临床细菌学检验的质量控制

临床细菌学检验的质量控制概念质量控制（Qualitycontrol）是临床微生物学实验室为了保证检验结果实事求是地反映客观存在而建立的操作程序体系目的临床微生物学的质量控制是保证细菌的直接涂片、培养、鉴定、药敏试验及血清学试验等的准确性，避免因操作变化导致检验结果错误，造成误诊内容室内质量控制实验室内部质量保证的核心和基础室间质量控制评价外部组织或机构质量评价室内质量控制对细菌检验人员的要求操作手册仪器设备的功能监测培养基的质量控制试剂、染色液及抗血清的质控临床标本检验过程的质量控制标准菌株的来源和保存一、对细菌检验人员的要求高度的主观判断力个人的技能、经验细菌学的专业水平培训班实验室进修学术交流专业期刊室内质量控制对细菌检验人员的要求操作手册仪器设备的功能监测培养基的质量控制试剂、染色液及抗血清的质控临床标本检验过程的质量控制标准菌株的来源和保存二、操作手册各级人员的职责和权限实验室安全措施标本采集和处理指南细菌检验项目培养基和试剂的配制方法室内和室间质量控制参考数据二、操作手册参考书：诊断细菌学实用临床微生物诊断学临床微生物学诊断与图解全国临床检验操作规程临床微生物学和微生物学检验ManualofClinicalMicrobiology室内质量控制对细菌检验人员的要求操作手册仪器设备的功能监测培养基的质量控制试剂、染色液及抗血清的质控临床标本检验过程的质量控制标准菌株的来源和保存三、仪器设备的功能监测高压灭菌器：定期监测（每月一次）生物指示剂：嗜热脂肪芽孢杆菌化学指示剂：变色的指示带培养箱、冰箱、水浴箱：每日早、晚两次温度观测，绘制温度曲线图三、仪器设备的功能监测厌氧培养装置：化学标记：美蓝生物学指标：铜绿假单胞菌CO2培养箱：每天检查箱内的CO2含量三、仪器设备的功能监测生物安全柜：定期更换滤网，紫外线每3月检查1次细菌培养仪：每批培养瓶进行少量生长试验有效期内使用微生物鉴定仪及时更新软件每批号鉴定卡用标准菌株测定三、仪器设备的功能监测设备控制标准允许范围高压灭菌器121℃≥121℃培养箱35℃±1℃水浴箱37℃±0.5℃冰箱4℃±2℃低温冰箱-20℃±5℃CO2培养箱5%~10%10%室内质量控制对细菌检验人员的要求操作手册仪器设备的功能监测培养基的质量控制试剂、染色液及抗血清的质控临床标本检验过程的质量控制标准菌株的来源和保存四、培养基的质量控制(1)配制记录：培养基的制作过程必须统一无论是培养基或添加剂的剂量、pH值、高温灭菌的时间或温度，都需遵照规定培养基名称、本批配制量、配方、配制日期和配制人员姓名都必须详细记录四、培养基的质量控制(2)培养基外观的检查：新配或新购入的培养基必须先以肉眼检查其颜色与透明度，培养基应澄清，无浑浊培养基的色泽不正常应测其pH值，不得超过所预期值的±0.2平板培养基最易脱水，应放在严密的有盖容器内或塑料袋内。这样平板内培养基可保存两周左右，试管内培养基可保存1-2个月四、培养基的质量控制(3)无菌试验：每批配好的培养基须进行无菌试验随机选取5%~10%的量，如果配制大量的培养基，则任意选取10个平板或管装培养基，35℃温度下隔夜培养，证明无菌生长为合格四、培养基的质量控制(4)培养基的量：平板培养基的厚度一般为3mm(90mm平皿+15~20ml培养基）药敏试验用为4mm(90mm平皿+25ml培养基）斜面不超过试管的2/3四、培养基的质量控制(5)培养基的有效性试验：每一批新制或新购的培养基，使用前均须取已知性质的标准菌株试验是否能支持，区分或选择某类细菌的生长培养基的试验结果需要加以记录，项目包括试验日期、试验结果以及实验者的签名等。