Millipore 超滤管 0.5ml 中文说明书

用户指南Amicon®Ultra-0.5超滤离心管适用于体积不超过500μL的样本技术服务热线：400-889-1988-2分机技术支持邮箱：[e-mail]仅供研究使用；不适用于诊断程序默克密理博生命科学部内容提要产品简介..........................................................................................................................................................3操作步骤.......................................................................................................................................................4-5常见结果数据参考......................................................................................................................................6-8最大化样本回收率与量化回收.................................................................................................................8-9产品规格..........................................................................................................................................................9化学相容性.....................................................................................................................................................10订购信息..........................................................................................................................................................11附：常见问题与解答..............................................................................................................................12-13常用超滤产品列表................................................................................................................................14蛋白研究相关资料................................................................................................................................15简介应用所提供的材料Amicon®Ultra-0.5超滤离心管具有快速超滤功能，能够达到较高的浓缩倍数，轻松实现从稀释和复杂的混和样本中浓缩回收目的产物。垂直设计的超滤膜以及较大的有效滤膜表面积有助于快速的样本处理，获得较高的样本回收率（通常90%），并达到30倍的浓缩。根据标称分子量限值（NMWL）的不同，典型处理时间为10-30分钟。超滤膜的垂直设计也最大程度降低了溶质极化造成的滤膜结垢；过滤管的死体积设计能有效防止过度离心使样本干掉而造成样本损失。收集滤出液后，浓缩样本（截留部分）可通过一个简便的倒置（上下反转）离心步骤而实现高效回收。Amicon®Ultra-0.5超滤管未经消毒，仅供一次使用。Amicon®Ultra-0.5产品系列包括5种不同的截留分子量（即标称分子量限值，NMWL）。这些超滤管仅供研究使用，不适用于诊断程序。Amicon®Ultra-0.5超滤管提供了两个微量离心管。在操作过程中，一个用于收集滤出液，而另一个用于回收浓缩后的样本。浓缩含有抗原、抗体、酶、核酸（DNA/RNA样本，单链或双链）、噬菌体等微生物样本，外泌小体（exosome），微粒（如微珠、纳米材料）等纯化组织培养提取液或细胞裂解液中的大分子成分，去除反应液中的引物、接头或分子标记，在HPLC前去除蛋白质除盐，缓冲液更换，或渗滤•Amicon®Ultra3K超滤管—3,000NMWL•Amicon®Ultra10K超滤管—10,000NMWL•Amicon®Ultra30K超滤管—30,000NMWL•Amicon®Ultra50K超滤管—50,000NMWL•Amicon®Ultra100K超滤管—100,000NMWL•••超滤离心装置（内管）滤出液收集管浓缩液收集管3配套设备适用性评估在尝试一个新的应用或建立新操作流程时，建议进行初步的回收和截留实验。请参看“如何量化回收”部分。可容纳1.5mL微量离心管的固定角度转子离心机。注意：为了避免离心过程中设备的损坏，在离心之前请清理、检查设备。超滤管的储存（15-30℃）室温存放。预清洗Amicon®Ultra-0.5超滤管的超滤膜含有痕量甘油。