药物的鉴别试验

第二章药物的鉴别试验第二章药物的鉴别试验基本要求1、掌握常用一般鉴别试验的原理、操作方法。2、熟悉鉴别试验条件对结果的影响。学习要点1、化学鉴别法--呈色、沉淀、荧光、气体、测定mp。2、光谱鉴别法--红外法（对照图谱）；紫外法（对比特征参数λmax，E1%1cm，A，λmin；比较吸收度比值Al/A2的一致性；对比吸收光谱的一致性）。3、色谱法--HPLC、TLC、GC等（采用标准品对照法）。内容》概述》鉴别试验项目》鉴别方法》鉴别试验条件》鉴别试验灵敏度一、概述药物的鉴别试验（identificationtest）——判断药物的真伪药品质量检验的首项任务药典收载的鉴别试验——均为用来证实贮藏的药物是否为其所标示的药物。这些方法有一定的专属性，但不能赖以鉴别未知物。对于原料药，还应结合性状项下的外观和物理常数进行综合判断。二、鉴别试验的项目鉴别1、性状(description)2、鉴别(identification)性状----反映了药物特有的物理性质包括:1、外观————聚集状态、晶型、色、臭、味2、物理常数——mp,bp,[a]tD,E1%1cm,η等3、溶解度4、熔点：1、固体----液体的温度2、熔融同时分解的温度3、初熔-全熔的一段温度5、ChP收载方法第一法：测定易粉碎的固体药品第二法：测定不易粉碎的固体药品第三法：测定凡士林或其他类似物6、要求报告初熔和终熔7、比旋度：在一定波长（589.3nm）与温度（20°C）下，偏振光透过长1dm，含旋光性物质1g/1mL的溶液时测得的旋光度a，称为比旋度。[a]tD=是手性药物特性及其纯度的主要指标。8、吸收系数在给定波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度（C）、单位液层厚度（L）时的吸收度，称为吸收系数（E1%1cm或e）。E1%1cm=A/C×LC=1%或1mol/L，L=1cm一般鉴别试验（generalidentificationtest）依据某一类药物的化学结构或理化性质的特征，通过化学反应来鉴别药物的真伪。有机药物:官能团反应。无机药物:阴、阳离子的反应阴、阳离子的特殊反应例钠盐、钾盐、钙盐的焰色反应铵盐鉴别方法氯化物鉴别——供试液＋硝酸＋硝酸银→白色↓白色↓＋氨试液→沉淀溶解＋硝酸→白色↓硫酸盐鉴别——供试液＋氯化钡→白色↓白色↓＋硝酸（盐酸）→沉淀不溶有机药物——典型的官能团反应。包括：丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类、有机氟化物类、水杨酸盐、枸橼酸盐、乳酸盐等鉴别。例有机氟化物鉴别样品经氧瓶燃烧法破坏，被碱性溶液吸收成为无机氟化物，与茜素氟蓝、硝酸亚铈在pH4.3溶液中形成篮紫色络合物。反应原理如下：由上可知，一般鉴别试验只能证实是某一类药物，而不能证实是哪一种药物。专属鉴别试验（specificidentificationtest）是证实某一种药物的依据。根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性不同，选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪。例巴比妥类药物含有共同母核，区别在于5，5-位取代基和2-位取代基的不同：苯巴比妥---苯环司可巴比妥---双键硫喷妥钠---硫原子又如甾体激素类药物含有环戊烷并多氢菲母核，主要差别在A环和D环的取代基不同，可利用这些结构特征进行鉴别确证。综上所述，一般鉴别试验是以某些类别药物的共同化学结构为依据，根据其相同的物理化学性质进行药物真伪的鉴别，以区别不同类别的药物。而专属鉴别试验，则是在一般鉴别试验的基础上，利用各种药物的化学结构差异，来鉴别药物，以区别同类药物或具有相同化学结构部分的各个药物单体，达到最终确证药物真伪的目的。三、鉴别方法要求：专属，再现，灵敏，操作简便、快速常用方法有：(一)、化学鉴别法——呈色，沉淀，荧光，气体—三氯化铁呈色反应----酚羟基；—异羟肟酸铁反应----芳酸、酯、酰胺；—茚三酮呈色反应----类似氨基酸结构；—重氮化-偶合显色反应---芳伯氨基；—氧化还原显色等等。●与重金属离子的沉淀反应；●与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应。●药物本身产生荧光；●与各种试剂（硫酸、溴、间苯二酚等）反应后产生荧光；☆强碱处理，加热，产生氨（胺）气；☆强酸处理，加热，发生硫化氢气体；☆直火加热，生成紫色碘蒸气；☆硫酸水解，加乙醇产生醋酸乙酯香味。