血红蛋白检测的临床意义

血红蛋白检测的临床意义PRESENTS2血红蛋白的结构血红蛋白分子是由4条多肽链(珠蛋白链)和4个可以结合铁和氧气的血红素组成.GlOBIN(珠蛋白)-由多肽链组成的蛋白,根据其不同的氨基酸序列进行分类(主要分四类:a,b,g及d)。-这几类多肽链上的大部分结构都是相似的。血红蛋白的化学特性及酶活性与氧气的结合:通过将氧气分子固定在二价铁原子上，血红蛋白是将氧气从肺部运输到人体组织中。CO2的运输:与CO的结合:碳氧血红蛋白的形成(Carboxyhemoglobinformation)。血红蛋白的氧化作用:形成高铁血红蛋白酶活性:氧化酶特性,过氧化酶特性,脆化酶特性...血红蛋白的电泳条带正常范围Formsobtainedbyglycation5to8%HbA1:a2b2新生婴儿体内的血红蛋白主要成分2%(traces)HbF:a2g2微量组成部分3.5%HbA2:a2d2主要组成部分96.5%HbA:a2b2-9-6-30369dbag出生前出生后months血红蛋白的多肽链合成曲线血红蛋白遗传病遗传性疾病基因学图谱：正常基因异常基因血红蛋白遗传病(HEMOGLOBINOPATHIES)非正常血红蛋白的含量测定:珠蛋白链合成异常或者合成过程中的调控异常地中海贫血病（Thalassemia）非正常血红蛋白的检测:结构异常,一个或数个氨基酸变异或缺失,都将会导致血红蛋白分子的电性发生改变血红蛋白分子病（HbVariants）血红蛋白疾病的区域分布图Thalassemias全世界范围内经结构分析证实的异常血红蛋白日益增多，至90年代初期已达600多种，但仅不到1／3的异常血红蛋白伴有临床症状。世界卫生组织估计，全球约有1.5亿人携带血红蛋白病基因，并已将血红蛋白病列为严重危害人类健康的6种常见病之一。:a-地中海贫血病:b-地中海贫血病:一组遗传性的珠蛋白链的合成不对称.地中海贫血病abdgNormalHbA=a2b2HbA2=a2d2HbF=a2g2abdga-Thalassemiab4=HbH血红蛋白H病临床表现：有轻、中度贫血，2／3以上病例有肝脾肿大，常反复出现黄疸。父母双方常有－地中海贫血。实验室检查：有溶血性贫血的特征，骨髓中红细胞系统增生极度活跃.HbH明显增高(2.5％～40％)，HBA2及HbF含量正常。Hb电泳可出现HbH区带。红细胞渗透脆性试验降低，红细胞包含体阳性。=HbBart’sabdgb-ThalassemiaIncreasedHbA2(4-6%)*为广州地区资料；**α地贫1检出率4.205.00**1.103.40台湾香港四川8.30**14.951.523.360.182.182.601.92中国南方地中海贫血主要分布区人群中的基因携带率广西广东*江西地区基因携带率（%）α-地贫β-地贫血红蛋白疾病的研究：疾病的区域性特征较强。在检测中发现异常:(小红细胞症,血红蛋白过少,Heinzcorps,...)出现无法解释的异常溶血现象....对全部家族成员进行血红蛋白的检测.血红蛋白疾病的检测方法Electrophoresis:醋酸纤维素薄膜电泳／琼脂糖凝胶电泳)HPLC:高效液相色谱法Capillarys:高效毛细管电泳法血红蛋白检测是测量正常血红蛋白的量或异常血红蛋白当医生怀疑患者有血红蛋白病或贫血查因时将血红蛋白置于电场中，由于带电量不同，各组分分离开形成不同的、特异性的“bands”将这些“带”与正常人样本比较，得出诊断传统电泳•Agarose电泳•Cellulose电泳研究报告已指出這二种方法对α、β型地中海型贫血的区别诊断只有95%的能力，尚有5%的模糊地带。