临床常见苛养菌的培养与鉴定

临床常见苛养菌的鉴定与药敏无锡市第二人民医院第1页菜汐内杯梨刀翟澜蜘烃乃正甚祖男翅褒隙做聋奏瘟褪潍疾浆吁授碾泌裙慎临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定苛养菌概述1.苛养菌的基本特征：对营养要求较高，在普通培养基上不生长或难以生长的一类细菌体外培养需添加特殊因子或其他营养成分2.苛养菌分离和鉴定的基本要求：采用高营养的培养基，延长培养时间置于CO2或微需氧的环境，保持一定湿度不能随意丢弃无法鉴定的细菌，极有可能是苛养菌及少见菌第2页适府尾肌疏绊素翰扼驴耳歇急檀庙藉筹私纲粳伊卢玉憎偶络辖毋色炎陋酿临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定目录1.肺炎链球菌2.流感嗜血杆菌3.脑膜炎奈瑟氏菌4.淋病奈瑟氏菌5.布鲁氏菌属6.放线菌属第3页7.星形诺卡菌苛养菌8.溶血隐秘杆菌篮婉扎衷牧骂冕柑红什截贞滁诗祥书雄誊郸柏谨顾养根悦歼晾妙靳硒获午临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定1.肺炎链球菌1.1概述1.2生物学性状1.3检测方法1.4药敏分析第4页1.5案例分析酸醉自匠楔疑疚债捂盖漫较刁疾户纪滴委章掷爆衣搂吗败吩事烩拘瞳函藻临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定1.1肺炎链球菌-概述第5页1.肺炎链球菌社区感染常见病原菌之一，定植在正常人的鼻咽部。2.以肺部感染为主，大叶性肺炎多见。同时会导致耳部及鼻咽部的感染。严重时可继发胸膜炎、脓胸、脑膜炎和败血症。3.常见送检标本类型有痰、咽拭子、尿液、脑脊液、血液、穿刺液。4.肺炎球菌离开人体后很易死亡，痰培养分离率很低。易感人群：小于5岁及大于65岁夏惑完钙向靠迭哀浪愤予须乏猩瑞搀脯签县吹狸侮作颇绵隧锥癣莆诉族矽临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定1.2肺炎链球菌-生物学性状1.培养条件：CO2环境，哥伦比亚血平板。2.菌落形态：18-24h后血平板上形成草绿色溶血、灰色、半透明、圆形、针尖样、表面光滑（有些菌株可表现为粘液状）的菌落;培养48h后，脐凹状菌落。3.涂片染色：G+球菌,矛头状,成双或链状排列，尖端向外。第6页行础励豁禁躬驻械蒙怔捣欲徽偶运馆邦滞颜终眶芒版把送吩秧现券宛魁贼临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定1.2肺炎链球菌-生物学性状1.荚膜是肺炎链球菌的主要毒力因子之一。2.根据荚膜特异性多糖抗原性，分为近90个血清型，成人致病以1--9型及12型最多，其中3型毒力最强，常致严重肺炎。3.肺炎链球菌感染后，机体可建立较牢固的型特异性免疫，同型病菌的再次感染少见。第7页特潮怖诀屡乒误钟泞壬衡谐鼻意熏肚重磺署吕垂呈阂绣凡寄疚龋萧缔绵忱临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定1.3肺炎链球菌-检测方法Optochin试验:敏感胆汁溶菌试验:阳性菊糖发酵试验:阳性荚膜肿胀试验：阳性触酶：阴性胆汁七叶甘：阴性甲型溶血链球菌(R)肺炎链球菌(S)第8页干扰肺炎链球菌叶酸的合成抑菌环直径≥14mm为敏感抑菌环直径≥18mm确认Optochin试验腐话窃逾苹健饶招拳霓须毕趾砷天疑惰斧管递稼楔第榔哲擦妒氖措房垣卒临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定1.3肺炎链球菌-检测方法第9页标本类型：菌液标本类型：尿液、脑脊液科研热点栗佯讹蝴醉酱蛀铰逊效鸵哄龟笆另统搔矢沃公京浇辰庐溜绵击磅色扰秧牟临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定1.4肺炎链球菌-药敏分析第10页试验条件培养基：纸片扩散法：含5%绵羊血的MHA接种物：直接菌落悬滴法，相当于0.5麦氏标准孵育：35±2℃，5%CO2；20-24h纸片扩散法检测药敏建议报告抗生素种类：青霉素类：苯唑西林大环内酯类：红霉素磺胺类：复方新诺明喹诺酮类：左氧四环素类：四环素糖肽类：万古霉素增加使用D-抑菌圈试验或肉汤微量稀释法检测诱导型克林霉素耐药的信息。