(二)、光谱鉴别法——紫外法——在指定溶剂中测定2～3个特定波长处的吸收度比值（峰值与峰值比或峰值与峰谷比），以提高专属性。例地蒽酚的鉴别试验：取含量测定项下的溶液，照分光光度法测定，于240～400nm的波长范围内测定吸收度，在257、289与356nm的波长处有最大吸收。规定：A257/A289应为1.06～1.10；A356/A289应为0.90～0.94。对于一个药物多个吸收峰的峰值相差较大时，采用单一浓度不易观察到全部吸收峰，可采用两种浓度的供试液分别测定其最大吸收波长。例氯贝丁酯的鉴别试验：取本品，加无水乙醇制成每1mL中含0.10mg的溶液（1）与每1mL中含10ug的溶液（2），照分光光度法测定，溶液（2）在226nm的波长处有最大吸收；溶液（1）在280与288nm的波长处有最大吸收。综上所述，紫外鉴别方法通常有（1）λmax，λmin（2）λ-A（3）λ-吸收系数（4）λA1/λA2（5）化学处理后测定产物的光谱特性不同国家测定方法略有不同：USP（27）采用对照品法，将样品与对照品按同法处理，在200～400nm波长范围内扫描两溶液，要求在相同的波长处有最大吸收、最小吸收和相同的吸收系数，或吸收比在规定的限度内。JP（14）测定方法与中国药典相似。BP（2000）规定一定波长范围内仅有一个最大吸收或一个最小吸收。红外光谱鉴别法红外光谱法是一种专属性很强、应用较广（固体、液体、气体样品）的鉴别方法。主要用于组分单一、结构明确的原料药，特别适合于用其他方法不易区分的同类药物，如磺胺类、甾体激素类和半合成抗生素类药品。Ch.P和BP均采用标准图谱对照法，中国药典对××药物的鉴别试验：本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集××图）一致。而USP则采用对照品法，例阿莫西林的鉴别试验：取本品，经干燥后用溴化钾压片法测定，所得图谱与USP阿莫西林参考标准品的图谱一致。JP采用规定条件下测定一定波数处的特征吸收峰。例：氯羟去甲安定的测定取本品，经干燥后用溴化钾压片法测定，其红外光吸收图谱中3440cm-1，3220cm-1，1695cm-1，1614cm-1，1324cm-1，1132cm-1以及828cm-1波数附近处有吸收。中国药典试样制备有四种方法：压片法——用于固体（溴化钾）糊法——用于固体膜法——用于液体溶液法——用于液体测定前应录制聚苯乙烯薄膜光谱图，并与标准谱图对照，以检查仪器性能。（三）、色谱（TLC，HPLC，GC）鉴别法——利用物质各自的特征色谱行为（Rf值或tR值）进行鉴别试验。采用与对照品在相同条件下进行色谱分离，根据两者保留行为和检测结果是否一致来验证药品的真伪。药物鉴别方法新动向：☆仪器方法用于药物的鉴别数量大大增加，尤其是IR法和HPLC法。☆英美药典采用的仪器鉴别法与化学鉴别法的条目比约是2：1。☆制剂广泛采用IR法鉴别，采取提取分离后再压片绘制图谱。☆鉴别条目简练，选择专属的方法进行鉴别，平均每个品种收载2条左右。四、鉴别试验条件鉴别试验必须在规定条件下完成，否则将会影响结果的判断。影响因素主要有：（1）被测物浓度；（2）试剂的用量；（3）溶液的温度；（4）溶液pH；（5）反应时间；（6）共存的干扰物质等五、鉴别试验的灵敏度鉴别试验是以灵敏的专属反应为依据，在合适的条件下进行试验判定的。如果鉴别反应的灵敏度愈高，则所需要的药物量就愈少。在一定条件下，能在尽可能稀的溶液中观测出尽可能少量的供试品，反应对这一要求所能满足的程度，即称为反应的灵敏度（sensitivity）。它用两个相互有关的量来表示：1、最低检出量（又称检出限量）（minimumdetectablequantity）以m表示，即应用某一反应，在一定的条件下，能够观测出结果的供试品的最小量，其单位通常用微克（ug）表示。最低检出量愈小，反应愈灵敏。2、最低检出浓度（又称界限浓度）（minimumdetectableconcentration）在一定条件下，若1份被测物溶解在G份溶剂中能被测出，而在大于G份溶剂中不能被检出，则1：G就是这一供试品的最低检出浓度。最低检出量和最低检出浓度之间的关系1：G=（m/106）：Vm=V/G×106空白试验（blanktest）——在与供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其它试剂均同样加入而进行的试验。提高反应灵敏度的方法加与水互不相溶的有机溶剂提取；改进观测方法：目视法-仪器法。