PAS染色法

PAS染色法-概况、原理PAS染色法概况PAS染色法（PeriodicAcid-Schiffstain）在组织学上，主要用来检测组织中的糖类。过碘酸把糖类相邻两个碳上的羟基氧化成醛基，再用Schiff试剂和醛基反应使呈现紫红色。PAS染色法原理PAS染色又称过碘酸雪夫染色，糖原染色。一般用来显示糖元和其它多糖物质。原理：过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛，再与Schiff氏液的无色品红结合，红色，定位于胞浆上。PAS染色法-应用、制作PAS染色法-应用随着医学实验技术的发展，近年来，糖原染色应用的范围更加广泛，如用以证明与鉴别细胞内空泡状的性质，心肌病变及其他心血管疾病的诊断，糖原累积病诊断和研究，糖尿病的诊断和研究，用于某些肿瘤的诊断等。除用于糖原的鉴定和黏液的显示外，还可以观察肾小球基底膜、结肠杯状细胞中性黏液物质、阿米巴滋养体和霉菌的着色。临床诊断、分类和治疗提供了重要的依据。PAS染色法-制作1.固定液:用Carnoy液或75%酒精Carnoy固定液:纯酒精60ml冰醋酸10ml氯仿30ml2.染色液1)过碘酸酒清夜配法:过碘酸(HIO.2HO)0.4g95%酒精35mlM/5醋酸钠(2.72g+蒸馏水100ml)5ml蒸馏水10ml。保存于冰箱内,用棕色瓶,可用两周.2)Schiff氏液:0.5克碱性品红加入100毫升蒸馏水中,时时摇动三角瓶5分钟,使之充分溶解.冷却至50℃后过滤,加入10毫升1N盐酸.冷却至25℃,加入0.5-1克偏重硫酸钠,在室温中至少静置24小时,然后密封冰箱保存.3)Schiff氏酒精液配置Schiff氏液11.5ml1NHCI0.5ml纯酒精23ml4)亚硫酸水1%偏重亚硫酸钠10ml1NHCI10ml蒸馏水180ml的树胶溶解。PAS染色法-实验效果准备1、10g/L过碘酸液2、Schiff染液：碱性品红0.5g，DH2O100ml煮沸后，待片刻，加入碱性品红，振荡数分钟使品红溶解，冷至50℃加入1M的盐酸20ml，混匀。待冷却至25℃加入偏重亚硫酸钠0.5g，混合，置于带塞的棕色瓶中，放于暗处24小时，染液为无色，如为微红则加活性炭1－2g，混合过滤，如过滤液仍有红色，应再加少许活性炭，时红色完全被吸收为止。制成后置于棕色瓶内保存在冰箱备用，如变为红色，则不能使用。4、苏木素液：苏木素0.9g，95%乙醇10ml铵（钾）明矾20gDH2O200ml将苏木素溶于95%的乙醇，钾明矾溶于水（可加热），然后将苏木素液加入明矾液中混合，用强火煮沸后加氧化汞0.5g，迅速搅拌，成深紫色，迅速移入冷水中，次日过滤，临用时取此液95ml加冰醋酸5ml，可使细胞着色清楚。方法：1、将新鲜血片或骨髓片用95%乙醇固定10分钟。2、10g/L过碘酸液作用20分钟3、DH2O洗涤几次，晾干4、Schiff染液，60分钟5、用自来水洗涤15分钟（细水长流冲洗）6、苏木素染液10分钟。7、自来水冲洗15分钟，待干。结果：阳性反应，胞浆呈红色，阴性反应，胞浆呈无色；在正常血片中RBC不染色；PLT染成深红色；中性粒细胞胞浆染成红色或深红色，有些细胞有阳性颗粒；单核细胞的胞浆染成淡红色，可含有细小或粗大阳性颗粒；少数淋巴细胞的胞浆内含有少许小的淡红色或红色颗粒；正常骨髓的幼稚细胞和有核RBC都不染色；巨核细胞的胞浆内呈弥散红色或深红色。巨核细胞的胞浆内呈弥散红色或深红色。