且此记录本需便于检验室人员的查看，以便能随时解决任何发生的难题四、培养基的质量控制表2常用培养基的质量控制培养基质控菌种生长情况结果血琼脂巧克力琼脂营养琼脂麦康凯琼脂中国蓝琼脂SS琼脂沙保罗琼脂化脓链球菌肺炎链球菌流感嗜血杆菌金黄色葡萄球菌大肠埃希菌福氏志贺菌金黄色葡萄球菌大肠埃希菌福氏志贺菌金黄色葡萄球菌产气肠杆菌鼠伤寒沙门菌大肠埃希菌白色假丝酵母菌++++++-++-++-+明显乙型溶血环甲型溶血环24h生长生长分解乳糖，菌落红色不分解乳糖，菌落无色透明不生长分解乳糖，菌落蓝色不分解乳糖，菌落无色不生长粉红色菌落无色菌落，中心黑色四、培养基的质量控制表2常用培养基的质量控制生长生长，溶血生长部分抑制生长，黄色菌落生长，蓝绿色菌落大量生长抑制生长++++++-脆弱拟杆菌产气荚膜梭菌菌空肠弯曲菌大肠埃希菌霍乱弧菌副溶血弧菌霍乱弧菌大肠埃希菌厌氧血平板弯曲菌琼脂TCBS琼脂碱性蛋白胨水结果生长情况质控菌种培养基四、培养基的质量控制(6)培养基的有效期：培养基有效期的长短应参考诊断细菌学书籍若购买现用的培养基，均应注意有效期的标示是否正确，如血平板的有效期为3星期，厌氧菌分离培养基为1-2星期等室内质量控制对细菌检验人员的要求操作手册仪器设备的功能监测培养基的质量控制试剂、染色液及抗血清的质控临床标本检验过程的质量控制标准菌株的来源和保存五、试剂、染色液及抗血清的质控染色液的质量控制染色液要标明配制或购入日期，必须选用适当的标准菌株作阳性及阴性对照，来鉴定染色液的性能革兰染色用金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌制备浓菌悬液，经高压灭菌后冰箱保存，作为革兰染色的质量控制，每次质控与标本同步进行五、试剂、染色液及抗血清的质控各种染色液的监控菌株染色液阳性对照菌阴性对照菌监控频度革兰染色液金黄色葡萄球菌大肠埃希菌每天抗酸染色液结核分枝杆菌每次异染颗粒染色液白喉棒状杆菌每次荚膜染色液肺炎克雷伯菌每批鞭毛染色液普通变形杆菌福氏志贺菌每次五、试剂、染色液及抗血清的质控试剂的质量控制各类试剂，在配制或购入后均应进行“有效”试验，用已知阳性及阴性菌株进行试验试剂须根据标示的配制要领或制造者的指示作适当的储存对较稳定的试剂如靛基质试剂应在配制时及每周予以检测核对，凡不稳定的试剂每天使用时均应检测，合格后才能使用五、试剂、染色液及抗血清的质控表3常用试剂的阳性、阴性对照菌株常用试剂阳性对照菌株阴性对照菌株凝固酶试剂金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌触酶试验用试剂化脓链球菌V-P试验用试剂阴沟肠杆菌大肠埃希菌大肠埃希菌阴沟肠杆菌氧化酶试剂铜绿假单胞菌大肠埃希菌靛基质试剂金黄色葡萄球菌五、试剂、染色液及抗血清的质控诊断血清的质量控制购入的沙门菌属、志贺菌属、致病性大肠杆菌的诊断血清必须立即记录其购入日期、观察其透明度、色彩有无变化和是否有沉淀物，然后置4℃冰箱保存使用前应注意检查诊断血清的批号、有效期，如发现浑浊或有絮状沉淀物时，很可能系污染所致，不能再继续使用五、试剂、染色液及抗血清的质控诊断血清的质量控制使用前还应以阳性及阴性菌株进行检测，观察其效价及特异性不得将诊断血清置室温保存,各种诊断血清均应置冰箱中4℃保存每月用标准菌株进行一次测定五、试剂、染色液及抗血清的质控临床微生物实验室诊断血清质控记录表名称检测频率质控物质控鉴定记录日期操作者沙门菌属诊断血清每月伤寒沙门菌大肠埃希菌（ATCC25922）鼠伤寒沙门菌无菌盐水伤寒沙门菌鼠伤寒沙门菌ATCC25922无菌盐水A-F多价（）（）（）（）Vi（）（）（）（）Hd（）（）（）（）Hi（）（）（）（）O4（）（）（）（）O9（）（）（）（）志贺菌属诊断血清每月福氏志贺菌宋内志贺菌大肠埃希菌（ATCC25922）无菌盐水福氏志贺菌宋内志贺菌ATCC25922无菌盐水多价血清（）（）（）（）福氏志贺菌血清（）（）（）（）宋内志贺菌血清（）（）（）（）致病性大肠埃希菌诊断血清每月EPECO126B16大肠埃希菌（ATCC25922）EPECO126B16ATCC25922OK1（）（）OK2（）（）OK3（