发酵罐无菌试验

发酵罐无菌试验在生产抗生素过程中，为了能尽早发现染菌是否存在并对其进行恰当处理，保证正常生产，对菌种制备、种子罐、发酵罐的接种前后和培养过程中，必须要按照相应的工艺规程要求按时取样，进行发酵罐无菌试验。发酵罐无菌试验是指培养液是否污染杂菌，可从三个方面进行分析：1、无菌试验，2、培养液的显微镜拉查，3、培养液的生化指标变化情况。其中无菌试验是判断染菌的主要依据。现在采用的发酵罐无菌试验方法主要有肉汤培养法、双碟培养法、斜面培养法这三种。其中以酚红肉汤培养法和双碟培养法相结合起来，进行的发酵罐无菌试验用的较多。发酵罐无菌试验1：肉汤培养法是指直接用装有酚红肉汤的无菌试管来取样，然后将无菌管放入37℃恒温室(箱)内培养。定时观察试管内肉汤培养基的颜色是否变化，同一时进行显微镜观察。发酵罐无菌试验2：斜面培养法是指先用空白的无菌试管取样，然后在无菌条件下接种于斜面培养基上，置于37℃恒温室(箱)内培养。定时观察有无杂菌菌落生长。发酵罐无菌试验3：双碟培养法是将种子罐样品先取入肉汤培养基中,然后在无菌条件下在双碟培养基上面划线，剩下的肉汤培养物在恒温室(箱)内培养6小时后再划线一次，发酵罐培养液直接取入空白无菌试管中，于37℃恒温室(箱)内培养6小时后在双碟培养基上划线。24小时内的双碟定时在灯光下检查有无杂菌生长。24小时~48小时的双碟1天检查一次，以防生长缓慢的杂菌漏检。正常生产过程中，种子罐和发酵罐每隔8小时取样一次，进行无菌检查。该方法经常用于单菌落挑选，可以从染有杂菌的培养液中经多次划线挑取单菌落进行分离培养，得到纯种的种子。发酵罐无菌试验的结果一般需要8~12小时才能作出判断。为了缩短判断时间，有时向培养基中加入赤霉素、对氨基苯甲酸等生长激素可以促进杂菌的生长。