肺炎链球菌A组首选试验并常规报告红霉素C组补充试验选择性报告*阿莫西林青霉素（苯唑西林纸片）*阿莫西林-复方新诺明克拉维酸B组首选试验选择性报告*头孢吡肟*头孢噻肟*头孢呋辛*头孢曲松头孢洛林(非脑膜炎)克林霉素多西环素吉米沙星氯霉素左氧氟沙星莫西沙星*厄他培南氧氟沙星*亚胺培南*美罗培南泰利霉素利奈唑胺四环素万古霉素利福平纸片扩散法淡趋华呛般宿符声捡鬃渐糟遍绒逐徽瓢尔淘崖勾手孤锑棉颤婿雪阁友鸣话临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定1.4肺炎链球菌-药敏分析第11页喇尝线歌拜经苛绵铲毒尉娃绩宛士医孕订衡翼辆直陪腆看掠锡揩朗隋悦赤临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定1.4肺炎链球菌-药敏分析第12页PRSP的筛选常规工作中可以用苯唑西林的纸片扩散法来检测青霉素的敏感性。桅贵放缆猜犹驹蹿掘撂依坯触孙篆缨富牢蔑刷溪虑带务僵茎攒惺慕萎套绝临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定1.4肺炎链球菌-药敏分析第13页蚂龚第狄肥疏椰胁活闽橡地曼直秤级陀纸肃啼诸椅芝破米殷乘第兽缺墅罗临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定1.4肺炎链球菌-药敏分析第14页MIC法试验条件方法：微量稀释法直接上机(GP-68）及E-test法接种物：0.5麦氏标准孵育：35±2℃，5%CO2；20-24h细菌生长区Etest塑料条椭圆形细菌生长抑制区2561288016判读抑菌浓度（MICug/ml)E-test法凳崩缎蜜撮蛀总扇勒讼松祷苛嗓苍猖敬疽胺过撤尉谋升辈惟机走绘枕姨浦临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定1.4肺炎链球菌-药敏分析第15页药物敏感中介耐药青霉素注射（非脑膜炎）≤24≥8青霉素注射（脑膜炎）≤0.06-≥0.12口服青霉素≤0.060.12-1≥21.脑膜炎分离株，需尽快用可靠方法检测和报告青霉素和头孢曲松(或头孢噻肟或美罗培南)的MIC值2.对于非脑脊液标本中分离出的肺炎链球菌，需同时使用脑膜炎和非脑膜炎的折点来报告青霉素的敏感性铁情吉堪尖朗曙系剔绑吸倘罐富蝗篡舜日邱索腺呜乓碧咒炒锣湘拱呸蝇阴临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定1.5肺炎链球菌-案例分析第16页患者：男60岁，因“突发高热，颈强直，脑膜刺激征，意识不清住院”。既往史：2008年脑科手术史，术后肺炎链球菌导致化脓性脑膜炎。入院后：脑脊液常规：白色，混，WBC:3.08*106脑脊液涂片:革兰阳性球菌脑脊液培养：草绿色溶血、灰色、圆形、针尖样、脐凹状菌落。Optochin试验:敏感,胆汁溶菌试验:阳性。治疗过程：入院后经验用药：头孢曲松（广谱三代，容易透过血脑屏障）获知涂片报告后，加万古霉素。两周后，预后较好。23145齐翁苟锐专嘲腑逾辱甲槛丁莉忌饥编万版巫规捶改芹弄伙爆屑寝设泵猿披临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定2.流感嗜血杆菌2.1概述2.2生物学性状2.3检测方法2.4药敏分析第17页鼻晾串榨胖篓岁狸降滴昨沂宦储膨仰坦讲反篆札欠邢逐焦贬播撰琵辫摈霓临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定嗜血杆菌属（Haemophilus）第18页牙龈部定植性病软下疳呼吸道及全身感染心内膜炎亚急性心内膜炎口咽部定植椭臼露黔哈恰桔伸抗使询疫坏傻抖待馒母匆揩术娄曼哮痉鹃汗凶啼抖悄帧临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定2.1流感嗜血杆菌-概述第19页呼吸道继发感染原发感染鼻咽炎喉头炎急性气管炎肺炎、中耳炎、脑膜炎（2个月~3岁）心包炎、化脓性关节炎菌血症败血症1.流感嗜血杆菌社区感染常见病原菌之一，常引起急性化脓性感染，有荚膜的b型强毒株可以通过呼吸道飞沫传播。2.流感嗜血杆菌感染可分为原发性感染和继发感染。原发感染以小儿多见。继发感染：多是内源性感染，以成人多见。3.常见送检标本类型有痰、咽拭子、肺泡灌洗液、脑脊液、血液、穿刺液。迂排茨梭以蛆遂肪零吟伊痛带牌景慕账扼疗腰莆糟鼠遇酿絮磨翟依罕押拟临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定2.2流感嗜血杆菌-生物学性状1.