荧光法测定乙酰水杨酸和水杨酸

2020/5/13荧光法测定乙酰水杨酸和水杨酸实验化学3-2（仪器分析实验）2020/5/131、实验目的（1）掌握荧光法测定药物中乙酰水杨酸的方法（2）了解CaryEclipse型荧光光谱仪的基本操作（3）强化称量、移液、配溶液等基本操作2020/5/13实验原理电子处于激发态是不稳定状态，返回基态时，通过辐射跃迁(发光)和无辐射跃迁等方式失去能量；传递途径辐射跃迁荧光延迟荧光磷光内转移外转移系间跨越振动弛预无辐射跃迁激发态停留时间短、返回速度快的途径，发生的几率大，发光强度相对大；荧光：10-7～10-9s,第一激发单重态的最低振动能级→基态；磷光：10-3～10s；第一激发三重态的最低振动能级→基态；2020/5/13S2S1S0T1吸收发射荧光发射磷光系间跨越内转换振动弛豫能量l2l1l3外转换l2T2内转换振动弛豫2020/5/13辐射能量传递过程荧光发射：电子由第一激发单重态的最低振动能级→基态（多为S1→S0跃迁），发射波长为l‘2的荧光；10-7～10-9s。由图可见，发射荧光的能量比分子吸收的能量小，波长长；l‘2l2l1；磷光发射：电子由第一激发三重态的最低振动能级→基态（T1→S0跃迁）；电子由S0进入T1的可能过程：（S0→T1禁阻跃迁）S0→激发→振动弛豫→内转移→系间跨越→振动弛豫→T1发光速度很慢：10-3～10s。光照停止后，可持续一段时间。2020/5/13溶液浓度与荧光强度的关系有线性关系：荧光强度If正比于吸收的光量Ia和荧光量子效率：If=Ia由朗-比耳定律：Ia=I0(1-10-lc)If=I0(1-10-lc)=I0(1-e-2.3lc)浓度很低时，将括号项近似处理后：If=2.3I0lc=Kc2020/5/13分子产生荧光必须具备的条件1）具有合适的结构；2）具有一定的荧光量子产率。荧光量子产率（）：吸收的光量子数发射的光量子数荧光量子产率与激发态能量释放各过程的速率常数有关，如外转换过程速度快，不出现荧光发射；2020/5/13仪器结构流程测量荧光的仪器主要由四个部分组成：激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。基本流程如图：单色器：选择激发光波长的第一单色器和选择发射光(测量)波长的第二单色器；光源：灯和高压汞灯，染料激光器(可见与紫外区)检测器：光电倍增管。2020/5/13荧光分析方法特点1）灵敏度高比紫外-可见分光光度法高2～4个数量级；为什么？检测下限：0.1～0.1g/cm-3相对灵敏度：0.05mol/L奎宁硫酸氢盐的硫酸溶液。2）选择性强既可依据特征发射光谱，又可根据特征吸收光谱；3）试样量少缺点：应用范围小。2020/5/13仪器与试剂仪器：CaryEclipse荧光光谱仪，石英比色皿，容量瓶，移液管，玻璃注射器，漏斗，量筒，滤纸。试剂：乙酰水杨酸，水杨酸，乙醇，阿司匹林药片。2020/5/13实验步骤1、ASA和SA贮备溶液的配制（1）ASA贮备液的配制：称取0.4000g乙酰水杨酸溶于1％醋酸-氯仿溶液中，用1％醋酸—氯仿溶液定容于1000mL容量瓶中，摇匀，备用；（2）SA贮备液的配制：称取0.750g水杨酸溶于1％醋酸—氯仿溶液中，用1％醋酸—氯仿溶液定容于1000mL容量瓶中，摇匀，备用。2、ASA和SA激发光谱和荧光光谱的绘制将ASA和SA贮备液分别稀释100倍(分二次完成，每次稀释10倍)。用得到的溶液分别扫描ASA和SA的激发光谱和荧光光谱曲线，并分别确定它们的最大激发波长和最大发射波长。3、标准曲线的制作(1)ASA标准曲线的制作用移液管分别准确移取浓度为4.00μg·mL-1的ASA溶液2、4、6、8、10mL至5只50mL容量瓶中，用1％醋酸—氯仿溶液稀至刻度，摇匀。分别测量它们的荧光强度.(2)SA标准曲线的制作用移液管分别准确移取浓度为7.5μg·mL-1的SA溶液2、4、6、8、l0mL至5只50mL容量瓶中，用1％醋酸—氯仿溶液稀释至刻度，摇匀。分别测量它们的荧光强度．2020/5/134、阿斯匹林药片中乙酰水杨酸和水杨酸的测定取5片阿司匹林药片磨成粉末，准确称取0.40mg用1％醋酸—氯仿溶液溶解，全部转移至100mL容量瓶中，用1％醋酸—氯仿溶液稀释至刻度。迅速通过定量滤纸干过滤，用该滤液在与标准溶液同样的测定条件下测量SA荧光强度。将上述滤液稀释1000倍(用三次稀释来完成)，在与标准溶液同样的测定条件下测量ASA荧光强度。数据处理1、从绘制的ASA和SA激发光谱和荧光光谱曲线上，确定它们的最大激发波长和最大发射波长。2、分别绘制ASA和SA的标准曲线，从标准曲线上确定试样溶液中ASA和SA的浓度，并计算每片阿斯匹林药片中ASA和SA的含量(mg)，将ASA测定值与说明书上的值比较。2020/5/13实验指导1、溶剂用量控制在600mL，要求提高清洗效率，减少移取溶剂时的损失，以节约试剂，同时保护健康和环境。2、用加长的胶头滴管移取少量的试剂，切忌直接倾倒。3、容量瓶使用25mL，注意相应液体体积的改动4、要保证实验过程无水5、在做标准曲线时，在做每一个点前，一定要用这个点的溶液清洗比色皿至少三次，以保证能作出曲线。6、比色皿的检测面和放入检测腔的位置一定要固定。