如果担心干扰后续分析，可用缓冲液或Milli-Q®水进行预清洗。如果干扰仍然存在，可用0.1NNaOH清洗，再用缓冲液或Milli-Q®水进行二次清洗。注意：Amicon®Ultra超滤离心管中的滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用，则让液体保留在滤膜上，直到使用。如何使用Amicon®Ultra-0.5超滤离心管1.将Amicon®Ultra-0.5超滤内管插入所提供的一个微量离心管中。2.向Amicon®Ultra内管中加入不超过500μL的样本，并盖上盖子。3.将盖好盖子的超滤管放入离心转子中，让盖子的连接带朝着转子的中央；用一个类似的超滤管平衡。4.以14,000xg离心约10-30分钟，具体时间取决于所使用超滤管的NMWL。为了确定合适的离心时间，请参看图1和表2。5.离心结束后将整个超滤管从离心机中取出，取出内管。上样盖好盖子14,000g离心46.为了回收浓缩后的溶质，将内管倒过来插在一个干净的微量离心管中。放在离心机中，让打开的盖子朝着转子的中央；用一个类似的超滤管进行平衡。以1,000xg离心2分钟，使浓缩后的样本从超滤内管转移到收集管中。超滤液可以保存在收集管中。说明：要达到理想的回收效果，请尽早进行倒置离心。取出含有浓缩液的内管内管倒置于一个干净的外管中1,000g离心滤出液浓缩液脱盐或渗滤（Dialtration）脱盐、更换缓冲液或渗滤是从含有生物分子的溶液中去除盐分或溶剂的重要方法。盐分去除或缓冲液更换可通过Amicon®Ultra-0.5超滤管来完成，具体过程是浓缩样本，弃去滤出液，然后向浓缩液中加入任何所需的溶剂，恢复到样本原先的体积。“洗出”的过程可反复进行，直到污染微溶质的浓度被充分降低。请参看下面的例子。离心浓缩500μL1mg/mL蛋白样品，含有100mMNaCl50μL10mg/mL蛋白样品，含有100mMNaCl100mMNaCl500μL1mg/mL蛋白样品，含有10.9mMNaCl加入450μL10mMNaCl或选定的缓冲液50μL10mg/mL蛋白样品，含有10.9mMNaCl10.9mMNaCl离心浓缩5性能-DNA浓缩对于137至1159bp的双链DNA，使用Amicon®Ultra-0.530K超滤管可以得到回收率和离心时间的最佳平衡。为了实现最高的PCR产物回收率并去除超过20个碱基的引物，建议使用Tris-EDTA（TE）缓冲液进行一到两次额外的离心。离心时间(分钟）表1.Amicon®Ultra-0.5超滤管对核苷酸的典型回收率PCR产物（碱基对）137102048≥95≥90≥90≥90≥85≥75012301102048≥90≥85≥90≥90≥90≥80012657102048≥95≥90≥95≥90≥90≥900121159102048≥90≥90≥95≥90≥95≥95012PCR引物（碱基）PCR产物回收率（%）PCR引物去除率（%）TE洗涤（次数）离心条件：40º固定角度转子，14,000xg，室温，100μLPCR样品和400μLTE缓冲液合计起始体积500μL，20-30μL终体积，10分钟离心，n=12。性能-蛋白质浓缩流速影响流速的因素包括样本浓度、起始体积、溶质的化学性质、相对离心力、离心转子的角度、滤膜类型以及温度。图1和表2给出了各种蛋白质分子量标准达到特定的滤出液体积或浓度所需的时间。500μL样本的典型离心时间大约是10至30分钟（取决于超滤管的标称分子量限值）。尽管大部分样本在离心开始后的前5至10分钟发生过滤，但在离心10至30分钟后才能达到最低的浓缩液体积（15-20μL）。图1.典型的滤出液体积与离心时间滤过液体积(µL)离心条件：40º固定角度转子，14,000xg，室温，500μL起始体积操作样品：3K和5K超滤管用的样品是细胞色素c、30K和50K超滤管用的样品是BSA，100K超滤管用的样品是IgG。n=8。6表2.典型的浓缩液体积/浓缩系数与离心时间3K超滤管10K超滤管30K超滤管50K超滤管100K超滤管521527474212281858910114442122322202519261580627181927173015332062820251730153313363048101730153215361141离心时间（分钟）浓缩液体积（μL）浓缩系数（倍）浓缩液体积（μL）浓缩系数（倍）浓缩液体积（μL）浓缩系数（倍）浓缩液体积（μL）浓缩系数（倍）浓缩液体积（μL）浓缩系数（倍）离心条件：40º固定角度转子，14,000xg，室温，500μL起始体积。操作样品：3K和5K超滤管用的样品是细胞色素c，30K和50K超滤管用的样品是BSA，100K超滤管用的样品是IgG。n=8。带灰色背景的体积数值将被用来计算表4中的蛋白回收率。蛋白质截留率和回收率Amicon®Ultra超滤管的滤膜的截留能力采用标称分子量限值NMWL来进行衡量，是指可截留特定分子量以上的溶质分子。分子量接近NMWL的溶质可能只有部分被截留。滤膜的截留率取决于溶质的分子大小和形状。在大多数应用中，分子量是用来评估截留特性的一个方便的参数。默克密理博公司（Millipore）建议超滤膜的NMWL应该是想要浓缩的蛋白质溶质分子量的1/2~1/3。请参看下表。表3.蛋白质分子量标准的典型截留率α-Chymotrypsinogen(1mg/mL)25,0003K9530Cytochromec(0.25mg/mL)12,4009530VitaminB-12(0.2mg/mL)1,3504230α-Chymotrypsinogen(1mg/mL)25,00010K9515Cytochromec(0.25mg/mL)12,4009515VitaminB-12(0.2mg/mL)1,3502315BSA(1mg/mL)67,00030K9510Ovalbumin(1mg/