100%XI29(KX008650)1Aspergillusniger(KT852982)99%XI34(KX008659)4Aspergillusterreus(JF738047)100%XI35(KX008661)1Aspergillusparasiticus(HQ340102)100%XI37(KX008660)1Aspergillussojae(JQ812709)100%XI38(KX008662)3Aspergillusflavipes(KT803071)100%XI43(KX008666)2Aspergillusochraceus(KT803068)99%XI45(KX008673)1Aspergillusfumigatus(KT192295)99%蓝状菌XI11(KX008636)2Talaromycesflavus(EU273527)100%XI31(KX008657)2Talaromycesfuniculosus(KC254067)100%XI40(KX008663)2Talaromycesverruculos(KP059103)100%XI7(KX008632)1Talaromycesverruculosus(KP059103)100%XI46(KX008672)1Talaromycespurpureogenus(KP055602)100%真菌属菌株编号菌株数参考物种(登录号)相似性木霉XI6(KX008630)2Trichodermaharzianum(KC576660)100%XI9(KX008635)1Trichodermaatroviride(EF442080)99%XI20(KX008646)1Trichodermaviride(LC092110)100%XI42(KX008671)1Trichodermaaureoviride(HQ596956)99%青霉XI8(KX008633)1Penicilliumhalotolerans(NR111812)99%XI23(KX008649)1Penicilliumpinophilum(AB606412)99%XI26(KX008642)1Penicilliumsp.(FJ571462)100%XI19(KX008645)1Penicilliumjanthinellum(KM268686)99%弯孢菌XI33(KX008659)2Curvularialunata（KU232956）100%赭霉XI17(KX008643)1Ochroconistshawytschae(HQ667562)92%XI28(KX008655)1Aspergillusochraceus(EU273559)100%未知菌XI10(KX008631)2Fungalendophyte(KF673689)100%虫草XI44(KX008674)1Cordycepsjaponica(AY245645)100%链格孢XI30(KX008656)1Alternariaalternata(KP684928)99%毛壳菌XI5(KX008629)1Chaetomiumsp.(JF311919)99%漆斑菌XI25(KX008654)1Myrotheciumverrucaria(KT803061)100%帚霉XI50(KX008670)1Clonostachysrosea(KJ619987)99%子囊菌XI18(KX008644)1Ascomycotasp.(HQ607971)93%真菌的ITS-rDNA序列分析和系统发育树构建真菌的ITS-rDNA序列分析和系统发育树构建种群多样性分析定义ITS-rDNA序列相似性低于97%时作为不同的分类单元进行多样性计算：Shannon-Wiener多样性指数为2.12均匀度指数为0.80根据种群划分原则，算出各菌株占群落总菌株的百分比。真菌的ITS-rDNA序列分析和系统发育树构建结论：意大利苍耳根际土壤分离的真菌，鉴定分析为35个分类单元，分属于半知菌亚门和子囊菌亚门，共12个属；其中曲霉（36%）、蓝状菌（26%）、木霉（10%）为优势属。菌株XI18和XI17与Genbank中已经报道的基因序列相似性仅为93％和92%，极有可能为潜在的新种资源。目前对这两种菌株的分类鉴定正在进行。3.2部分根际真菌的化感作用的初步探讨菌株的液体发酵培养挑取单菌落于摇瓶中，120rpm、28℃恒温培养5-7日后取出，菌液用乙酸乙酯萃取。菌株代谢产物粗提物的获取部分菌株发酵产物粗提物干重情况：菌株编号发酵液产物粗提物干重（mg）菌株编号发酵液产物粗提物干重（mg）XI59185.5XI2336.3XI30170.1XI230.3XI36166.1XI2021.2XI18155.4XI4618.3XI35108.7XI4016.2XI3291.6XI1115.8XI882.4XI2914.2XI3871.3XI114.1XI968.9XI611.3XI1460.2XI4811.0XI4549.9XI1010.4XI4348.5XI4110.2XI5045.9XI59.4XI2841.9XI259.4XI2139.4XI449.3XI3439.0XI248.0XI337.4XI137.6XI3137.2XI76.636株菌株对植物促生/抑生活性初步筛选10μg/ml200μg/ml菌株平均根长RIRI绝对值菌株平均根长RIRI绝对值XI201.62-0.580.58XI250.00-1.001.00XI251.90-0.510.51XI50.01-1.001.00XI51.95-0.490.49XI100.10-0.970.97XI172.39-0.380.38XI180.14-0.960.96XI112.63-0.320.32XI140.16-0.960.96XI382.68-0.300.30XI460.25-0.940.94XI84.780.240.24XI110.26-0.930.93XI294.740.230.23XI310.27-0.930.93XI134.590.190.19XI282.24-0.420.42XI483.19-0.170.17XI322.68-0.300.30XI234.500.170.17XI382.87-0.250.25XI104.400.140.14XI362.90-0.250.25XI14.370.140.14XI432.97-0.230.23XI24.350.130.13XI483.04-0.210.21XI73.37-0.130.13XI234.460.160.16XI344.330.120.12XI343.29-0.150.15XI284.270.110.11XI13.32-0.140.14XI363.44-0.110.11XI73.38-0.120.12XI454.260.110.11XI244.230.100.10XI213.46-0.100.10XI174.230.100.10XI34.230.100.10XI134.220.100.10XI444.220.100.10XI304.200.090.09XI304.190.090.09XI204.180.090.09XI463.57-0.070.07XI414.180.090.09XI244.080.060.06XI294.170.080.08XI404.070.060.06XI64.170.080.08XI94.000.040.04XI24.150.080.08XI323.990.040.04XI403.61-0.060.06XI353.71-0.040.04XI454.090.060.06XI143.73-0.030.03XI84.070.060.06XI313.73-0.030.03XI214.000.040.04XI63.950.030.03XI443.71-0.040.04XI503.920.020.02XI33.960.030.03XI183.79-0.010.01XI503.920.020.02XI413.80-0.010.01XI93.80-0.010.01XI433.840.000.00XI353.83-0.010.01早熟禾根长化感效应指数（RI）RI0表示促进作用，RI0表示抑制作用，其绝对值大小表示化感作用强弱。36株菌株对植物促生/抑生活性初步筛选10μg/ml200μg/ml菌株平均根长RIRI绝对值菌株平均根长RIRI绝对值XI250.32-0.810.81XI250.00-1.001.00XI50.35-0.790.79XI293.220.930.93XI212.910.740.74XI280.10-0.940.94XI282.850.710.71XI60.10-0.940.94XI142.790.670.67XI50.15-0.910.91XI352.770.660.66XI442.980.780.78XI452.630.570.57XI180.35-0.790.79XI292.590.550.55XI110.38-0.780.78XI92.570.5