）（）室内质量控制对细菌检验人员的要求操作手册仪器设备的功能监测培养基的质量控制试剂、染色液及抗血清的质控临床标本检验过程的质量控制标准菌株的来源和保存六、临床标本检验过程的质量控制培养前选择合理的检验项目标本采集、运送（早期采集、无菌采集、即时送检）标本的合理保存送检标本的登记：三查、三对不合格标本登记：不合格原因，注明理由退回培养中：直接诊断:直接涂片非常必要和重要分离培养：使用多种适合于可疑病原菌生长的培养基和培养条件鉴定：按鉴定程序执行，正确引导下一步鉴定六、临床标本检验过程的质量控制培养后：结果复核：是否为病原菌报告单复核临床联系阳性结果及时通知临床特别结果提示（ESBL；MRS）六、临床标本检验过程的质量控制粪便标本细菌培养的处理原则（1）标本采集：自然排便取脓血、粘液部分粪便2~3g，液体粪便取絮状物2~3ml，盛于灭菌容器内，立即送检，如排不出粪便也可用肛拭送检六、临床标本检验过程的质量控制粪便标本细菌培养的处理原则（2）直接涂片：革兰染色镜检，用于霍乱弧菌形态学检查悬滴法：米泔水样便检查流星样运动或制动试验直接涂片检查真菌孢子和假菌丝六、临床标本检验过程的质量控制粪便标本细菌培养的处理原则（3）粪便培养接种培养基：沙门—志贺菌培养：接种于SS和麦康凯平板霍乱弧菌培养：接种于碱性蛋白胨水，转种庆大平板或TCBS琼脂平板致病性大肠埃希菌培养：接种于伊红美蓝或麦康凯平板其他病原菌培养：视需要接种不同培养基六、临床标本检验过程的质量控制粪便标本细菌培养的处理原则（3）报告方式：检出××菌（腹泻病原菌及药敏结果）菌群失调（肠道正常菌群消失）：提示抗生素使用过量未检出沙门志贺菌六、临床标本检验过程的质量控制湖北医科大学附属第一医院检验科室内质控失控报告单编号：□□□□日期：年月日项目：药敏纸片生产单位：仪器型号：质控菌株：ATCC25923ATCC25922ATCC27853失控原因：1）试剂□2）鉴定卡□3）药敏纸片□4）药敏卡□5）其它（请述）：失控处理：失控前测定数据处理后测定数据12345失控判断操作者签名：质量控制负责人签名：六、临床标本检验过程的质量控制室内质量控制对细菌检验人员的要求操作手册仪器设备的功能监测培养基的质量控制试剂、染色液及抗血清的质控临床标本检验过程的质量控制标准菌株的来源和保存七、标准菌株的来源和保存标准菌株要求必须是形态、染色反应、生理生化及血清学特性典型而稳定的菌株实验结果重复性好，极少发生变异国际社会认可来源于专门机构七、标准菌株的来源和保存标准菌株来源美国典型菌种保藏中心ATCC（AmericanTypeCultureCollection）卫生部药品生物制品检定所菌种保藏中心各级临床检验中心七、标准菌株的来源和保存标准菌株的保存方法冷冻干燥法：最理想的保存方法，不改变菌种性状，保存时间长手续繁琐，需专门的冷冻干燥设备菌种保存中心均采用此法七、标准菌株的来源和保存标准菌株的保存方法冰冻保存法：此法较简单，将细菌混悬于脱纤维羊血或脱脂牛奶中，置液氮或-20℃冰箱保存但细菌经多次转种，性状可能发生变异七、标准菌株的来源和保存标准菌株的保存方法培养基保存法：最简易方便的方法，适用于大多数实验室（1）普通琼脂斜面保存法：适于一般细菌的保存，置4℃冰箱可保存1个月七、标准菌株的来源和保存标准菌株的保存方法培养基保存法：最简易方便的方法，适用于大多数实验室（2）血琼脂斜面保存法：适于链球菌，可半月转种一次。脑膜炎奈瑟氏菌应用巧克力斜面，若加液体石蜡，可延长保存期。七、标准菌株的来源和保存标准菌株的保存方法培养基保存法：（3）半固体穿刺法：穿刺培养基并加液体石蜡，置4℃冰箱可保存3-6个月，适用于肠杆菌科细菌七、标准菌株的来源和保存实验室必备质控菌株：大肠埃希菌ATCC25922大肠埃希菌ATCC35218铜绿假单胞菌ATCC27853金黄色葡萄球菌ATCC25923粪肠球菌ATCC29212室间质量评价室间质量评