槐米中芦丁含量的测定

槐米中芦丁含量的测定BREADPPTDESIGN槐树原产于中国。它用途广泛，功能大，是一种集药用、食用、保健、观赏于一身的优良树种。槐树自古是治病的重要药源植物，被誉为“金药树”槐树依据其花色分为白、青、黄、金槐等4个类别.除了国槐外，槐树还有龙爪槐、蝴蝶槐、金叶国槐、五色槐、黄金槐、双季米槐、香花槐和金花槐等变种。它全身都是药，花、叶、枝、根、果实及种子均可入药，以槐花入药最普遍。洋槐五月开花，其花一般食用，国槐七八月才开花，其花入药。故我国药用槐米多出自国槐。金药树—槐树BREADPPTDESIGN槐米2010年《中华人民共和国药典》规定，槐树的药用部分为干燥的花朵及花蕾。前者习称“槐花”，后者习称“槐米”。槐米中含有芦丁、槲皮素、皂甙、多糖黏液质等成分，其中,芦丁是主要药用成分,因此对其研究有非常现实的意义。BREADPPTDESIGN芦丁芦丁是一种黄酮类化合物。槐米中的芦丁随槐花的产地及收取时间的不同其含量在10%～28%之间，我国芦丁生产主要以槐米为原料。BREADPPTDESIGN芦丁的药理作用抗炎作用抗氧化作用抗菌作用抗癌作用对脑缺血损伤的保护作用对肾脏缺血损伤的保护作用降血压作用胃肠粘膜保护作用BREADPPTDESIGN芦丁的化学特性芦丁分子式C27H30O16，分子量610.51，为浅黄色针状结晶，难溶于冷水，可溶于热水、甲醇、乙醇、吡啶，易溶于碱水。BREADPPTDESIGN芦丁提取技术概述13245醇溶剂浸提法热水提取法碱提酸沉降法超声辅助提取法微波提取法BREADPPTDESIGN超声波辅助提取法利用超声波的空化效应、湍流效应、微扰效应、界面效应和聚能效应等物理作用，加速被破碎物细胞壁的破裂，促进细胞内含物的溶出，从而实现天然产物低温、快速提取的目标。具有杂质含量低、有效成分含量高、提取时间短的优点。芦丁为细胞中的次生代谢产物，存在于细胞质中；通过粉碎，破坏细胞壁和细胞膜，也就使芦丁易于被提取出来。碱液对芦丁有增溶作用，用碱液浸泡后，能使更多的芦丁溶解出来，同样也有利于芦丁的提取。BREADPPTDESIGN水平因素ABC料液比提取时间温度11:1071521:15102531:201335因素设计查正交实验表，根据L9（34）设计实验BREADPPTDESIGN试验号水平组合实验条件料液比提取时间温度1A1B1C11:107152A1B2C21:1010253A1B3C31:1013354A2B1C21:157255A2B2C31:1510356A2B3C11:1513157A3B1C31:207358A3B2C11:2010159A3B3C21:201325BREADPPTDESIGN实验流程槐米粉碎过40筛目按一定料液比混合加入亚硫氢钠、硼砂,用氢氧化钠调PH至9超声提取酸沉用盐酸将PH调至3离心过滤芦丁粗提产品滤液静置、干燥BREADPPTDESIGN芦丁标准曲线的绘制精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁标准品200mg，置100mL容量瓶中，加甲醇70mL，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取10mL，置100mL量瓶中，加水至刻度，摇匀即得（每1mL中含无水芦丁0.2mg）。精密量取上述标准溶液0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL与6.0mL分别置25mL容量瓶中，各加水至6mL，加5％亚硝酸钠溶液1mL使混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1mL摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10mL，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟；按照分光光度法，在500nm的波长处比色测定吸光度，以吸光度为纵坐标，芦丁浓度为横坐标，绘制标准曲线。BREADPPTDESIGN取干燥芦丁粗品约1g，精密称定，加甲醇溶解后移入100mL容量瓶，再加甲醇洗涤并入容量瓶，加甲醇至刻度，摇匀。精取10mL置100mL容量瓶，加水至刻度，摇匀。精密量取3mL置25mL容量瓶中，按照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6mL”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的浓度，计算即得槐米中芦丁的提取得率。芦丁的提取率测定BREADPPTDESIGN芦丁的纯化——大孔树脂减法测定法树脂的预处理新鲜树脂先用乙醇浸泡2次，每次12h，滤去浮游物和破碎树脂，再用甲醇浸泡2～3次至上清液澄清，最后用去离子水清洗1～2次.采用湿法上柱，并用和洗脱剂同浓度的甲醇水溶液冲洗2～3柱体积，以达到该浓度下的平衡状态。用过的树脂，用足量甲醇浸泡使吸附物解吸达到再生的目的。如果反复使用树脂吸附效果下降，可用3%NaOH及10%NaCl混合液浸泡清洗12h，滤去溶剂并用去离子水充分洗涤至呈中性时即可。BREADPPTDESIGN提纯方法将粗品溶于75%的75℃甲醇溶液中(m:v≈1:7)，待完全溶解趁热过滤；滤液缓慢加入大孔树脂色谱柱中(粗品芦丁与树脂质量比1:10)，待滤液完全浸入大孔树脂后，分别以75%的甲醇溶液为洗脱剂自然流速进行洗脱，待洗脱液颜色由无色变深后，开始第一次收集，至颜色由深变浅结束，将收集的洗脱液在常温下自然静置析晶，过滤并用少量甲醇洗涤滤饼后真空干燥，获取最终产品;第一次收集结束后，改用纯甲醇溶液进行洗脱，待颜色有浅变深开始第二次收集，直颜色变无色结束，将第二次收集的洗脱液减压蒸馏获取浸膏，干燥后获得的产品用作下次纯化工艺过程的粗品芦丁原料。BREADPPTDESIGN芦丁对超氧阴离子O2÷清除作用用邻苯三酚自氧化法,利用O2÷清除剂能使邻苯三酚自氧化产物在325nm处的吸收峰受到抑制这一特点,用紫外分光光度计进行检测,间接测得O2÷生成及O2÷的清除率。原理BREADPPTDESIGN用实验纯化所制的芦丁配置成20、40、60、80、100μmol/L的溶液.取0.05mmol/LpH8.2的Tris-HCl缓冲液4.5mL于试管中,25℃预热20min，加入0.1mmol/L邻苯三酚0.2mL，不同浓度药物0.2mL，蒸馏水0.1mL，25℃水浴准确反应4min时测定A325值，记为A样品。另取试剂同上，不加药物，加0.3mL蒸馏水补充体积，作为对照，同样准确反应4min测A325值，记为A损伤。计算清除率及SC50。实验操作BREADPPTDESIGN谢谢聆听！