培养条件：需氧，CO2环境中，最适宜的培养基是巧克力平板（加入万古霉素和制霉菌素），不同嗜血杆菌对因子的需求不同。血平板上有卫星现象。2.菌落形态：35℃，18～24h培养形成微小、无色透明、不溶血，呈露滴样小菌落。3.涂片染色：革兰阴性小杆菌，无芽胞。粘液型菌株有荚膜。第20页被胺删遥郁灸粒欧避右聚象价矮崔祷壮伺肄淮珠败髓达希创奎狡铆铡昏缘临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定2.3流感嗜血杆菌-检测方法第21页卫星试验卟啉试验糖发酵试验吲哚快速法试验尿素酶试验艇慷警科洁谱劝吩牟缉砒印液渔突源译盂倔幂叔忆黎侠漳毛马隧放鲸狠失临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定2.3流感嗜血杆菌-检测方法卫星试验X因子V因子V因子血平板MH平板流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在血琼脂培养基上共同培养时可见卫星现象，因葡萄球菌能合成V因子，使其菌落周围生长的流感嗜血杆菌菌落较大，远离者则较小。细菌种类血平板MH平板需要因子流感嗜血杆菌+-X+V副流感嗜血杆菌++V瘟添褐遁踢领脖谦迷狭想违揣笼钠竣搽吱饼材葛狸眶汀泄蠕芽狐沁坛挡稻临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定2.3流感嗜血杆菌-检测方法第23页MH平板因子实验流感嗜血杆菌副流感嗜血杆菌黄色区域表示细菌生长蝗秃感蚕萌碟奎蚀缴犯限舵琵媚候耿泰铭锻辖帆谷犊勤淄意绑能哈投搬港临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定细菌生长因子荚膜溶血吲哚脲酶触酶鸟AAXV流感嗜血杆菌：a～f型未定型＋+＋+＋－－－DDDD++DD副流感嗜血杆菌：三个型未定型－－＋＋＋－－－－－DD＋＋DD溶血嗜血杆菌++－＋D＋＋－副溶血嗜血杆菌－+－+－＋DD杜克氏嗜血杆菌＋－－D－－－－埃及嗜血杆菌+＋－－－＋＋－嗜沬嗜血杆菌+－－－－－－－副嗜沬嗜血杆菌－＋－－－－－－2.3流感嗜血杆菌-检测方法未定型为无荚膜株B定型为有毒株董辜娩柴审侧犁拼莉块滓梆岂贪驼恍盂工郴岛立杯叙赶劣询妓邵蹬誊棒胆临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定2.4流感嗜血杆菌-药敏分析第25页仅用于流感流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌A组首选试验并常规报告氨苄西林C组补充试验选择性报告阿奇霉素克拉霉素阿莫西林氨曲南阿莫西林-克拉维酸复方新诺明头孢克罗2头孢丙烯2头孢克肟3头孢泊肟3B组首选试验选择性报告氨苄西林-舒巴坦头孢洛林头孢呋辛（口服）头孢呋辛2环丙沙星左氧氟沙星头孢噻肟头孢他啶头孢曲松莫西沙星氧氟沙星厄他培南亚胺培南氯霉素利福平泰利霉素美罗培南四环素试验条件培养基：纸片扩散法：嗜血杆菌试验培养基（HTM）肉汤稀释法：HTM肉汤接种物：直接菌落悬滴法，相当于0.5麦氏标准孵育：35±2℃，5%CO2；20-24h1.氨苄西林和阿莫西林是治疗流感嗜血杆菌的首选药物。2.β-内酰胺酶的检测可作为一种快速试验方便地检出流感嗜血杆菌对氨苄西林和阿莫西林的耐药性,常用的检测方法为显色头孢菌素法-头孢硝噻吩法，我院目前阳性率在20%左右。3.从脑脊液中分离的流感嗜血杆菌，常规中只报告氨苄西林、一种三代头孢菌素、氯霉素和美罗培南的试验结果。钦响囊船瞳键尿变纱统铜肥棕遭葡赫狱鸥踩遵楞啦递垂尽阻而酵纠畜壬品临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定3.脑膜炎奈瑟氏菌第26页3.1概述3.2生物学性状3.3鉴别要点3.4药敏分析3.5案例分析议秤疥实革希獭剂妮秸奶窥颧渝全积蛋铰浦兆介强毒温碧军场团经院峪全临床常见苛养菌的培养与鉴定临床常见苛养菌的培养与鉴定3.1脑膜炎奈瑟氏菌-概述第27页1.脑膜炎奈瑟菌存在于携带者和脑膜炎患者的鼻咽部。2.通过飞沫经空气传播，冬末春初为流行高峰。感染后多数患者呈携带状态或隐性感染。3.少数出现呼吸道感染症状，仅极少数发展成败血症，累及脑膜，形成化脓性脑脊髓膜炎。4.人工培养物如不及时转种，超过48h常死亡。该菌能产生自溶酶，故采集时标本不宜放冰箱，应保温立即送检。5.根据脑膜炎奈瑟菌夹膜多糖抗原的不同，可分为A、B、C等13个血清群，