(HbA2cut-off值定在3.5%)DeterminationofHbvariantsCelluloseEpforHbvariantsAgarosegelEpforHbvariantsHPLC毛细管电泳工作原理温控器正极+负极-检测器氘光源电泳……高电压10000VA/E异源基因型Anh.Car.AE+A2Alk.NA0A1A1+E1Ac.NA0+EHbAHbA2HbECapillarys/Minicap区带识别表Z15:HbHZ14://Z13:Hb-JRovigo,HbN-Baltimore,J-KaoshiungZ12:HbBart’s,HbProvidence,HbJ-Mexico,HbJ-Baltimore….Z11:HbKaoshiung(NewYork),denaturatedHbAZ10:HbHope,HbM-IwateZ9:HbA,HbCamperdown,HbPhnomPenh……Z8:AcetylatedHbF,HbAltanta,HbAthens-GAZ7:HbF,denaturatedHbS,HbPorto-Allegre……..Z6:HbD-Punjab,HbPhiladelphia,HbKorle-Bu,HbLepore,HbKöln,denaturatedHbE….Z5:HbS,HbHasharon,HbHandsworth,denaturatedHbO-Arab.Z4:HbE,denaturatedHbC,HbKöln,HbA2variants,M-IwateHbA2variantsZ3:HbA2,HbO-ArabZ2:HbC,HbConstantSpring,SetifHbA2variantZ1:HbdA2HbaA2,HasharonHbA2variant,WinnipegHbA2variant……血红蛋白疾病的研究：在我国南方如何防治地中海贫血是关系到提高我国人口素质和实现优生优育中的一个重要课题.目前婚前和孕前的检查、干预是防止这种遗传病发生的有效手段.其中血红蛋白(Hb)电泳是研究和分离异常血红蛋白的有效方法,亦是诊断血红蛋白分子病不可缺少的手段之一.Hb电泳检查的临床意义a-地中海贫血b-地中海贫血异常血红蛋白病地中海贫血检查的临床意义•贫血的鉴别诊断__自身免疫性溶血性贫血与地中海贫血•地中海贫血的分型•黄疸的鉴别诊断__肝炎与地中海贫血α－地中海贫血1．静止型α－地中海贫血2．标准型或轻型3．血红蛋白H病4．血红蛋白Bart’s胎儿水肿综合征a2a1a2a1Chromosome16gGgAdbHS1-6gGgAdbHS1-6Chromosome11α－地中海贫血血红蛋白H病临床表现：有轻、中度贫血，2／3以上病例有肝脾肿大，常反复出现黄疸。父母双方常有α－地中海贫血。实验室检查：有溶血性贫血的特征，骨髓中红细胞系统增生极度活跃.HbH明显增高(2.5％～40％)，HBA2及HbF含量正常。Hb电泳可出现HbH区带。红细胞渗透脆性试验降低，红细胞包含体阳性。α－地中海贫血血红蛋白Bart’s胎儿水肿综合征临床表现：该病为α—地中海贫血中最严重者，胎儿常于妊娠后期死亡或早产。胎儿生下时，全身水肿，皮肤苍白，黄疸，肝脾肿大，常于产后数小时内死亡。父母双方均有HbH病或标准型α—地中海贫血。实验室检查：有溶血性贫血的特征，骨髓红系增生活跃。红细胞形态靶形红细胞明显增多，外周血可见有核红细胞。Hb电泳：HbBart成分＞8％，抗碱Hb增加Bart’sHbAlkAcα－地中海贫血α-地贫HbHHbBaHbC-SHbAa-Thalassemia异常靶细胞小红细胞贫血HbFHbA2HbH其他特征一条链缺失000正常正常0出生时少量的(~2%)HbBart’s2条链缺失000正常正常或减少0出身时HbBart’s(~5%)3条链缺失++轻微的到严重的也许增加减少10-15%不稳定血红蛋白溶血性贫血(HbH)4条链缺失--严重的100%HbBart’s00胎儿水肿综合症(hydropsfetalis)β-地中海贫血定义：由于β珠蛋白基因的突变，引起血红蛋白β链合成的减少或缺乏而形成的溶血性贫血。定位：β基因在11号染色体上，每条染色体上有1个基因重型b地贫（bT/bT），重型b珠蛋白生成障碍性贫血(Cooley贫血)半周岁时出现贫血，肝脾肿大特殊面容:大头、颧骨突出、塌鼻梁、眼距过宽、脸浮肿轻型b地贫（bT/bN），轻型b珠蛋白生成障碍性贫血一般无任何临床症状重型β地贫儿βN/βTβN/βTβN/βNβN/βTβN/βTβT/βT夫妇双方都是轻型β地贫携带者,每次怀孕有1/4的机会生育重型β地贫儿.如何筛查α-地贫筛查对象：α-地贫性状（--/αα）和HbH病（--/-α）筛查方法：血常规、Hb分析α-地贫筛查阳性：α-地贫性状（--/αα）MCV↓、HbA2正常（或稍低）HbH病（--/-α）MCV↓、HbA2降低、HbH（+）α-地贫性状（--/αα）HbH病（--/-α）如何筛查b-地贫（βT/βN）筛查方法：血常规、Hb分析筛查阳性：MCV↓、HbA2↑(3.5%)βT/βNCapillaryHemoglobinElectrophoresisHbEChenetal.TheNewEnglandJournalofMedicine2000;343(8):544–550谷氨酰胺31非缺失型α-地贫的人群筛查确定筛查人群当一方为SEA携带者时，应筛查另一方是否携带非缺失型α-地贫。非缺失型α-地贫的人群筛查筛查方法MCV（MCH）？Hb分析？基因诊断？Hb分析筛查CSHPLC敏感性76.2%76.2%76.2%(Liaoetal.Hemoglobin201034:175)Hb分析筛查CSCapillaryelectrophoresis(SebiaCapillarys2)敏感性100%(Liaoetal.Hemoglobin201034:175)血红蛋白异常变异体的电泳原理在电场作用下，不同的带电属性的分子移动能力也各有不同。HYDRAGELHbandCAPILLARYSHb有助于检测出具有临床意义的各类主要血红蛋白疾病。HYDRAGELACIDHb根据血红蛋白在不同酸碱度的琼脂糖胶体上的移动性的差异，从而对血红蛋疾病进行检测。各类血红蛋白的鉴定HbS,HbC,HbD,HbE,excessHbF,HbH,HbBart(inthalassemia)arethemostcommonabnormalhemoglobins.完整的血红蛋白鉴定，需要在两种琼脂糖胶体上电泳条带进行对比。正常条带AA2Alk.Anh.Car.Ac.A0A13周新生儿的电泳条带Anh.Car.AfaibleA2Alk.FNA1Ac.F+A1A0A0N8周新生儿的电泳条带Anh.Car.AfaibleA2Alk.NFA1Ac.NF+A1A0A0毛细管电泳仪上的正常血红蛋白电泳曲线HbAHbA2AFSC电泳监控条带HbFHbA52,7%HbF21,4%HbS18,8%HbA21,3%HbC5,8%HbSHbAHbA2HbC“S”型血红蛋白SickleCellsdisease常见区域:地中海区域国家,非洲赤道区域国家(40%),美洲非裔人群(10%),印度西部特征:变异体位置b6谷氨酸Glu(negative)→缬氨酸Val(neutral)生物学症状:红细胞形状出现变异,形成镰刀型红细胞血红蛋白与氧气结合能力出现下降极易出现溶血现象和贫血症临床特征:依照形态的不同有所改变.杂合子:镰刀状细胞(一般无症状)HbA条带:50–70%HbS条带:30–50%HbA2条带:正常纯合子:严重的溶血症状HbA条带:缺失HbS条带:80–100%HbA2条带:正常或增加(HbF条带大约占0–20%)伴随HbS型血红蛋白，会同时出现:+地中海贫血+HbC(或其他变异体)+HPFH脐带血的”S”纯合子NFA2Alc.Anh.Car.NAc.A0A1A1+FSAFSCcontroloverlayingSHbA2HbSHbFHeterozygoteA/SNAA2Anh.Car.Alk.SFNAc.A0A1A0A1+FSHomozygoteSwithpresenceH